猪CuZnSOD基因核心启动子鉴定及精子介导法制备CuZnSOD转基因肉兔的研究
发布时间：2021-02-18 14:48
随着现代规模化养殖程度的不断提高，氧化应激在商品猪生产中的危害日益显现。铜锌超氧化物歧化酶（CuZnSOD）是一种重要的抗氧化酶，在维持生物体内氧自由基平衡方面发挥重要作用。CuZnSOD广泛分布于细胞质基质中，约占SOD总量的90%。随着生物技术的发展，许多物种的CuZnSOD基因组序列已被克隆出来。目前CuZnSOD基因的研究多集中于其功能方面，而对于表达调控机制并不清楚。为了进一步研究CuZnSOD基因的结构与功能以及验证CuZnSOD基因在提高肌肉抗氧化能力方面的功能，本研究进行了以下研究，一是PCR克隆CuZnSOD基因的启动子区，对其转录调控机制进行了探讨，二是通过制备转CuZnSOD基因肉兔模型来研究并验证CuZnSOD对肌肉抗氧化性能等肉质性状影响的重要功能和育种价值。主要研究结果如下：1.利用PCR方法从莱芜猪基因组克隆CuZnSOD基因5′上游853bp的片段，然后通过巢式PCR方法获得5′末端逐渐截短的启动子系列片段，并将这些片段定向插入到荧光素酶报告基因表达载体（PGL3-Basic）中。瞬时转染NIH/3T3细胞，双荧光素酶报告基因检测启动子活性结果显示，-3...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CuZnSOD基因启动子PCR检测结果
图 1 CuZnSOD 基因启动子 PCR 检测结果Fig.1 PCR results of CuZnSOD gene promoter猪 CuZnSOD 基因 5′端序列的生物信息学分析研究采用 PCR方法从猪基因组克隆得到 CuZnSOD基因5′上游调控区 853生物信息学软件分析发现，在猪 CuZnSOD 基因 5′端-87bp 和-266bp 处存录起始位点（TSS），缺乏经典的 CAAT-box 和 GC-box 保守序列，但检测box（图 2）。
图 3 PCR 扩增 CuZnSOD 基因 5′端不同长度缺失片段 2000bp DNA marker；1: 853bp；2: 753bp；3: 653bp；4: 533bp；5: 453bp；6: 353bp；7: 2Figure.3 PCR amplification of various length deletion fragments of CuZnSOD gene promoter素酶表达载体的构建及酶切鉴定的荧光素酶报告基因载体经限制性内切酶 Mlu I 和 Bgl II 双酶切，糖凝胶电泳分离（图 4）。检测结果表明，酶切下的目的片段大小与体进行测序，测序结果亦表明插入片段序列及方向正确无误。图 4 重组载体的酶切鉴定NA marker；M2: 10000bp DNA marker；1: 853bp；2: 753bp；3: 653bp；4: 533bp；5: 4537: 233bpFigure.4 Identification of recombinant plasmids with digestion
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪CuZnSOD基因的克隆、表达及功能分析[J]. 杜金芳,曾勇庆,陈伟,崔景香,陈其美,杨伦,胡艳霞. 遗传. 2010(10)
[2]通过睾丸内注射转染外源DNA在小鼠精子的表达[J]. 谢畅,于明举,惠楠,王岭斌,李文杰,赵永聚. 动物学杂志. 2010(02)
[3]转基因动物研究进展[J]. 李想,逍遥,张鑫,杨利国. 中国奶牛. 2009(12)
[4]体细胞核移植生产绿色荧光蛋白转基因猪[J]. 刘忠华,宋军,王振坤,田江天,孔庆然,郑重,尹智,高力,马海鹍,孙爽,李玉田,王洪斌. 科学通报. 2008(05)
[5]慢病毒载体介导IκB激酶-α（IKKα）基因RNA干扰转基因小鼠的制备[J]. 杨志峰,王龙,杨生生,匡颖,陈欢,徐国江,蔡在龙,王铸钢,毛积芳. 生物化学与生物物理进展. 2007(02)
[6]Temperature variable and the efficiency of sperm mediated transfection of HPV16 DNA into cells[J]. Ruslana Kadze,Philip J. Chan,John D. Jacobson,Johannah U. Corselli,Alan King. Asian Journal of Andrology. 2002(03)
[7]用曲细精管微注射法建立绿色荧光蛋白转基因小鼠[J]. 沈新明,乔贵林,张玲,江培洲,黄华,姚开泰. 第一军医大学学报. 2002(03)
[8]精子载体介导法生产转基因绵羊的研究[J]. 武坚,刘明军,李文蓉,黄俊成,史洪才,郭志勤. 草食家畜. 2001(S2)
[9]转基因动物研究进展[J]. 王鲜忠,孙新明. 动物医学进展. 1999(03)
硕士论文
[1]人α干扰素转基因小鼠模型的建立[D]. 李维纳.吉林大学 2011
[2]睾丸内注射法建立转基因小鼠的实验研究[D]. 嵇斌.东北农业大学 2008
[3]利用精子载体法制备转基因小鼠疾病模型的初步研究[D]. 董焕声.莱阳农学院 2006
[4]用精子载体法制备转基因动物模型的研究[D]. 牟红梅.西北农林科技大学 2002
本文编号：3039701
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CuZnSOD基因启动子PCR检测结果
图 1 CuZnSOD 基因启动子 PCR 检测结果Fig.1 PCR results of CuZnSOD gene promoter猪 CuZnSOD 基因 5′端序列的生物信息学分析研究采用 PCR方法从猪基因组克隆得到 CuZnSOD基因5′上游调控区 853生物信息学软件分析发现，在猪 CuZnSOD 基因 5′端-87bp 和-266bp 处存录起始位点（TSS），缺乏经典的 CAAT-box 和 GC-box 保守序列，但检测box（图 2）。
图 3 PCR 扩增 CuZnSOD 基因 5′端不同长度缺失片段 2000bp DNA marker；1: 853bp；2: 753bp；3: 653bp；4: 533bp；5: 453bp；6: 353bp；7: 2Figure.3 PCR amplification of various length deletion fragments of CuZnSOD gene promoter素酶表达载体的构建及酶切鉴定的荧光素酶报告基因载体经限制性内切酶 Mlu I 和 Bgl II 双酶切，糖凝胶电泳分离（图 4）。检测结果表明，酶切下的目的片段大小与体进行测序，测序结果亦表明插入片段序列及方向正确无误。图 4 重组载体的酶切鉴定NA marker；M2: 10000bp DNA marker；1: 853bp；2: 753bp；3: 653bp；4: 533bp；5: 4537: 233bpFigure.4 Identification of recombinant plasmids with digestion
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪CuZnSOD基因的克隆、表达及功能分析[J]. 杜金芳,曾勇庆,陈伟,崔景香,陈其美,杨伦,胡艳霞. 遗传. 2010(10)
[2]通过睾丸内注射转染外源DNA在小鼠精子的表达[J]. 谢畅,于明举,惠楠,王岭斌,李文杰,赵永聚. 动物学杂志. 2010(02)
[3]转基因动物研究进展[J]. 李想,逍遥,张鑫,杨利国. 中国奶牛. 2009(12)
[4]体细胞核移植生产绿色荧光蛋白转基因猪[J]. 刘忠华,宋军,王振坤,田江天,孔庆然,郑重,尹智,高力,马海鹍,孙爽,李玉田,王洪斌. 科学通报. 2008(05)
[5]慢病毒载体介导IκB激酶-α（IKKα）基因RNA干扰转基因小鼠的制备[J]. 杨志峰,王龙,杨生生,匡颖,陈欢,徐国江,蔡在龙,王铸钢,毛积芳. 生物化学与生物物理进展. 2007(02)
[6]Temperature variable and the efficiency of sperm mediated transfection of HPV16 DNA into cells[J]. Ruslana Kadze,Philip J. Chan,John D. Jacobson,Johannah U. Corselli,Alan King. Asian Journal of Andrology. 2002(03)
[7]用曲细精管微注射法建立绿色荧光蛋白转基因小鼠[J]. 沈新明,乔贵林,张玲,江培洲,黄华,姚开泰. 第一军医大学学报. 2002(03)
[8]精子载体介导法生产转基因绵羊的研究[J]. 武坚,刘明军,李文蓉,黄俊成,史洪才,郭志勤. 草食家畜. 2001(S2)
[9]转基因动物研究进展[J]. 王鲜忠,孙新明. 动物医学进展. 1999(03)
硕士论文
[1]人α干扰素转基因小鼠模型的建立[D]. 李维纳.吉林大学 2011
[2]睾丸内注射法建立转基因小鼠的实验研究[D]. 嵇斌.东北农业大学 2008
[3]利用精子载体法制备转基因小鼠疾病模型的初步研究[D]. 董焕声.莱阳农学院 2006
[4]用精子载体法制备转基因动物模型的研究[D]. 牟红梅.西北农林科技大学 2002
本文编号：3039701
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