鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的原核表达

发布时间：2021-02-11 01:01

　　鸡传染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease，IBD）是由传染性法氏囊病病毒（Infectious Bursal Disease Virus，IBDV）引起的以侵害雏鸡淋巴组织，特别是中枢免疫器官——法氏囊为主要特征的传染病，每年给养禽业带来巨大经济损失。该病不仅会造成机体组织损伤，还会引起免疫抑制，降低机体的免疫防御能力，从而导致疫苗免疫接种失败。近年来，由于各地出现的IBDV变异株和超强毒株，现行疫苗免疫不足以应对这些新出现的挑战，造成IBD的流行情况呈现更为复杂的态势，给该病的防控造成较大困难。IBDV的VP2蛋白是该病毒粒子的主要结构蛋白，包含主要保护性抗原表位，因此VP2蛋白的重组表达和相关研究能够为IBDV的防治以及新型亚单位疫苗的开发提供有益的技术支撑和理论依据。本文参照IBDV-VP2标准基因序列，利用Java CodonAdaptation Too（lJCAT）软件对IBDV-B87株碱基密码子进行优化，合成目的基因，目的基因与pUC-57克隆载体连接为pUC57-VP2，双酶切pUC57-VP2和pET28a，提取目的基因并将目的基因与pET... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 IBD 临床症状与致病机理
        1.1.1 临床症状
        1.1.2 IBD 致病机理
    1.2 IBDV
    1.3 IBDV 基因组结构
    1.4 IBDV 衣壳蛋白
        1.4.1 VP1 蛋白
        1.4.2 VP2 蛋白
        1.4.3 VP3 蛋白
        1.4.4 VP4 蛋白
        1.4.5 VP5 蛋白
    1.5 IBDV 变异分子机制
    1.6 基因工程重组蛋白表达
        1.6.1 基因工程菌种
        1.6.2 蛋白表达质粒
        1.6.3 启动子
        1.6.4 融合标签
    1.7 IBD 疫苗研究现状
        1.7.1 传统 IBD 疫苗
    1.8 基因工程疫苗
        1.8.1 重组亚单位疫苗
        1.8.2 重组活病毒载体疫苗
        1.8.3 DNA 疫苗
    1.9 存在问题及防治前景
    1.10 研究目的与意义
2 鸡传染性法氏囊病病毒 VP2 蛋白原核表达
    2.1 材料和方法
        2.1.1 质粒、菌株
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 实验所用药物
        2.1.4 主要仪器
        2.1.5 部分试剂的配制
        2.1.6 目的基因 VP2 的获得
            2.1.6.1 目的基因序列
            2.1.6.2 目的基因 VP2 的提取
        2.1.7 构建重组质粒
            2.1.7.1 双酶切
            2.1.7.2 连接
            2.1.7.3 感受态细胞的制备
            2.1.7.4 连接产物的转化
            2.1.7.5 阳性重组质粒的筛选与鉴定
            2.1.7.6 阳性重组质粒的提取
        2.1.8 重组质粒 pET28a-VP2 的原核表达
        2.1.9 表达产物的鉴定
            2.1.9.1 SDS-PAGE 检测
            2.1.9.2 重组质粒的 Western-Blot 鉴定
            2.1.9.3 鸡传染性法氏囊抗体试纸条鉴定 IBDV-VP2 蛋白表达量
        2.1.10 重组融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达条件优化
            2.1.10.1 最佳诱导表达条件传染性法氏囊抗体试纸鉴定 IBDV-VP2 蛋白表达量
    2.2 结果
        2.2.1 基因双酶切鉴定结果
        2.2.2 重组质粒双酶切鉴定结果
        2.2.3 重组质粒 pET28a-VP2 诱导表达
        2.2.4 pET28a-VP2 重组蛋白的 Western blot 检测结果
        2.2.5 重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达条件优化
        2.2.6 最佳诱导条件下鸡传染性法氏囊抗体试纸条鉴定 IBDV-VP2 蛋白检测结果
    2.3 讨论
        2.3.1 表达系统的选择
        2.3.2 影响目的蛋白表达及其活性的因素
        2.3.3 IBDV-VP2 蛋白特征
参考文献
缩略词
个人简历、在学期间发表论文及研究成果
致谢



本文编号：3028265