鸡黑素皮质素4受体cAMP/PKA信号通路特点及其细胞筛选模型的建立

发布时间：2021-02-19 17:08

　　本文旨在研究三种黑素皮质素4受体（MC4R）激动剂和拮抗剂对鸡MC4R（cMC4R）WT及4个突变体（Q18H、G21R、S76L和L299P）cAMP/PKA信号通路的影响,建立了基于cMC4R信号通路以cMC4R为靶点的细胞筛选模型。将cMC4RWT及4个突变体的真核表达质粒与萤火虫荧光素酶报告基因质粒pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro]、海肾荧光素酶内参质粒pRL-TK共转染入HEK293T细胞,应用双报告基因法检测受体在无配体作用时荧光素酶的表达水平;检测受体在激动剂（α-MSH、β-MSH、NDP-MSH）的作用下荧光素酶的表达量;将cMC4RWT真核表达质粒与报告基因质粒、内参质粒共转染HEK293T细胞,检测受体在拮抗剂SHU9119和激动剂（α-MSH、β-MSH、NDP-MSH）的共同作用下荧光素酶的表达量。将cMC4R WT真核表达质粒与报告基因质粒按1:5的比例共转染到CHO-K1细胞,经G418（800μg/ml）和潮霉素B（400μg/ml）抗性筛选后,利用有限稀释法获得稳定表达目的基因的单克隆细胞株,利用RT-PCR从转录水平验证了目的基因的表达... 

【文章来源】：中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会论文集中国畜牧兽医学会会议论文集

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本文编号：3041426