P-糖蛋白在健康和大肠杆菌感染肉鸡组织中的表达差异及其对口服恩诺沙星药动学的影响

发布时间：2021-02-17 20:19

　　P-gp是由Abcb1基因编码的一种相对分子质量为170 kda的跨膜转运蛋白,属于能量依赖的药物外排泵。近年来的研究发现,P-gp除了在肿瘤细胞中高表达介导其对化疗药物的耐药外,人和动物的正常组织中也有分布,如胆小管、肠上皮、肾小管以及血脑屏障等,可限制药物及其它外源性物质在生物体内的吸收、分布和排泄,是影响口服药物生物利用度的一个重要因素。P-gp的表达可以受到多种因素影响,包括化学物质、年龄、性别、生理状态、疾病以及激素等。目前关于大肠杆菌感染对肉鸡体内P-gp表达和功能的影响以及对口服底物药物药动学过程的研究仍较少,故本试验研究了大肠杆菌感染对肉鸡P-gp mRNA表达的影响及其对恩诺沙星在肉鸡体内药动学的影响,并初步探讨了大肠杆菌对P-gp mRNA表达影响的调控机制。首先,采用P-gp诱导剂利福平以及抑制剂维拉帕米研究其对恩诺沙星在肉鸡体内药动学的影响,证实恩诺沙星为P-gp的底物。本研究选取30只健康8周龄肉鸡,随机分为6组（n=5）,分别为单剂量口服恩诺沙星（10 mg/kg.bw）组、单剂量口服维拉帕米（15 mg/kg.bw）后口服恩诺沙星（10mg/kg.bw）组... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：97 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
符号及缩略语
引言
第一章 文献综述
    1 P-gp的结构和分布
    2 P-gp与药物的吸收、分布、代谢和排泄
    3 影响P-gp表达和功能的因素
        3.1 疾病对P-gp表达和功能的影响
        3.2 年龄对P-gp表达和功能的影响
        3.3 激素对P-gp表达和功能的影响
        3.4 化学物对P-gp表达和功能的影响
            3.4.1 P-gp的诱导剂
            3.4.2 P-gp的抑制剂
    4 P-gp的表达调控
        4.1 核受体对P-gp编码基因Abcbl的转录调控
            4.1.1 PXR/SXR对Abcb1基因的转录调控
            4.1.2 CAR对P-gp表达和功能的影响
        4.2 细胞因子对P-gp表达和功能的影响
            4.2.1 IL-6对P-gp表达和功能的影响
            4.2.2 IL-1p对P-gp表达和功能的影响
            4.2.3 IL-2和IL-4对P-gp表达和功能的影响
            4.2.4 TNFα对P-gp表达和功能的影响
            4.2.5 IFN-γ对P-gp表达和功能的影响
            4.2.6 TGF-β1对P-gp表达和功能的影响
            4.2.7 细胞因子对P-gp表达和功能的调控通路
        4.3 NOS对P-gp表达和功能的影响
        4.4 NF-κB对P-gp表达和功能的影响
        4.5 其它因子对P-gp表达和功能的影响
    5 小结
    参考文献
第二章 P-糖蛋白对恩诺沙星在肉鸡体内药动学的影响
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 试验动物
            1.1.2 药品与试剂
            1.1.3 试验仪器
        1.2 方法
            1.2.1 血浆中恩诺沙星检测的色谱条件
            1.2.2 标准曲线的制备
            1.2.3 主要工作液配制
            1.2.4 给药方案与血样的采集
            1.2.5 样品处理
        1.3 数据的处理
    2 结果
        2.1 色谱行为
        2.2 标准曲线的绘制
        2.3 药时曲线与药动学参数
            2.3.1 对照组和维拉帕米处理组鸡体内恩诺沙星的药时曲线
            2.3.2 对照组和维拉帕米处理组鸡体内恩诺沙星的药动学参数
            2.3.3 对照组和利福平处理组鸡体内恩诺沙星的药时曲线
            2.3.4 对照组和利福平处理组鸡体内恩诺沙星的药动学参数
    3 讨论
    参考文献
第三章 大肠杆菌感染对肉鸡组织中P-gp的表达及对口服恩诺沙星的影响
    1 材料与方法
        1.1 试剂
        1.2 试验仪器
        1.3 菌株
        1.4 试验动物及处理
        1.5 方法
            1.5.1 感染模型的建立
            1.5.2 real time RT-PCR方法测定肉鸡组织中Abcb1 mRNA的表达量
                1.5.2.1 样品采集及处理
            1.5.3 SABC免疫组织化学方法检测P-gp的蛋白表达
            1.5.4 HPLC测定口服恩诺沙星的血药浓度
    2 结果
        2.1 肉鸡大肠杆菌感染模型的建立
        2.2 健康和大肠杆菌感染肉鸡组织中Abcb1 mRNA的表达水平变化
            2.2.1 RNA完整性鉴定
            2.2.2 RNA及cDNA检测
        2.3 P-gp蛋白在健康和大肠杆菌感染肉鸡组织中的表达差异
            2.3.1 P-gp在健康和感染肉鸡肝脏中的定位
            2.3.2 P-gp在健康和感染肉鸡肾脏中的定位
            2.3.3 P-gp在健康和感染肉鸡空肠中的定位
            2.3.4 P-gp在健康和感染肉鸡回肠中的定位
            2.3.5 P-gp在健康和大肠杆菌感染肉鸡组织中的半定量分析
        2.4 大肠杆菌感染对口服恩诺沙星药代动力学的影响
            2.4.1 恩诺沙星在健康和大肠杆菌感染肉鸡的药时曲线
            2.4.2 恩诺沙星在健康和大肠杆菌感染肉鸡的药动学参数
            2.4.3 感染肉鸡恩诺沙星与维拉帕米联合用药的药时曲线
            2.4.4 P-gp抑制剂维拉帕米对感染肉鸡体内恩诺沙星药动学参数的影响
    3 讨论
    参考文献
第四章 大肠杆菌对肉鸡体内P-gp表达的调控机制初探
    1 材料与方法
        1.1 试剂
        1.2 试验仪器
        1.3 菌株
        1.4 试验动物及处理
        1.5 方法
    2 结果
α、CXR和NF-κB1基因的扩增曲线和熔解曲线">        2.1 IL-6、IL-1β、TNF_α、CXR和NF-κB1基因的扩增曲线和熔解曲线
        2.2 主要促炎因子在健康和大肠杆菌感染肉鸡不同组织中的表达差异
            2.2.1 IL-6 mRNA在健康和感染肉鸡不同组织中的相对表达量
            2.2.2 IL-1β mRNA在健康和感染肉鸡不同组织中的相对表达量
            2.2.3 TNFα mRNA在健康和感染肉鸡不同组织中的相对表达量
        2.3 核受体CXR在健康和感染肉鸡不同组织中的表达差异
        2.4 核转录因子NF-κB1在健康和感染肉鸡不同组织中的表达差异
    3 讨论
    参考文献
全文总结
致谢
攻读硕士期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]异源物代谢核受体PXR与肿瘤多药耐药相关性的研究进展[J]. 倪彦彬,章国良.  生理科学进展. 2011(01)



本文编号：3038480