Dmrt1/7和Boule/Dazl在绵羊睾丸中的表达与定位
发布时间：2021-02-24 17:18
哺乳动物精子发生是由很多基因调控的级联反应过程。精子发生过程是否顺利进行直接关系到精液品质的好坏,对雄性动物的繁殖性能具有重要的影响。研究报道Dmrt1、Dmrt7、Boule和Dazl基因与雄性动物睾丸功能维持以及精子发生过程密切相关,但研究主要聚焦在人和模式动物小鼠上,并且在不同物种中其发挥的调控作用并不完全相同。目前在重要经济物种绵羊上的研究仍处于空白阶段。因而探究Dmrt1、Dmrt7、Boule和Dazl基因在绵羊睾丸发育中的调控作用,对阐明种公羊精子发生的分子调控机制具有重要意义。本研究以出生后0月龄（初生）、2月龄（断奶）、56月龄（初情期）、12月龄（性成熟后）和24月龄（成年）5个较为关键发育期的绵羊睾丸组织以及12月龄绵羊的肝脏、肾脏、心脏、肺脏、脾脏和肌肉组织作为试验材料。在采用qRT-PCR和Western blot方法从转录和翻译水平对Dmrt1、Dmrt7、Boule和Dazl基因在不同发育期睾丸组织中的表达规律进行检测的基础上,利用qRT-PCR对12月龄绵羊各组织中Dmrt1、Boule和Dazl mRNA表达量进行测定,并运用免疫...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略词中英文对照表
摘要
Summary
第一章 文献综述
1 精子发生概述
2 精子发生相关基因研究进展
2.1 Dmrt1基因
2.2 Dmrt7基因
2.3 Boule基因
2.4 Dazl基因
3 研究的目的与意义
第二章 试验研究
试验一 Dmrt1和Dmrt7在绵羊睾丸中的表达与定位分析
1 材料与方法
1.1 试验动物
1.2 主要试剂和耗材
1.3 主要仪器
1.3 试验方法
1.3.1 组织材料收集
1.3.2 组织总RNA提取
1.3.3 第一链cDNA合成
1.3.4 总蛋白提取与变性
1.3.5 引物设计与合成
1.3.6 qRT-PCR
1.3.7 Westernblot
1.3.8 睾丸组织石蜡切片的制备
1.3.9 HE染色
1.3.10 免疫组织化学染色
1.3.11 数据统计与结果分析
2 结果与分析
2.1 绵羊各组织中Dmrt1mRNA的表达
2.2 绵羊睾丸中Dmrt7mRNA的表达
2.3 绵羊睾丸组织中Dmrt1蛋白的表达
2.4 绵羊睾丸组织中Dmrt7蛋白的表达
2.5 不同月龄绵羊睾丸组织HE染色
2.6 绵羊睾丸组织中Dmrt1蛋白的免疫组化染色
2.7 绵羊睾丸组织中Dmrt7蛋白的免疫组化染色
3 讨论
3.1 Dmrt1基因在绵羊各组织中的表达特点
3.2 不同发育期绵羊睾丸组织形态学特点
3.3 Dmrt1蛋白在不同发育期绵羊睾丸组织中的分布特点
3.4 Dmrt7基因在绵羊不同发育期睾丸组织中的表达与分布特点
试验二 Boule和Dazl在绵羊睾丸中的表达与定位分析
1 材料与方法
1.1 试验动物
1.2 主要试剂和耗材
1.3 试验方法
1.3.1 组织材料收集
1.3.2 组织总RNA提取
1.3.3 第一链cDNA合成
1.3.4 总蛋白提取与变性
1.3.5 引物设计与合成
1.3.6 qRT-PCR
1.3.7 Westernblot
1.3.8 睾丸组织石蜡切片的制备
1.3.9 免疫组织化学染色
1.3.10 数据统计与结果分析
2 结果与分析
2.1 绵羊各组织中BoulemRNA的表达
2.2 绵羊各组织中DazlmRNA的表达
2.3 绵羊睾丸组织中Boule蛋白的表达
2.4 绵羊睾丸组织中Dazl蛋白的表达
2.5 绵羊睾丸组织中Boule蛋白的免疫组化染色
2.6 绵羊睾丸组织中Dazl蛋白的免疫组化染色
3 讨论
3.1 Boule基因在绵羊不同发育期睾丸组织中的表达规律
3.2 Boule基因在12月龄绵羊各组织中的表达规律
3.3 Boule蛋白在不同发育期绵羊睾丸组织中的分布特点
3.4 Dazl基因在绵羊各组织中的表达规律
3.5 Dazl蛋白在不同发育期绵羊睾丸组织中的分布特点
第三章 结论
本研究的创新点
本研究的不足之处
参考文献
附录
致谢
作者简介
导师简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]粤黄鸡PGCs无饲养层培养体系的建立[J]. 张晓芳,赵姝灿,张豫,郑桂纯,李京华,王丙云,陈志胜. 农业生物技术学报. 2017(08)
[2]SOX9基因调控雄性哺乳动物生殖活动的研究进展[J]. 李讨讨,马友记,赵兴绪. 畜牧兽医学报. 2017(06)
[3]非编码RNA对哺乳动物精子发生过程的调控[J]. 陈瑞,于帅,陈晓旭,杜健,朱振东,潘传英,曾文先. 中国农业科学. 2017(02)
[4]SOX9基因在绵羊不同组织中的表达及其在睾丸中的定位[J]. 李讨讨,马友记,卢曾奎,雒瑞瑞,高建锋,赵兴绪. 农业生物技术学报. 2016(10)
[5]唯支持细胞综合征患者睾丸组织Boule基因5’调控序列甲基化分析[J]. 李红星,景原雪,孙亮,王乃辉,宋德潇,靳怡,王乐玮,薛石龙. 中华男科学杂志. 2016(06)
[6]不同月龄高原型藏绵羊睾丸组织中蛋白基因产物9.5和神经肽Y的分布比较[J]. 袁莉刚,曲亚玲,鲁玉荣,李聪. 畜牧兽医学报. 2016(01)
[7]Rspo1在雌性脊椎动物性别分化中的功能[J]. 方梦蝶,张衍梅,王孝举. 中国生物化学与分子生物学报. 2015(08)
[8]牦牛犊牛睾丸结构特征及细胞外基质相关蛋白的分布[J]. 袁莉刚,曲亚玲,朱俊峰,谷来凤,田旦增. 解剖学报. 2015(01)
[9]Dmrt1与哺乳动物生殖细胞发育[J]. 魏于栋,申单,程慧玲,李娜,华进联. 中国细胞生物学学报. 2015(02)
[10]Boule基因在小鼠精子发生过程中的动态表达[J]. 晏媛,张辰望,朱梦怡,徐宇君. 南京医科大学学报(自然科学版). 2015(01)
博士论文
[1]DNA甲基化参与调控Dazl生殖特异表达及其与男性生精障碍和肿瘤的相关性研究[D]. 薛鹏.南京医科大学 2015
[2]LRGUK在小鼠精子发生过程的功能研究[D]. 刘艳.郑州大学 2015
硕士论文
[1]不同发育期绵羊睾丸差异蛋白质组学研究[D]. 卢曾奎.甘肃农业大学 2016
[2]DAZL和BOULE基因促进小鼠早期生殖分化的研究[D]. 解名名.安徽大学 2015
[3]牦牛生精小管形态发育特征及细胞外基质相关蛋白分布[D]. 朱俊峰.甘肃农业大学 2013
[4]Dmrt7低表达水平与犏牛精子发生阻滞相关性研究[D]. 金帅.兰州大学 2013
[5]牦牛Boule基因选择性剪接体及其DNA甲基化修饰分析与犏牛雄性不育的关系[D]. 徐洪涛.南京农业大学 2009
本文编号：3049699
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略词中英文对照表
摘要
Summary
第一章 文献综述
1 精子发生概述
2 精子发生相关基因研究进展
2.1 Dmrt1基因
2.2 Dmrt7基因
2.3 Boule基因
2.4 Dazl基因
3 研究的目的与意义
第二章 试验研究
试验一 Dmrt1和Dmrt7在绵羊睾丸中的表达与定位分析
1 材料与方法
1.1 试验动物
1.2 主要试剂和耗材
1.3 主要仪器
1.3 试验方法
1.3.1 组织材料收集
1.3.2 组织总RNA提取
1.3.3 第一链cDNA合成
1.3.4 总蛋白提取与变性
1.3.5 引物设计与合成
1.3.6 qRT-PCR
1.3.7 Westernblot
1.3.8 睾丸组织石蜡切片的制备
1.3.9 HE染色
1.3.10 免疫组织化学染色
1.3.11 数据统计与结果分析
2 结果与分析
2.1 绵羊各组织中Dmrt1mRNA的表达
2.2 绵羊睾丸中Dmrt7mRNA的表达
2.3 绵羊睾丸组织中Dmrt1蛋白的表达
2.4 绵羊睾丸组织中Dmrt7蛋白的表达
2.5 不同月龄绵羊睾丸组织HE染色
2.6 绵羊睾丸组织中Dmrt1蛋白的免疫组化染色
2.7 绵羊睾丸组织中Dmrt7蛋白的免疫组化染色
3 讨论
3.1 Dmrt1基因在绵羊各组织中的表达特点
3.2 不同发育期绵羊睾丸组织形态学特点
3.3 Dmrt1蛋白在不同发育期绵羊睾丸组织中的分布特点
3.4 Dmrt7基因在绵羊不同发育期睾丸组织中的表达与分布特点
试验二 Boule和Dazl在绵羊睾丸中的表达与定位分析
1 材料与方法
1.1 试验动物
1.2 主要试剂和耗材
1.3 试验方法
1.3.1 组织材料收集
1.3.2 组织总RNA提取
1.3.3 第一链cDNA合成
1.3.4 总蛋白提取与变性
1.3.5 引物设计与合成
1.3.6 qRT-PCR
1.3.7 Westernblot
1.3.8 睾丸组织石蜡切片的制备
1.3.9 免疫组织化学染色
1.3.10 数据统计与结果分析
2 结果与分析
2.1 绵羊各组织中BoulemRNA的表达
2.2 绵羊各组织中DazlmRNA的表达
2.3 绵羊睾丸组织中Boule蛋白的表达
2.4 绵羊睾丸组织中Dazl蛋白的表达
2.5 绵羊睾丸组织中Boule蛋白的免疫组化染色
2.6 绵羊睾丸组织中Dazl蛋白的免疫组化染色
3 讨论
3.1 Boule基因在绵羊不同发育期睾丸组织中的表达规律
3.2 Boule基因在12月龄绵羊各组织中的表达规律
3.3 Boule蛋白在不同发育期绵羊睾丸组织中的分布特点
3.4 Dazl基因在绵羊各组织中的表达规律
3.5 Dazl蛋白在不同发育期绵羊睾丸组织中的分布特点
第三章 结论
本研究的创新点
本研究的不足之处
参考文献
附录
致谢
作者简介
导师简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]粤黄鸡PGCs无饲养层培养体系的建立[J]. 张晓芳,赵姝灿,张豫,郑桂纯,李京华,王丙云,陈志胜. 农业生物技术学报. 2017(08)
[2]SOX9基因调控雄性哺乳动物生殖活动的研究进展[J]. 李讨讨,马友记,赵兴绪. 畜牧兽医学报. 2017(06)
[3]非编码RNA对哺乳动物精子发生过程的调控[J]. 陈瑞,于帅,陈晓旭,杜健,朱振东,潘传英,曾文先. 中国农业科学. 2017(02)
[4]SOX9基因在绵羊不同组织中的表达及其在睾丸中的定位[J]. 李讨讨,马友记,卢曾奎,雒瑞瑞,高建锋,赵兴绪. 农业生物技术学报. 2016(10)
[5]唯支持细胞综合征患者睾丸组织Boule基因5’调控序列甲基化分析[J]. 李红星,景原雪,孙亮,王乃辉,宋德潇,靳怡,王乐玮,薛石龙. 中华男科学杂志. 2016(06)
[6]不同月龄高原型藏绵羊睾丸组织中蛋白基因产物9.5和神经肽Y的分布比较[J]. 袁莉刚,曲亚玲,鲁玉荣,李聪. 畜牧兽医学报. 2016(01)
[7]Rspo1在雌性脊椎动物性别分化中的功能[J]. 方梦蝶,张衍梅,王孝举. 中国生物化学与分子生物学报. 2015(08)
[8]牦牛犊牛睾丸结构特征及细胞外基质相关蛋白的分布[J]. 袁莉刚,曲亚玲,朱俊峰,谷来凤,田旦增. 解剖学报. 2015(01)
[9]Dmrt1与哺乳动物生殖细胞发育[J]. 魏于栋,申单,程慧玲,李娜,华进联. 中国细胞生物学学报. 2015(02)
[10]Boule基因在小鼠精子发生过程中的动态表达[J]. 晏媛,张辰望,朱梦怡,徐宇君. 南京医科大学学报(自然科学版). 2015(01)
博士论文
[1]DNA甲基化参与调控Dazl生殖特异表达及其与男性生精障碍和肿瘤的相关性研究[D]. 薛鹏.南京医科大学 2015
[2]LRGUK在小鼠精子发生过程的功能研究[D]. 刘艳.郑州大学 2015
硕士论文
[1]不同发育期绵羊睾丸差异蛋白质组学研究[D]. 卢曾奎.甘肃农业大学 2016
[2]DAZL和BOULE基因促进小鼠早期生殖分化的研究[D]. 解名名.安徽大学 2015
[3]牦牛生精小管形态发育特征及细胞外基质相关蛋白分布[D]. 朱俊峰.甘肃农业大学 2013
[4]Dmrt7低表达水平与犏牛精子发生阻滞相关性研究[D]. 金帅.兰州大学 2013
[5]牦牛Boule基因选择性剪接体及其DNA甲基化修饰分析与犏牛雄性不育的关系[D]. 徐洪涛.南京农业大学 2009
本文编号：3049699
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