新疆北疆地区牛乳头瘤病毒流行株基因分型及其衣壳蛋白表达研究
发布时间：2021-02-23 21:41
牛乳头状瘤是由牛乳头瘤病毒（Bovine papillomavirus，BPV）所引起的一种牛体表或部分黏膜发生慢性增生性肿瘤病，世界各地均有该病的发生，因损害皮革质量和降低动物体质而给养牛业造成较大的经济损失。根据BPV L1蛋白基因序列，至今已被鉴定的BPV基因型有13种，还有很多未分类的假定基因型。目前，尚无有效疫苗来预防牛乳头瘤病的发生。新疆是中国五大牧区之一，奶牛存栏数达280万头左右，疑似BPV感染的病例在规模化奶牛场中时常发生，然而至今尚无关于奶牛感染BPV基因分型及其疫苗的研究报道，因此开展新疆地区牛感染BPV的基因分型及BPV疫苗研究具有十分重要的意义。为了弄清新疆北疆地区牛感染BPV的基因型，本研究对新疆北疆地区牛乳头状瘤疑似病料进行了病理组织学检查和PCR检测，并对新疆北疆BPV流行株进行了基因分型。对BPV新疆流行株全基因组进行克隆。将BPV2衣壳蛋白L1基因克隆入原核表达载体pGEX4T-1以及真核表达载体pcDNA3.1（+）中，分别在大肠杆菌表达系统以及BHK-21细胞中诱导表达，对原核表达的重组蛋白进行Western blot鉴定，对真核表达的重组蛋白进...
【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
BPV基因组结构
新疆北疆地区牛乳头瘤病毒流行株基因分型及其衣壳蛋白表达研究利用 DNAMAN 软件找出简并引物 FAP59/FAP64 在 BPV1-13 中所对应的核苷酸片段。本研究将检测出的这株假定新型乳头瘤病毒的部分序列提交到 GenBank(KF751804)命名为 BPV/CHI-SW1。遗传进化树分析采用 NJ 法（Neighbor-JoiningMethod）（Thompson and Neel, 1997），将 BPV/CHI-SW1 与 BPV1 至 BPV13 及16 种假定新型乳头瘤病毒 L1 基因序列进行比对分析并利用 MEGA 5 软件构建系统进化树，bootstrap 重复次数为 1000。2 结果2.1 奶牛乳头状瘤临床症状观察患病牛显示牛乳头状肿瘤在口吻、眼、颈部、肩部、后背、后蹄、乳头均有发生，严重病例在面部、颈部、肩部均见到大面积乳头状瘤，肿瘤 0.5 cm至 7 cm直径大小不等，有的连成一片，瘤体多呈结节状及菜花状，颜色多呈白色或灰褐色（图 1-1）。大部分后备牛感染并出现乳头状肿瘤症状，个别牛症状明显。AB C
2.3 PCR 检测结果及序列分析56 份牛乳头状瘤疑似病料中，使用 FAP59/FAP64 引物，经 2.0％的琼脂糖凝胶电泳检测，所扩增的目的 PCR 产物的大小分别约为 450 bp（图 1-3）。C D图 1-2 组织病理学观察（HE 染色 100x）Fig. 1-2 Histopathological examination of papillomas（100x）A 表皮角质层增生和棘层细胞肥厚。B 挖空细胞（黑色箭头指示）。A, illustrate epidermal hyperplasia with marked acanthosis in the stratum corneum andstratum spinosum are seen. B, koilocytes are indicated by black arrows.
【参考文献】：
期刊论文
[1]病毒样颗粒技术应用的研究进展[J]. 刘春国,阎丽辉,曹殿军. 中国预防兽医学报. 2005(02)
[2]Construction and Production of FluorescentPapillom avirus-like Particles[J]. PENG Shiwen , ZHOU Jian , Ian H Frazer * Department of Pediatrics, Xiehe Hospital, Tongji Medical University, Wuhan 430022 * Center for Immunology and Cancer Research, University of Queensland, Princess Alexandra Hospital, Woolloongabba, Qld. Journal of Tongji Medical University. 1999(03)
本文编号：3048277
【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
BPV基因组结构
新疆北疆地区牛乳头瘤病毒流行株基因分型及其衣壳蛋白表达研究利用 DNAMAN 软件找出简并引物 FAP59/FAP64 在 BPV1-13 中所对应的核苷酸片段。本研究将检测出的这株假定新型乳头瘤病毒的部分序列提交到 GenBank(KF751804)命名为 BPV/CHI-SW1。遗传进化树分析采用 NJ 法（Neighbor-JoiningMethod）（Thompson and Neel, 1997），将 BPV/CHI-SW1 与 BPV1 至 BPV13 及16 种假定新型乳头瘤病毒 L1 基因序列进行比对分析并利用 MEGA 5 软件构建系统进化树，bootstrap 重复次数为 1000。2 结果2.1 奶牛乳头状瘤临床症状观察患病牛显示牛乳头状肿瘤在口吻、眼、颈部、肩部、后背、后蹄、乳头均有发生，严重病例在面部、颈部、肩部均见到大面积乳头状瘤，肿瘤 0.5 cm至 7 cm直径大小不等，有的连成一片，瘤体多呈结节状及菜花状，颜色多呈白色或灰褐色（图 1-1）。大部分后备牛感染并出现乳头状肿瘤症状，个别牛症状明显。AB C
2.3 PCR 检测结果及序列分析56 份牛乳头状瘤疑似病料中，使用 FAP59/FAP64 引物，经 2.0％的琼脂糖凝胶电泳检测，所扩增的目的 PCR 产物的大小分别约为 450 bp（图 1-3）。C D图 1-2 组织病理学观察（HE 染色 100x）Fig. 1-2 Histopathological examination of papillomas（100x）A 表皮角质层增生和棘层细胞肥厚。B 挖空细胞（黑色箭头指示）。A, illustrate epidermal hyperplasia with marked acanthosis in the stratum corneum andstratum spinosum are seen. B, koilocytes are indicated by black arrows.
【参考文献】：
期刊论文
[1]病毒样颗粒技术应用的研究进展[J]. 刘春国,阎丽辉,曹殿军. 中国预防兽医学报. 2005(02)
[2]Construction and Production of FluorescentPapillom avirus-like Particles[J]. PENG Shiwen , ZHOU Jian , Ian H Frazer * Department of Pediatrics, Xiehe Hospital, Tongji Medical University, Wuhan 430022 * Center for Immunology and Cancer Research, University of Queensland, Princess Alexandra Hospital, Woolloongabba, Qld. Journal of Tongji Medical University. 1999(03)
本文编号：3048277
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