猪源益生芽孢杆菌的筛选及发酵工艺研究

发布时间：2021-02-16 01:33

　　随着饲用抗生素的滥用所导致的耐药性、药物残留、环境等问题的出现，抗生素替代品的研究成为热点。微生态制剂是通过改善宿主肠道内的微生态平衡从而发挥益生作用的生物制品，芽孢杆菌是微生态制剂的一种，其能形成内生孢子，具有强耐受性等优点。本研究从健康仔猪的粪便中分离筛选出对肠道常见病原菌具有拮抗作用的猪源益生芽孢杆菌、然后对其益生特性和安全性进行研究，得到一株安全无毒且具有良好益生性能的蜡样芽孢杆菌BC158，并通过单因素试验和响应面设计优化其发酵工艺，从而获得高密度培养工艺，具体研究结果如下：1、从健康仔猪（15-40日龄）粪便中分离到46株芽孢杆菌，通过对肠道常见病原菌拮抗性研究，筛选到3株能够拮抗病原菌（大肠杆菌O8、肠炎沙门氏菌和金黄色葡萄球菌）的芽孢杆菌，然后通过生理生化实验和16SrDNA序列分析，结果表明，3株菌都是蜡样芽孢杆菌，分别命名为芽孢杆菌BC158、BC234、BC236。2、对筛选到的三株蜡样芽孢杆菌BC158、BC234、BC236的益生性和安全性进行了研究，结果表明， BC158具有最好的潜在益生性，如粘附和抑菌性，且安全无毒，使其在动物饲料工业中具有良好的应用前景... 

【文章来源】：河南科技大学河南省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
    1.1 饲用抗生素的使用及存在的问题
    1.2 抗生素饲料添加剂的替代品
        1.2.1 益生菌制剂
        1.2.2 酶制剂
        1.2.3 酸化剂
        1.2.4 植物提取物
    1.3 饲用益生菌制剂的研究进展
        1.3.1 益生菌制剂的分类
        1.3.2 益生菌制剂需要具备的条件
        1.3.3 益生菌制剂在生产和使用中面临的问题
    1.4 饲用益生芽孢杆菌的研究
        1.4.1 芽孢杆菌的简述
        1.4.2 益生芽孢杆菌的种类
        1.4.3 益生芽孢杆菌的作用机理
        1.4.4 益生芽孢杆菌的应用
        1.4.5 影响饲用益生芽孢杆菌饲喂效果的因子
    1.5 蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）概况
    1.6 本课题的主要研究意义、研究内容
        1.6.1 本课题的研究意义
        1.6.2 主要研究内容
第2章 益生芽孢杆菌的分离筛选与鉴定
    2.1 材料
        2.1.1 样品
        2.1.2 菌种
        2.1.3 试剂
        2.1.4 主要仪器
        2.1.5 培养基
    2.2 试验方法
        2.2.1 芽孢杆菌的分离筛选
        2.2.2 分离菌株的革兰氏染色和芽孢染色
        2.2.3 抑菌试验
        2.2.4 生理生化实验
        2.2.5 16SrDNA 分子生物学鉴定
    2.3 结果
        2.3.1 芽孢杆菌的分离筛选
        2.3.2 抑菌性
        2.3.3 生理生化鉴定
        2.3.4 16SrDNA 的鉴定分析
    2.4 讨论
    2.5 本章小结
第3章 芽孢杆菌的益生性和安全性研究
    3.1 材料和试剂
        3.1.1 菌种
        3.1.2 实验试剂盒仪器
        3.1.3 培养基
        3.1.4 试验动物
    3.2 试验方法
        3.2.1 粘附性
        3.2.2 耐酸、耐胆盐试验
        3.2.3 水解酶试验
        3.2.4 耐高温试验
        3.2.5 抗生素抗性试验
        3.2.6 蜡样芽孢杆菌肠毒素检测
        3.2.7 小鼠饲喂试验
        3.2.8 平板计数
    3.3 结果
        3.3.1 粘附性
        3.3.2 酸、胆盐耐受性
        3.3.3 水解酶特性
        3.3.4 耐高温能力
        3.3.5 抗生素敏感性
        3.3.6 分离菌株的肠毒素检测
        3.3.7 小鼠饲喂试验
    3.4 讨论
    3.5 本章小结
第4章 高密度培养工艺研究
    4.1 材料与试剂
        4.1.1 菌种
        4.1.2 仪器和试剂
        4.1.3 培养基
    4.2 试验方法
        4.2.1 菌株生长特性研究
        4.2.2 发酵培养基单因素试验
        4.2.3 发酵培养基的响应面优化
        4.2.4 平板计数
    4.3 结果与分析
        4.3.1 菌株生长特性
        4.3.2 发酵培养基单因素试验
        4.3.3 发酵培养基组成的响应面优化
    4.4 讨论
    4.5 本章小结
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
附录 16SrDNA 序列测定结果
致谢
攻读硕士学位期间的研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]世界益生菌安全性评价方法[J]. 刘勇,张勇,张和平.  中国食品学报. 2011(06)
[2]荧光PCR检测蜡样芽孢杆菌及溶血素基因应用研究[J]. 王红,唐振柱,黄彦,孙贵娟,李秀桂.  广西医学. 2011(07)
[3]过量使用抗生素对畜牧业生产的影响[J]. 毛雪燕.  畜牧兽医科技信息. 2011(04)
[4]日粮中添加纳豆枯草芽孢杆菌对断奶前犊牛生长性能的影响[J]. 张海涛,王加启,卜登攀,栾绍宇,邓露芳,周凌云,周振峰,魏宏阳.  中国畜牧杂志. 2011(03)
[5]缢蛏多肽对免疫抑制小鼠免疫功能的影响[J]. 张永娟,吕学军,张大勇.  食品研究与开发. 2010(11)
[6]4株乳酸菌对14种抗生素的敏感性试验[J]. 甄丽,陈琳,彭虹旎,吕左航,王增元,孔垂彬.  中国微生态学杂志. 2010(05)
[7]纳豆芽孢杆菌对泌乳期奶牛产奶量、牛奶品质的影响[J]. 栾广春,王加启,卜登攀,刘仕军,邓露芳,陈强,周振峰,单安山.  东北农业大学学报. 2008(09)
[8]饲用抗生素的研究与应用进展[J]. 郭福有,马杰.  饲料工业. 2007(18)
[9]饲料添加山姜和蜡样芽孢杆菌对小鼠肠道菌群的影响[J]. 张金辉,潘康成,袁朝富,王艳明.  广东饲料. 2007(03)
[10]利用PCR技术检测致病性腊样芽孢杆菌的研究[J]. 王振国,刘金华,肖成蕊,蔡阳,罗雁菲,刘和平,牟峻.  生物技术. 2005(05)

博士论文
[1]猪源益生芽孢杆菌的分离筛选与应用研究[D]. 赵述淼.华中农业大学 2009

硕士论文
[1]乳酸芽孢杆菌益生素的制备及对断奶仔猪生产性能和血清学指标的影响[D]. 韩伟.广东海洋大学 2010
[2]益生芽孢杆菌的筛选、鉴定及发酵条件优化的研究[D]. 曹晓敏.福建师范大学 2009
[3]仔猪肠道益生菌的分离筛选及生物学特性研究[D]. 张丽芳.河北农业大学 2005



本文编号：3035899