猪丹毒丝菌抗原表位和表面分子结合肽的噬菌体展示以及初步分析
发布时间：2021-02-16 19:23
猪丹毒丝菌为革兰氏阳性无芽孢杆菌,主要对猪有致病作用,引起的疾病称为猪丹毒。本实验以猪丹毒丝菌为研究对象,应用噬菌体展示技术对其抗原表位和表面分子结合肽（SMBP）进行研究,主要实验如下：通过菌体抗原吸附和重组葡萄球菌蛋白A （SPA）亲和层析组合方法,从猪血清中纯化猪丹毒丝菌特异性多克隆抗体,应用噬菌体展示技术,从随机12肽库中筛选猪丹毒丝菌的模拟抗原表位。经过不同形式的三轮筛选,随机挑取224个噬菌体测序,总共获得36个模拟表位。同时以猪丹毒丝菌全菌作为靶分子,同样用噬菌体12肽库进行三轮不同形式的筛选,随机挑取144个噬菌体测序,获得66个猪丹毒表面分子结合肽（SMBP）。筛选的模拟表位通过间接ELISA方法验证有11个呈阳性,其中有三个与BSA（牛血清白蛋白）反应较高。免疫印迹分析这11个模拟表位,表位15（GPKSNNVGVTYS）具有反应原性。根据分子识别的反义肽理论,配体的反义肽应该与该配体相对应的受体具有同源性关系,反之亦然。本次实验筛选的36个猪丹毒模拟抗原表位有27个的反义肽（其中有9个是ELISA验证为阳性的表位）与其相对应的SMBP有同源性关系,虽然同源性不高,...
【文章来源】：湖南农业大学湖南省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
目录
第一章 文献综述
第一节 猪丹毒丝菌的研究概况
第二节 噬菌体展示技术用于抗原表位的筛选
第三节 研究的目的与意义
第二章 猪丹毒丝菌多克隆抗体的制备
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
1.2.1 阳性血清的选择
1.2.2 菌体抗原吸附法纯化特异性抗体
1.2.3 血清与细菌的用量
1.2.4 血清稀释对抗原吸附纯化效果的影响
1.2.5 吸附的饱和时间
1.2.6 洗脱的效果
1.2.7 血清的再次吸附
1.2.8 SPA亲和层析及纯化IgG的纯度、效价和浓度的检测
2 结果和分析
2.1 猪血清的选择
2.2 猪丹毒丝菌特异性抗体的菌体抗原吸附纯化
2.3 血清和细菌的用量
2.4 血清稀释后的吸附纯化的结果
2.5 吸附和洗脱时间
2.6 血清再次特异性纯化的结果
2.7 SPA亲和层析后IgG的纯度、效价和浓度
3 讨论
第三章 噬菌体展示技术筛选猪丹毒丝菌模拟抗原表位
1 材料与方法
1.1 主要试剂和材料
1.2 方法
1.2.1 猪丹毒模拟抗原表位的噬菌体筛选
1.2.2 测序及序列分析
1.2.3 噬菌体的ELISA分析
1.2.4 噬菌体的免疫印迹分析
2 结果和分析
2.1 筛选结果
2.2 噬菌体测序和序列分析
2.3 模拟表位的ELISA验证
2.4 免疫印迹分析
3 讨论
第四章 噬菌体展示技术筛选猪丹毒丝菌表面分子结合肽
1 材料与方法
1.1 主要试剂和材料
1.2 方法
1.2.1 猪丹毒丝菌表面分子结合肽（SMBP）的噬菌体筛选
1.2.2 猪丹毒丝菌SMBP的初步验证
1.2.3 猪丹毒丝菌SMBP与2型和7型猪链球菌的相关性分析
2 结果和分析
2.1 猪丹毒丝菌SMBP的筛选
2.2 SMBP的ELISA验证
2.3 2型和7型猪链球菌检测猪丹毒SMBP
3 讨论
结论
参考文献
符号说明
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]鼠伤寒沙门氏菌特异性多克隆抗体的纯化方法[J]. 牛瑞江,赖卫华,熊齐荣,魏华,熊勇华. 食品科学. 2011(13)
[2]一种高效准确定量计数噬菌体肽库目标分子的方法[J]. 王可耕,曾庆仁,禹正杨,曾铁兵,刘彦. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2011(03)
[3]噬菌体展示技术在毒素检测分析中的应用[J]. 胡骁飞,栗力,邢广旭,裴亚峰,职爱民,王耀,孙亚宁,王磊,赵丽娜,邓瑞广. 河南农业科学. 2011(06)
[4]不同纯化兔抗苏丹红ⅠIgG方法的比较[J]. 张大川,付云洁,刘志国,梁莉甜,李琦. 武汉工业学院学报. 2011(02)
[5]噬菌体展示EpCAM单链抗体及免疫原性初步研究[J]. 刘晓丽,张岸梅,林盛,王欣欣,廖荣霞,孙建国,陈正堂. 第三军医大学学报. 2011(10)
[6]噬菌体展示技术制备甲氧基有机磷农药抗独特型抗体[J]. 贺江,梁颖,樊明涛,刘贤金. 分析化学. 2011(02)
[7]抗庆大霉素噬菌体抗体库的构建和筛选[J]. 孟辉,温凯,沈建忠,王战辉,张素霞. 中国畜牧兽医. 2011(01)
[8]两种方法纯化兔抗绵羊肺炎支原体IgG的比较[J]. 武薇,韩克光. 中国动物检疫. 2010(02)
[9]大肠杆菌O157:H7多克隆抗体纯化[J]. 郎婧,金敏,王新为,李君文,晁福寰. 解放军预防医学杂志. 2008(04)
[10]人血清IgG分离纯化方法探讨[J]. 李慧,吴恩应,张彦鹏,黄肖武. 广西大学学报(自然科学版). 2008(S1)
本文编号：3036820
【文章来源】：湖南农业大学湖南省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
目录
第一章 文献综述
第一节 猪丹毒丝菌的研究概况
第二节 噬菌体展示技术用于抗原表位的筛选
第三节 研究的目的与意义
第二章 猪丹毒丝菌多克隆抗体的制备
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
1.2.1 阳性血清的选择
1.2.2 菌体抗原吸附法纯化特异性抗体
1.2.3 血清与细菌的用量
1.2.4 血清稀释对抗原吸附纯化效果的影响
1.2.5 吸附的饱和时间
1.2.6 洗脱的效果
1.2.7 血清的再次吸附
1.2.8 SPA亲和层析及纯化IgG的纯度、效价和浓度的检测
2 结果和分析
2.1 猪血清的选择
2.2 猪丹毒丝菌特异性抗体的菌体抗原吸附纯化
2.3 血清和细菌的用量
2.4 血清稀释后的吸附纯化的结果
2.5 吸附和洗脱时间
2.6 血清再次特异性纯化的结果
2.7 SPA亲和层析后IgG的纯度、效价和浓度
3 讨论
第三章 噬菌体展示技术筛选猪丹毒丝菌模拟抗原表位
1 材料与方法
1.1 主要试剂和材料
1.2 方法
1.2.1 猪丹毒模拟抗原表位的噬菌体筛选
1.2.2 测序及序列分析
1.2.3 噬菌体的ELISA分析
1.2.4 噬菌体的免疫印迹分析
2 结果和分析
2.1 筛选结果
2.2 噬菌体测序和序列分析
2.3 模拟表位的ELISA验证
2.4 免疫印迹分析
3 讨论
第四章 噬菌体展示技术筛选猪丹毒丝菌表面分子结合肽
1 材料与方法
1.1 主要试剂和材料
1.2 方法
1.2.1 猪丹毒丝菌表面分子结合肽（SMBP）的噬菌体筛选
1.2.2 猪丹毒丝菌SMBP的初步验证
1.2.3 猪丹毒丝菌SMBP与2型和7型猪链球菌的相关性分析
2 结果和分析
2.1 猪丹毒丝菌SMBP的筛选
2.2 SMBP的ELISA验证
2.3 2型和7型猪链球菌检测猪丹毒SMBP
3 讨论
结论
参考文献
符号说明
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]鼠伤寒沙门氏菌特异性多克隆抗体的纯化方法[J]. 牛瑞江,赖卫华,熊齐荣,魏华,熊勇华. 食品科学. 2011(13)
[2]一种高效准确定量计数噬菌体肽库目标分子的方法[J]. 王可耕,曾庆仁,禹正杨,曾铁兵,刘彦. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2011(03)
[3]噬菌体展示技术在毒素检测分析中的应用[J]. 胡骁飞,栗力,邢广旭,裴亚峰,职爱民,王耀,孙亚宁,王磊,赵丽娜,邓瑞广. 河南农业科学. 2011(06)
[4]不同纯化兔抗苏丹红ⅠIgG方法的比较[J]. 张大川,付云洁,刘志国,梁莉甜,李琦. 武汉工业学院学报. 2011(02)
[5]噬菌体展示EpCAM单链抗体及免疫原性初步研究[J]. 刘晓丽,张岸梅,林盛,王欣欣,廖荣霞,孙建国,陈正堂. 第三军医大学学报. 2011(10)
[6]噬菌体展示技术制备甲氧基有机磷农药抗独特型抗体[J]. 贺江,梁颖,樊明涛,刘贤金. 分析化学. 2011(02)
[7]抗庆大霉素噬菌体抗体库的构建和筛选[J]. 孟辉,温凯,沈建忠,王战辉,张素霞. 中国畜牧兽医. 2011(01)
[8]两种方法纯化兔抗绵羊肺炎支原体IgG的比较[J]. 武薇,韩克光. 中国动物检疫. 2010(02)
[9]大肠杆菌O157:H7多克隆抗体纯化[J]. 郎婧,金敏,王新为,李君文,晁福寰. 解放军预防医学杂志. 2008(04)
[10]人血清IgG分离纯化方法探讨[J]. 李慧,吴恩应,张彦鹏,黄肖武. 广西大学学报(自然科学版). 2008(S1)
本文编号：3036820
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