结核与非结核分枝杆菌多重PCR方法的建立及初步应用

发布时间：2021-02-17 21:21

　　为了避免结核检疫中PPD检测假阳性牛被错误的扑杀,预防奶牛养殖场结核病的流行扩散,维护公共卫生安全,保障畜牧业经济的发展,本研究建立了可以区分结核与非结核分枝杆菌的多重PCR方法,并以石河子地区部分牛场存栏奶牛以及养殖场麻雀为调查对象,进行了初步应用。首先,进行分支杆菌标准株的复苏与培养。试验以结核分枝杆菌H37Ra、卡介苗BCG、禽分支杆菌、胞内分支杆菌、偶发分支杆菌、耻垢分支杆菌、龟分支杆菌为分支杆菌标准菌,其中H37Ra、BCG总DNA取自医学院民族高发病实验室,并完成了分支杆菌主要培养基的配制、龟分支杆菌冻干粉的复苏培养,禽分支杆菌、胞内分支杆菌、偶发分支杆菌、耻垢分支杆菌的培养。其次,为了建立一种快速区分鉴定结核与非结核分枝杆菌的多重PCR方法,以分支杆菌属特异基因32kD,结核分枝杆菌种特异基因MTP40和结核分枝杆菌复合群特异基因IS6110为目标基因,设计合成三对特异性引物,以结核分枝杆菌标准株DNA为模板,通过对PCR反应体系中DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度和TaqDNA聚合酶浓度5个因素的正交设计,以及PCR反应条件中各反应参数的优化,建立了... 

【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

龟分支杆菌培养结果

结核 与 非结 核 分支 杆 菌多 重 P CR 方 法的 建 立及 初 步应 用 2 . 2 偶 发 分 支 杆 菌快 速 生 长 、接 种 后 2 4 h 可 见 黄 白 色 粗 糙 菌 落 、不 能 使 培 养 基 表 面 变 色（ 图 1 . 2B ） , 抗 酸 染 色 呈 红 色 长 杆 状 （ 图 1 . 2 C ） 。

A B C图 1 . 2 偶 发 分 支 杆 菌 培 养 结 果F i g u r e 1 . 2 o c c a s i o n a l m y c o b a c t e r i a l c u l t u r e r e s u l t s ： A 、 B 、 C 分 别 是 培 养 基 表 面 状 态 、 菌 落 1 0 0 倍 放 大 结 果 、 1 0 0 X 1 0 抗 酸 染 色 结 果2 . 3 耻 垢 分 支 杆 菌快 速 生 长 、 接 种 后 2 4 小 时 可 见 黄 白 色 粗 糙 菌 落 , 不 能 使 培 养 基 变 色 （ 图 1 . 3 A 、B ） , 抗 酸 染 色 呈 红 色 长 杆 状 （ 图 1 . 3 C ） 。


本文编号：3038556