禽脑脊髓炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用
发布时间：2021-02-10 23:59
禽脑脊髓炎（avianencephalomyelitis，AE）首次在1932年被描述为一种侵害雏鸡的一种病毒性传染病。此后，已波及世界大多数国家，该病的特征是雏鸡表现为头和颈部的快速震颤和运动共济失调；产蛋鸡被该病毒感染后表现为一过性产蛋下降，不表现出神经症状，给养禽业尤其是种禽养殖业造成了较大的经济损失。目前传统的禽脑脊髓炎病毒（avianencephalomyelitisvirus，AEV）的检测方法存在费时费力、特异性差、容易被污染等缺点。因此，建立一种针对AEV的特异、敏感、可靠的检测方法势在必行。本研究旨在建立一种基于SYBRGreenI的AEV荧光定量RT-PCR检测方法，为AE高效检测及准确定量提供一种可靠的新方法。结果如下：根据GeneBank中AEV1143株基因序列，在高度保守的VP1基因序列区域设计一对荧光定量用特异性引物，用RT-PCR的方法扩增出AEVSX株VP1基因的部分序列（288bp），用常规方法对目的片段进行克隆并进行双酶切鉴定，测定重组质粒的浓度并通过测序比对进行鉴定，重组质粒的序列与AEVSX株的VP1基因序列100%匹配，质粒浓度为126ng/...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
AEVSX株VP1基因片段PCR扩增结果
计算重组质粒浓度为 126 ng/μL， OD26为 3.99 × 1011拷贝/μL。条件的优化结果试验，证明反应体系为 20 uL 体系时ol/ul) 时特异性最强，扩增效率最合M.DNA 标准 DL 5 000;1 . 酶切鉴定；Marker DL 5000; 1.The enzyme digestion id 3-2 VP1 基因片段重组质粒的酶切鉴定he enzyme digestion identification of VP1 g17
5 10 15 20 25 30 3Cycle107106103104105102NC. 无模板的阴性对照;NC. Negative control图 3-6 荧光定量 RT-PCR 的敏感性Fig. 3-6 Sensitivity of the real-time PCR.
本文编号：3028187
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
AEVSX株VP1基因片段PCR扩增结果
计算重组质粒浓度为 126 ng/μL， OD26为 3.99 × 1011拷贝/μL。条件的优化结果试验，证明反应体系为 20 uL 体系时ol/ul) 时特异性最强，扩增效率最合M.DNA 标准 DL 5 000;1 . 酶切鉴定；Marker DL 5000; 1.The enzyme digestion id 3-2 VP1 基因片段重组质粒的酶切鉴定he enzyme digestion identification of VP1 g17
5 10 15 20 25 30 3Cycle107106103104105102NC. 无模板的阴性对照;NC. Negative control图 3-6 荧光定量 RT-PCR 的敏感性Fig. 3-6 Sensitivity of the real-time PCR.
本文编号：3028187
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