实验条件下鸡马立克氏病病毒气溶胶的发生、传播与感染的研究

发布时间：2021-02-21 20:23

　　世界各国养禽业都存在MD，MD首先由匈牙利马立克（Marek）氏于1907年报导。MD是一个多因素影响的疾病，即是宿主、病原和环境管理因素等复合作用的结果。MDV不能垂直传播（Witter et al.,1972），但是，在鸡羽毛囊角质层的上皮细胞、皮屑、鸡舍尘埃、粪便及唾液均可作为传染的来源（Osterrieder et al.,2006; Butter et al.,2007），因此，深入认识MD的水平传染途径对于该病防控有积极意义。本研究为深入探讨鸡马立克氏病病毒（Marek’s disease virus,MDV）的气源性水平传染机制,开展了该病毒气溶胶的发生、传播与感染过程监测,建立MDV气溶胶的传染模式。把两个饲养着SPF鸡的正负压隔离器用一根密闭的管道连接。为了客观的评估，进行了两轮实验为Trial-1（T1）和Trial-2（T2）。采用AGI-30采样器收集空气样品，荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR, QRT-PCR）检测空气样品和羽毛囊样品中病毒DNA；同时用间接免疫荧光实验（Indirect immunofluorescence... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

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略词说明
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 马立克氏病病原
        1.1.1 马立克氏病病原结构
        1.1.2 马立克氏病病毒的流行病学
        1.1.3 马立克氏病的临诊症状
        1.1.4 马立克氏病的发病机理和病理变化
        1.1.5 马立克氏病的诊断
        1.1.6 防制
        1.1.7 免疫失败原因及防止方法
    1.2 病毒气溶胶
        1.2.1 气溶胶的概念
        1.2.2 病毒气溶胶的特性
        1.2.3 病毒气溶胶的产生和传播
        1.2.4 病毒气溶胶的危害
        1.2.5 气溶胶采样原理和仪器
        1.2.6 病毒气溶胶的采集和检测
        1.2.7 微生物气溶胶国内研究现状
        1.2.8 微生物气溶胶国外研究现状
    1.3 实时荧光定量 PCR
    1.4 本研究的意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 SPF 鸡胚和 SPF 鸡
        2.1.2 病毒的制备
        2.1.3 引物和探针
        2.1.4 主要试剂及配制
    2.2 方法
        2.2.1 引物探针的合成
        2.2.2 标准品的制备
            2.2.2.1 提取病毒 DNA
            2.2.2.2 PP38 基因片段的扩增
            2.2.2.3 阳性 PCR 产物的纯化回收
            2.2.2.4 PCR 产物与载体连接
            2.2.2.5 转化感受态细胞
            2.2.2.6 阳性质粒的提取
            2.2.2.7 菌种保存
            2.2.2.8 标准品的获取与定量
        2.2.3 试验设计
        2.2.4 鸡胚成纤维细胞的制备和培养
        2.2.5 病毒的复苏、扩增和冻存
        2.2.6 接种病毒
        2.2.7 样品的采集程序
        2.2.8 全玻璃冲击式采样
        2.2.9 空气和羽毛囊样品中病毒 DNA 的提取
        2.2.10 实时荧光定量 PCR 检测空气及羽毛囊病毒 DNA 含量
        2.2.11 间接免疫荧光试验
        2.2.12 临床观察和剖检
        2.2.13 组织切片的制备
3 结果
    3.1 标准品制备结果
    3.2 MDV 气溶胶发生时间和含量
    3.3 攻毒鸡和气溶胶被动感染组鸡病毒血症的检测
    3.4 G1、G2 组羽毛囊样品病毒 DNA 含量
    3.5 临床观察、剖检及切片
4 讨论
5 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪流感病毒M基因实时荧光定量PCR诊断方法的建立[J]. 张春明,乔传玲,陈艳,杨焕良,辛晓光,陈化兰,冉多良.  中国预防兽医学报. 2008(10)
[2]医院SARS重症监护病区空气传播途径的研究[J]. 徐潜,范钦颖,段宁,王玮,陈建华.  中华医院感染学杂志. 2005(12)
[3]养殖环境真菌气溶胶的研究[J]. 王雅玲,柴同杰,吕国忠,杨奎振.  家畜生态学报. 2005(06)
[4]兔舍内气载需氧菌和气载葡萄球菌的检测[J]. 段会勇,王磊,柴同杰.  家畜生态学报. 2005(04)
[5]微生物气溶胶的感染与控制——兼论SARS病毒预防[J]. 于玺华.  洁净与空调技术. 2003(04)
[6]鸡舍环境耐药细菌气溶胶及其向环境传播的研究[J]. 柴同杰,赵云玲,刘文波,刘辉.  中国预防兽医学报. 2003(03)
[7]汉坦病毒空气传播感染的实验室和野外采样研究[J]. 李劲松,鹿建春,车凤翔,孟令英,刘敏霞.  中国病毒学. 2001(02)
[8]二氧化氯对坑道空气微生物的消毒效果观察[J]. 郑世英,张永良,朱森树,吕义.  中国卫生工程学. 2000(03)
[9]荧光定量PCR技术及其应用[J]. 韩俊英,曾瑞萍.  国外医学.遗传学分册. 2000(03)
[10]肾综合征出血热病毒经气溶胶感染NIH系裸鼠实验研究[J]. 马伟,高娟,梁玉玲,陈宪斌,孟祥芝,李文欢,金朝杭.  济宁医学院学报. 2000(01)



本文编号：3044866