猪圆环病毒3型去核定位信号的Cap蛋白原核表达

发布时间：2021-02-13 19:10

　　为探讨猪圆环病毒3型（PCV3）去核定位信号结构蛋白（Cap）的生物学功能及其在血清学检测中的作用,应用Oligo 7.0软件设计特异性引物序列,采用PCR方法从PCV3福建株阳性核酸中扩增获得其去核定位信号的Cap基因片段。将目的片段克隆到原核表达载体pET28a（+）上获得阳性重组表达质粒pET28a-Cap,进行原核表达条件优化。经SDS-PAGE分析其最优表达条件为IPTG浓度为0.4 mmol/L、37℃诱导表达4 h,目的蛋白大小约为25 ku。表达的去核定位信号Cap蛋白经Western blot和ELISA分析,具有良好的生物学活性。研究结果为开展PCV3去核定位信号基因功能研究和储备血清学诊断试剂盒奠定了基础。 

【文章来源】：动物医学进展. 2020,41(11)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

间接ELISA特异性检测

利用EcoRⅠ、HindⅢ对原核表达重组质粒pET28a-Cap进行双酶切,经10 g/L琼脂糖凝胶电泳分析,阳性重组质粒酶切后可见2个条带(pET28a载体条带和目的基因条带,约5 000 bp和550 bp),而阴性质粒仅1个条带(pET28a载体条带,约5 000 bp)(图1)。2.2 SDS-PAGE分析

将原核表达阳性重组质粒pET28a-Cap的菌液经不同浓度IPTG、不同温度和时间进行条件优化后,获得最适条件为IPTG浓度0.4 mmol/L、37℃诱导表达4 h。经SDS-PAGE检测,可见在25 ku左右处有1条明显的蛋白带,与预期结果相符,主要存在包涵体中(图2)。2.3 Western blot鉴定

【参考文献】：
期刊论文
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[3]V5标记的猪圆环病毒2型Cap蛋白重组杆状病毒表达载体的构建[J]. 徐国,梁海英,曾智勇,王彬,黄涛,汤德元,代振江,叶百川,张爱琼,何小莉,咸文.  中国畜牧兽医. 2018(07)
[4]圆环病毒Cap基因及其编码的衣壳蛋白研究进展[J]. 徐雨,贾仁勇.  病毒学报. 2013(04)
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本文编号：3032444