单核细胞增多症李斯特菌LLS/LLO缺失株的构建及小鼠的免疫保护性研究

发布时间：2021-02-16 02:01

　　单增李斯特菌是食源性革兰氏阳性病原体,可穿越人体三大屏障,李斯特菌溶血素S（ListeriolysinS;LLS）是一种细菌素,调节宿主的肠道微生物菌群并使细胞产生溶血反应,帮助LM跨越血肠屏障,李斯特菌溶血素O（ListeriolysinO,LLO）是LM的主要致病因子,可溶解细胞吞噬体膜帮助LM逃离吞噬体,进入胞液并增值。以本实验室已成功构建并保存的LM90SB2Δlls为基础构建LM90SB2Δlls-Δllo缺失株,进行免疫保护性试验,探究LM90SB2及其重要毒力因子缺失株的免疫原性及人工胃液耐受性。方法:1.参考F2365菌株并设计引物,PCR分别扩增hly基因的上下游同源臂,运用重叠PCR技术得到Δhly融合片段再连接温敏穿梭载体pKSV7,得到质粒pKSV7-Δhl y,测序验证后将重组质粒电转入LM90SB2Δlls感受态细胞,在氯霉素与温度的双重压力下进行传代培养使菌株完成同源重组,期间运用旁外侧引物筛选出已成功同源重组的短带缺失株,并继续在30°C且无氯霉素抗性的条件下将传代从而获得无氯霉素抗性的LM90SB2Δlls-Δllo。2.测定LM90SB2和LM90S... 

【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述 单核细胞增多症李斯特菌的研究进展
    引言
    1 单增李斯特菌的生物学特性
    2 单增李斯特菌所含毒力因子及致病机理
        2.1 溶血素S
        2.2 溶血素O
    3 单增李斯特菌可诱发的免疫应答
    4 单增李斯特菌作为载体疫苗
    5 单增李斯特菌人工胃液耐受试验研究进展
第二章 试验研究
    试验一单增李斯特菌LM90SB2ΔLLS-ΔLLO的构建
        1 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 菌株和质粒
                1.1.2 主要试剂
                1.1.3 试验所需仪器
            1.2 方法
                1.2.1 引物设计合成
                1.2.2 LM90SB2SB2 菌株DNA的提取
                1.2.3 hly基因上下游臂的扩增
            1.3 构建pKSV7-Δhly质粒
            1.4 LM90SB2Δlls-Δllo缺失株的构建、筛选与鉴定
                1.4.1 制备LM90SB2Δlls感受态细胞
                1.4.2 电转化
            1.5 LM90SB2Δlls-Δllo缺失株遗传稳定性检测
        2 结果
            2.1 上下游臂的扩增
            2.2 hly基因重叠延伸PCR扩增
            2.3 重组穿梭质粒pKSV7-Δhly的鉴定
            2.4 LM90SB2Δlls-Δllo的鉴定
            2.5 遗传稳定性检测
        3 讨论
    试验二单增李斯特菌LM90SB2Δlls-Δllo部分生物学特性研究
        1 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 试验菌株
                1.1.2 实验动物
                1.1.3 主要试剂
                1.1.4 主要仪器
            1.2 方法
                1.2.1 测定LM90SB2、LM90SB2Δlls-Δllo的生长曲线
                1.2.2 LM90SB2与LM90SB2Δlls-ΔlloLD50 的测定
                1.2.3 LM90SB2与LM90SB2Δlls-Δllo脑肝脾载菌量的测定
        2 结果
            2.1 生长曲线的测定
            2.2 测定LM90SB2、LM90SB2Δlls-Δllo的半数致死量
            2.3 LM90SB2与LM90SB2Δlls-Δllo脑、肝、脾载菌量的测定
        3 讨论
    试验三 LM90SB2与LM90SB2Δlls-Δllo在人工胃液中的耐受性研究
        1 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 试验菌株
                1.1.2 主要试剂
            1.2 试验方法
                1.2.1 菌液的制备
                1.2.2 人工胃液的配置
        2 结果
        3 讨论
    试验四小鼠的免疫保护性研究
        1 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 试验菌株
                1.1.2 实验动物
                1.1.3 主要试剂及试剂盒
                1.1.4 主要仪器
            1.2 方法
                1.2.1 小鼠血清单增李斯特菌抗体含量检测
                1.2.2 小鼠免疫保护性试验
        2 结果
            2.1 小鼠血清单增李斯特菌抗体含量检测
            2.2 小鼠免疫保护率
        3 讨论
第三章 全文结论
参考文献
致谢
作者简介
导师评阅表


【参考文献】：
期刊论文
[1]加拿大食品安全协同治理建设举措及启示[J]. 杨丽贤,陈永法.  中国食品卫生杂志. 2020(01)
[2]单增李斯特菌致流产小鼠子宫中Th1和Th2细胞因子的变化[J]. 李文艳,张娜,李晓宁,刘纯甫,梁子腾,仲飞,管越强.  河北大学学报(自然科学版). 2020(01)
[3]单核细胞增生李斯特菌SigB调控GadD3的抗酸应激作用[J]. 王宜,方小伟,刘慧娟,万娇红,郭骞,张钰,田棋,方春.  动物医学进展. 2020(01)
[4]食源性单增李斯特菌LIPI-4基因的检测及序列分析[J]. 刘扬扬,康立超,马勋,李红欢,钱凌霄,李庆辉.  中国兽医学报. 2019(12)
[5]食源性单核细胞增生型李斯特菌arcD基因克隆及序列分析[J]. 刘扬扬,马勋,康立超,李红欢,钱凌霄,江婉琳,阮婷玉.  青海畜牧兽医杂志. 2019(06)
[6]单增李斯特菌溶血素O的PEST序列激活ERK1/2磷酸化的作用[J]. 马天天,杭奕,陶旗,俞晓蓉,祝艺然,宋厚辉,程昌勇.  微生物学报. 2020(02)
[7]食源性单增李斯特菌毒力岛基因检测与致病性[J]. 李红欢,陈朔,康立超,钱凌霄,张奇文,杜冬冬,马勋.  江苏农业科学. 2019(14)
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[10]食源性单增李斯特菌inlA/inlB/inlC基因缺失株的构建及其生物学特性分析[J]. 任静静,杨铭伟,陈云飞,尹华,王欣雨,李蓓蓓,蒋建军,王鹏雁.  中国畜牧兽医. 2019(01)

硕士论文
[1]单增李斯特菌感染依赖溶血素LLO触发ERK1/2磷酸化机制研究[D]. 马天天.浙江农林大学 2019
[2]单增李斯特菌氧化还原蛋白YjbH调控的抗氧化应激和细菌感染机制研究[D]. 韩笑.浙江农林大学 2019
[3]单增李斯特菌lmo2193基因缺失株的构建及其部分生物学特性研究[D]. 李红欢.石河子大学 2019
[4]单核细胞增生性李斯特菌llsB基因缺失株的构建及其部分生物学特性的研究[D]. 尹华.石河子大学 2018
[5]单增李斯特菌氨基肽酶Lmo1711以及鞭毛结构蛋白FlhB的生物学功能研究[D]. 王航.浙江农林大学 2018
[6]单增李斯特菌免疫检测方法的建立[D]. 赵萌.天津科技大学 2018
[7]餐饮业厨房中单增李斯特菌污染情况及控制方法[D]. 潘琳.东北农业大学 2017
[8]低温水产品中单增李斯特菌的危害评价及细菌素复合纤维的抑菌效应[D]. 张雪梅.广东海洋大学 2017
[9]单增李斯特菌ΔInlAB、ΔInlABC突变株的构建及部分生物学特性研究[D]. 陈云飞.石河子大学 2015
[10]单增李斯特菌溶血素O单克隆抗体的制备及其间接夹心ELISA检测方法的初步建立[D]. 孔德壮.西北农林科技大学 2010



本文编号：3035942