梅花鹿Ghrelin cDNA全长序列的克

发布时间：2021-02-19 23:35

　　1999年Ghrelin作为一个内在生长激素促分泌素受体（Growth hormone secretagogue receptor,GHS-R）的配体被发现,当 Ghrelin 与GHS-R结合后可以刺激生长激素（Growth hormone,GH）的分泌。研究表明Ghrelin在生物体内除能调节GH分泌外还有增加食欲、调节能量平衡和促进胃酸分泌等作用。当前国内外对Ghrelin的研究主要集中在人、啮齿动物和家畜上,极少有梅花鹿方面的相关报道,只有本课题组获得过梅花鹿Ghrelin cDNA的部分序列。为了得到梅花鹿Ghrelin基因cDNA的全长序列,同时检测Ghrelin在动物体内的表达与分布情况。本试验利用cDNA末端快速扩增技术（RACE）、反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）及免疫组织化学等技术来进行研究。试验在本课题组已获取的梅花鹿Ghrelin cDNA部分片段的基础上进行3’和5’ RACE。结果成功克隆出了梅花鹿Ghrelin cDNA的3’及5’末端序列,通过与已知序列的拼接首次得到了 539 bp的梅花鹿Ghrelin cD... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
1 引言
    1.1 概述
    1.2 Ghrelin的发现
    1.3 Ghrelin及其受体GHS-R的结构
    1.4 Ghrelin的组织分布
    1.5 Ghrelin的生物学作用
        1.5.1 Ghrelin对GH分泌的调控作用
        1.5.2 Ghrelin在增加食欲,调节能量平衡方面的作用
        1.5.3 Ghrelin与生殖激素的相互作用
        1.5.4 Ghrelin在卵巢组织中的作用
        1.5.5 Ghrelin对心血管系统功能的影响
        1.5.6 Ghrelin的其他作用
    1.6 Ghrelin的应用前景
    1.7 试验目的和意义
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验动物及其组织
        2.1.2 主要仪器与试剂
    2.2 试验方法
        2.2.1 引物设计及合成
        2.2.2 梅花鹿Ghrelin全长cDNA克隆及其序列分析
            2.2.2.1 梅花鹿皱胃黏膜上皮组织总RNA的提取
            2.2.2.2 3' RACE
            2.2.2.3 5' RACE
            2.2.2.4 3' RACE和5' RACE产物的克隆、筛选、鉴定
            2.2.2.5 DNA序列测定
        2.2.3 梅花鹿体内各组织总RNA的提取及检测
        2.2.4 反转录反应
        2.2.5 PCR反应
        2.2.6 RT-qPCR反应
        2.2.7 数据统计分析
        2.2.8 免疫组织化学法操作程序
            2.2.8.1 制备组织连续切片
            2.2.8.2 免疫组织化学染色
3 试验结果
    3.1 梅花鹿Ghrelin全长cDNA克隆及其序列分析
        3.1.1 3' RACE与5' RACE扩增结果
        3.1.2 梅花鹿Ghrelin cDNA的全序列
        3.1.3 梅花鹿Ghrelin cDNA的全序列的同源性比较
        3.1.4 梅花鹿Ghrelin编码的氨基酸及其同源性比较
    3.2 梅花鹿Ghrelin在各器官内的表达
        3.2.1 梅花鹿总RNA的检测
        3.2.2 梅花鹿Ghrelin在各组织器官内的定性检测
            3.2.2.1 目的引物扩增产物检测
            3.2.2.2 内参引物扩增产物检测
        3.2.3 梅花鹿Ghrelin在各组织器官内相对定量检测
    3.3 梅花鹿Ghrelin在各器官内的定位检测
        3.3.1 梅花鹿Ghrelin在消化管内的定位
        3.3.2 梅花鹿Ghrelin在消化腺内的分布
        3.3.3 梅花鹿Ghrelin在其他实质性器官内的分布
4 讨论
    4.1 梅花鹿Ghrelin全长cDNA序列分析
    4.2 梅花鹿Ghrelin在各器官内的表达检测
    4.3 梅花鹿Ghrelin在各器官内的定位检测
5 结论
致谢
参考文献
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]中国驯鹿生长素（ghrelin）全长cDNA的克隆及序列分析[J]. 杨银凤,余兴邦,王冠玉,都格尔斯仁,包花尔,徐斯日古楞.  中国兽医学报. 2014(10)
[2]Distribution of ghrelin-like immunoreactive cells in amphioxus,Branchiostoma belcheri-A study of immunohistochemistry[J]. You-Zhu Weng,Hai-Xia Song,Yong-Qiang Fang The Third Institute of Oceanography of the State Oceanic Administration,Xiamen 361005,China.  Progress in Natural Science. 2008(02)
[3]Ghrelin在成年皖西白鹅小肠内的免疫组化定位研究[J]. 李福宝,方富贵,李梅清,涂健,陶勇,蒋书东,李培英.  畜牧兽医学报. 2007(02)
[4]猪Ghrelin的基因克隆及其组织中mRNA分布的研究[J]. 杨连玉,杨文艳,冀凤杰,赵颖彩,贾锐,王哲.  吉林农业大学学报. 2004(01)

博士论文
[1]Ghrelin在乌珠穆沁羊雌性生殖道内的表达及其真核表达载体的构建[D]. 吕东媛.内蒙古农业大学 2008



本文编号：3041865