我国鸡群禽戊型肝炎病毒感染的血清学和分子流行病学调查

发布时间：2021-02-17 16:33

　　禽戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus，HEV）是鸡大肝大脾（Big liver and spleendisease，BLS）病或肝炎脾大（Hepatitis-Splenomegaly，HS）综合症的主要病原，主要引起30-72周龄的蛋鸡和肉种鸡的死淘率升高和产蛋率下降（20-40%），发病鸡通常腹部充血，卵巢退化，肝脏脂肪或淀粉样变性，偶有肝脾肿大。该病曾给澳大利亚的养禽业造成了严重的经济损失，而我国也时有该病爆发的报道。禽HEV与人、猪HEV同属于肝炎病毒属，为无囊膜，单股正链RNA病毒，其基因组全长约为6.6kb，比哺乳动物HEV基因组全长少600bp左右，包含5’帽子和3’PolyA结构，含有3个开放阅读框（Open reading frame，ORF），分别为ORF1、ORF2和ORF3。其中ORF2基因编码衣壳蛋白是病毒的主要结构蛋白，并且包含病毒主要的抗原表位。本研究以兽医免疫生物学实验室分离的禽HEV中国分离株（CaHEV）为材料基础，利用分子生物学技术构建和表达CaHEV ORF2蛋白C端268个氨基酸，纯化后获得蛋白ORF2-268，将该蛋白作为包被抗原... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 戊型肝炎的研究进展
        1.1.1 戊型肝炎病毒病原学研究
        1.1.2 戊型肝炎病毒基因组结构
        1.1.3 戊型肝炎病毒宿主范围
        1.1.4 戊型肝炎的流行病学
        1.1.5 戊型肝炎的临床表现
        1.1.6 戊型肝炎病毒的检测方法
        1.1.7 戊型肝炎病毒疫苗的研究
    1.2 禽戊型肝炎病毒研究概况
        1.2.1 禽戊型肝炎病毒病原学
        1.2.2 禽戊型肝炎病毒流行病学
        1.2.3 禽戊型肝炎病毒免疫学
    1.3 本研究的目的及意义
第二章 间接 ELISA 检测禽 HEV 抗体方法的建立
    2.1 材料
        2.1.1 毒株，载体与菌种
        2.1.2 实验试剂和耗材
        2.1.3 主要设备和仪器
        2.1.4 主要试剂的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 设计和合成引物
        2.2.2 获得目的基因并测序
        2.2.3 带有酶切位点引物的设计
        2.2.4 目的基因和载体的双酶切
        2.2.5 筛选阳性克隆
        2.2.6 表达和纯化蛋白
        2.2.7 敲定最终的间接 ELISA 检测血清方法
        2.2.8 建立 ELISA 方法的重复性分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 鉴定重组质粒
        2.3.2 优化重组蛋白表达条件
        2.3.3 Western blot 鉴定表达的重组蛋白
        2.3.4 纯化蛋白
        2.3.5 建立间接 ELISA 方法检测血清抗体
    2.4 讨论与分析
第三章 我国鸡群戊型肝炎的血清学检测
    3.1 材料
        3.1.1 鸡血清
        3.1.2 ELISA 检测抗原
        3.1.3 实验试剂和耗材
        3.1.4 仪器和设备
        3.1.5 配制试剂
    3.2 方法
    3.3 结果
        3.3.1 不同省市鸡群禽 HEV抗体检测结果
        3.3.2 不同品种鸡群禽 HEV抗体检测结果
        3.3.3 不同周龄鸡群禽 HEV抗体检测结果
    3.4 讨论和分析
第四章 我国鸡群的戊型肝炎病毒分子流行病学调查
    4.1 材料
        4.1.1 表达载体和菌种
        4.1.2 实验试剂和耗材
        4.1.3 主要设备和仪器
        4.1.4 主要试剂的配制
        4.1.5 检测样品的收集
    4.2 方法
        4.2.1 设计引物
        4.2.2 Trizol 方法提取病毒 RNA
        4.2.3 RT-PCR检测
        4.2.4 回收并纯化 PCR产物
        4.2.5 连接至载体
        4.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备
        4.2.7 转化连接产物
        4.2.8 提质粒
        4.2.9 双酶切鉴定
        4.2.10 比对序列
    4.3 结果
        4.3.1 RT-PCR检测结果
        4.3.2 双酶切鉴定克隆质粒
        4.3.3 与 GenBank 上已知序列的同源性关系
        4.3.4 进化树分析
    4.4 讨论和分析
结论
参考文献
英文缩略词
致谢
作者简介、发表论文情况


【参考文献】：
期刊论文
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[9]新疆地区猪戊型肝炎血清流行病学调查[J]. 马勋,陆承平,孟继鸿.  中国病毒学. 2004(03)
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本文编号：3038256