幼龄兔卵母细胞IVF及其早期胚胎有关基因表达研究
发布时间：2021-02-16 07:45
幼畜体外胚胎生产和移植技术（juvenile in vitro embryo transfer, JIVET）是一项集幼畜超数排卵、卵母细胞体外成熟、体外受精、胚胎体外培养及胚胎移植为一体的技术。JIVET技术能够大大地缩短家畜繁殖的世代间隔,充分发掘优良母畜的繁殖潜能,提高畜群的遗传改良速度与生产效率,为家畜育种提供丰富的遗传资源。体外受精技术是JIVET技术的一个重要环节,通过提高体外受精培养效果,能显著提高后期胚胎的生长及发育质量,有效地提高JIVET技术的生产效率。本研究以新西兰幼龄兔为主要研究对象,经幼龄兔超数排卵和卵母细胞体外成熟,对体外培养成熟的卵母细胞进行体外受精。在受精培养体系中添加不同浓度EGCG（0、5、10、15、20、25μM）,以研究抗氧化剂EGCG对精子获能及幼龄兔卵母细胞受精的影响,并且与受精液添加相同浓度EGCG的成年兔体外受精效果进行对比研究,旨在建立一种高效的培养体系,改善幼龄兔卵母细胞体外受精培养效果。并运用实时荧光定量技术对OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因在幼龄兔及成年兔体外受精生产胚胎中的相对表达量进行研究,从分子水平研究这两类早期胚胎...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
目录
符号说明
第一章 文献综述
1 幼畜体外胚胎生产和移植技术
1.1 幼畜超数排卵
1.2 卵母细胞体外成熟
1.3 体外受精
1.3.1 精子体外获能（In Vitro Capacitation）及机制
1.3.2 受精
1.4 体外胚胎培养
2 表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）
2.1 EGCG概述
2.2 EGCG抗氧化作用
2.3 EGCG在胚胎体外生产中的应用
3 OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因相关研究
3.1 OCT-4基因
3.2 GDF9基因
3.3 Bcl2基因
4 本次研究的目的与意义
参考文献
第二章 EGCG对新西兰兔卵母细胞体外受精的影响
1 试验材料
1.1 试验动物
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 器材的准备
1.4.1 玻璃器皿的准备
1.4.2 手术器械的准备
1.4.3 橡胶塞的处理
1.5 主要溶液配置
2 试验方法
2.1 试验安排
2.2 试验内容
2.2.1 超数排卵处理方法
2.2.2 卵母细胞获取
2.2.3 卵母细胞体外成熟
2.2.4 卵母细胞体外受精
2.2.5 精子获能评价
2.3 数据分析
3 试验结果
3.1 添加不同浓度EGCG对精子获能后顶体反应的影响
3.2 不同浓度EGCG对幼龄兔卵母细胞体外受精的影响
3.3 不同浓度EGCG对成兔卵母细胞体外受精的影响
3.4 幼龄兔与成年兔卵母细胞体外受精效果比较
4 分析与讨论
4.1 EGCG对精子获能的影响
4.2 EGCG在体外受精中的作用
4.3 幼龄兔与成年兔卵母细胞体外受精效果比较
参考文献
第三章 OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因在新西兰成年和幼龄兔胚胎中的差异表达研究
1 试验材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验试剂
1.3 试验仪器
1.4 溶液配制
2 试验方法
2.1 胚胎选择
2.2 总RNA提取
2.3 反转录
2.4 OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因PCR扩增
2.5 实时荧光定量PCR
2.6 统计分析
3 结果与分析
3.1 总RNA的检测
3.2 目的基因的扩增
3.3 实时荧光定量PCR产物的特异性检测
3.4 基因扩增效率一致性的判定
3.5 OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因在幼龄和成年兔胚胎中相对表达变化
4 讨论
4.1 OCT-4基因表达分析
4.2 GDF-9基因表达分析
4.3 Bcl-2基因表达分析
4.4 幼龄兔与成年兔基因表达量差异分析
参考文献
结论
致谢
攻读硕士期间发表论文及获得专利情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]羔羊卵母细胞体外胚胎生产影响因素分析[J]. 郭洪,万鹏程,代蓉,石国庆. 湖北农业科学. 2013(19)
[2]影响羔(绵)羊超数排卵效果因素的研究[J]. 张效生,张金龙,崔茂盛,李义海,冯建忠. 中国草食动物科学. 2013(05)
[3]精子获能时间及精卵共孵育时间对小鼠体外受精和胚胎发育的影响[J]. 段彪,杜海燕,张荣. 中华临床医师杂志(电子版). 2013(07)
[4]犊牛超数排卵方法的研究[J]. 郑自华,毛献宝,陈宝剑,潘斌,黎江,范晓明,沈创,韦英明. 中国畜牧兽医. 2012(07)
[5]羔羊超数排卵与胚胎体外生产技术研究进展[J]. 李运生,曹鸿国,刘亚,韩春杨,陶勇,张运海. 动物医学进展. 2011(11)
[6]Oct4基因的研究进展[J]. 郑鹏生,曹浩哲. 西安交通大学学报(医学版). 2010(05)
[7]温度对蓝狐精子获能的影响[J]. 于翠平,白玉妍,郭婷婷,刘志平. 黑龙江畜牧兽医. 2010(11)
[8]母源基因Gdf9、Zar1、Mater和Dnmt1 mRNA在绵羊卵母细胞和早期胚胎中的表达[J]. 侯敏,林嘉鹏,白洁,赵云程,汪立琴,陈世彬,叶小芳,黄俊成. 中国草食动物. 2010(02)
[9]哺乳动物的精子获能及其鉴定[J]. 张士芳. 黑龙江动物繁殖. 2010(02)
[10]异源Oct-4基因启动子在猪、兔和小鼠早期胚胎中的时空表达活性[J]. 张颖,史芳瑜,高绍荣,林爱星. 生物化学与生物物理进展. 2009(09)
硕士论文
[1]生长分化因子9对猪卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响及机制研究[D]. 李燕.南京师范大学 2013
[2]幼龄新西兰兔超数排卵及其不同日龄FSHR基因表达量变化的研究[D]. 邹恒.扬州大学 2010
[3]表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对昆明小鼠新鲜/冻融精子体外受精胚胎发育的影响[D]. 刘婉敏.汕头大学 2009
[4]兔GDF9的克隆与在性腺中的定位及表达丰度研究[D]. 季金强.扬州大学 2008
[5]小鼠体外受精胚与体内胚Oct4基因启动子区DNA甲基化差异的研究[D]. 储成风.安徽农业大学 2007
[6]不同添加物对牛卵母细胞体外成熟、体外受精及受精卵体外培养的影响[D]. 王红玲.南京农业大学 2005
本文编号：3036440
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
目录
符号说明
第一章 文献综述
1 幼畜体外胚胎生产和移植技术
1.1 幼畜超数排卵
1.2 卵母细胞体外成熟
1.3 体外受精
1.3.1 精子体外获能（In Vitro Capacitation）及机制
1.3.2 受精
1.4 体外胚胎培养
2 表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）
2.1 EGCG概述
2.2 EGCG抗氧化作用
2.3 EGCG在胚胎体外生产中的应用
3 OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因相关研究
3.1 OCT-4基因
3.2 GDF9基因
3.3 Bcl2基因
4 本次研究的目的与意义
参考文献
第二章 EGCG对新西兰兔卵母细胞体外受精的影响
1 试验材料
1.1 试验动物
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 器材的准备
1.4.1 玻璃器皿的准备
1.4.2 手术器械的准备
1.4.3 橡胶塞的处理
1.5 主要溶液配置
2 试验方法
2.1 试验安排
2.2 试验内容
2.2.1 超数排卵处理方法
2.2.2 卵母细胞获取
2.2.3 卵母细胞体外成熟
2.2.4 卵母细胞体外受精
2.2.5 精子获能评价
2.3 数据分析
3 试验结果
3.1 添加不同浓度EGCG对精子获能后顶体反应的影响
3.2 不同浓度EGCG对幼龄兔卵母细胞体外受精的影响
3.3 不同浓度EGCG对成兔卵母细胞体外受精的影响
3.4 幼龄兔与成年兔卵母细胞体外受精效果比较
4 分析与讨论
4.1 EGCG对精子获能的影响
4.2 EGCG在体外受精中的作用
4.3 幼龄兔与成年兔卵母细胞体外受精效果比较
参考文献
第三章 OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因在新西兰成年和幼龄兔胚胎中的差异表达研究
1 试验材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验试剂
1.3 试验仪器
1.4 溶液配制
2 试验方法
2.1 胚胎选择
2.2 总RNA提取
2.3 反转录
2.4 OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因PCR扩增
2.5 实时荧光定量PCR
2.6 统计分析
3 结果与分析
3.1 总RNA的检测
3.2 目的基因的扩增
3.3 实时荧光定量PCR产物的特异性检测
3.4 基因扩增效率一致性的判定
3.5 OCT-4、GDF-9、Bcl-2基因在幼龄和成年兔胚胎中相对表达变化
4 讨论
4.1 OCT-4基因表达分析
4.2 GDF-9基因表达分析
4.3 Bcl-2基因表达分析
4.4 幼龄兔与成年兔基因表达量差异分析
参考文献
结论
致谢
攻读硕士期间发表论文及获得专利情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]羔羊卵母细胞体外胚胎生产影响因素分析[J]. 郭洪,万鹏程,代蓉,石国庆. 湖北农业科学. 2013(19)
[2]影响羔(绵)羊超数排卵效果因素的研究[J]. 张效生,张金龙,崔茂盛,李义海,冯建忠. 中国草食动物科学. 2013(05)
[3]精子获能时间及精卵共孵育时间对小鼠体外受精和胚胎发育的影响[J]. 段彪,杜海燕,张荣. 中华临床医师杂志(电子版). 2013(07)
[4]犊牛超数排卵方法的研究[J]. 郑自华,毛献宝,陈宝剑,潘斌,黎江,范晓明,沈创,韦英明. 中国畜牧兽医. 2012(07)
[5]羔羊超数排卵与胚胎体外生产技术研究进展[J]. 李运生,曹鸿国,刘亚,韩春杨,陶勇,张运海. 动物医学进展. 2011(11)
[6]Oct4基因的研究进展[J]. 郑鹏生,曹浩哲. 西安交通大学学报(医学版). 2010(05)
[7]温度对蓝狐精子获能的影响[J]. 于翠平,白玉妍,郭婷婷,刘志平. 黑龙江畜牧兽医. 2010(11)
[8]母源基因Gdf9、Zar1、Mater和Dnmt1 mRNA在绵羊卵母细胞和早期胚胎中的表达[J]. 侯敏,林嘉鹏,白洁,赵云程,汪立琴,陈世彬,叶小芳,黄俊成. 中国草食动物. 2010(02)
[9]哺乳动物的精子获能及其鉴定[J]. 张士芳. 黑龙江动物繁殖. 2010(02)
[10]异源Oct-4基因启动子在猪、兔和小鼠早期胚胎中的时空表达活性[J]. 张颖,史芳瑜,高绍荣,林爱星. 生物化学与生物物理进展. 2009(09)
硕士论文
[1]生长分化因子9对猪卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响及机制研究[D]. 李燕.南京师范大学 2013
[2]幼龄新西兰兔超数排卵及其不同日龄FSHR基因表达量变化的研究[D]. 邹恒.扬州大学 2010
[3]表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对昆明小鼠新鲜/冻融精子体外受精胚胎发育的影响[D]. 刘婉敏.汕头大学 2009
[4]兔GDF9的克隆与在性腺中的定位及表达丰度研究[D]. 季金强.扬州大学 2008
[5]小鼠体外受精胚与体内胚Oct4基因启动子区DNA甲基化差异的研究[D]. 储成风.安徽农业大学 2007
[6]不同添加物对牛卵母细胞体外成熟、体外受精及受精卵体外培养的影响[D]. 王红玲.南京农业大学 2005
本文编号：3036440
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