猪肾上腺和肝脏3β-HSD基因表达的品种和性别差异及其分子机制

发布时间：2021-02-24 17:49

　　类固醇激素的稳态是维持动物机体正常生命活动的保障。肾上腺是类固醇激素的主要合成场所,而肝脏则是主要的代谢部位。3p-羟类固醇脱氢酶/△5-Δ4-异构酶（3β-hydroxysteroid dehydrogenase/A5-A4 isomerase,3β-HSD）在类固醇激素的生物合成和降解中发挥重要作用。研究发现,3β-HSD功能的丧失将阻断肾上腺和性腺糖皮质激素、盐皮质激素和性激素的生成,肝脏类固醇激素的代谢也受到抑制。3β-HSD的表达及活性受多种因素的影响,包括类固醇激素对其反馈作用及各种转录因子的调控,然而这些研究主要集中在人的肾上腺细胞系,猪3β-HSD表达调控的研究还很少。因此,本研究的目的是探索雄性断奶仔猪和出栏猪肾上腺和肝脏3β-HSD基因表达的品种和性别差异及其分子调控机制。1雄性断奶仔猪肾上腺3β-HSD基因表达的品种差异选取25日龄的雄性断奶大白猪5头,二花脸猪6头,屠宰,收集血清,采集肾上腺样品,比较两品种猪肾上腺3β-HSD的表达,探讨品种差异表达的转录调控机制。结果显示,二花脸猪血清皮质醇（P<0.01）和睾酮（P<0.01）水平均显著高于大白猪... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：120 页

【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
缩略语
引言
第一部分 文献综述
    第一章 3β-HSD结构与功能概述
        1 3β-HSD基因结构、定位和单核苷酸多态性（SNP）
            1.1 3β-HSD的基因结构
            1.2 3β-HSD基因的定位分析
            1.3 3β-HSD的同源性分析
            1.4 3β-HSD基因的单核苷酸多态性分析
        2 3β-HSD蛋白结构
        3 3β-HSD的功能
            3.1 肾上腺3β-HSD的功能
            3.2 性腺3β-HSD的功能
            3.3 胎盘3β-HSD的功能
            3.4 外周组织3β-HSD的功能
    第二章 3β-HSD表达的生理调控
        1 3β-HSD表达的时空特异性
            1.1 肾上腺3β-HSD表达的发育性变化
            1.2 睾丸3β-HSD表达的发育性变化
            1.3 卵巢3β-HSD表达的发育性变化
            1.4 肝脏3β-HSD表达的发育性变化
        2 3β-HSD表达的性别差异
        3 3β-HSD表达的品种特异性
        4 激素对3β-HSD表达的调节
            4.1 促肾上腺皮质激素
            4.2 血管紧张素Ⅱ
            4.3 糖皮质激素
            4.4 性激素
        5 营养和环境因素对3β-HSD表达的调控
            5.1 营养对3β-HSD表达的影响
            5.2 环境对3β-HSD表达的影响
            5.3 应激对3β-HSD表达的影响
        6 疾病与3β-HSD表达的关系
    第三章 3β-HSD表达调控的分子机制
        1 3β-HSD的转录调控
            1.1 孤儿核受体
            1.2 GATA家族
            1.3 Stat蛋白家族
            1.4 法尼酯X受体
            1.5 CCAAT增强子结合蛋白β
            1.6 雄激素受体
            1.7 糖皮质激素受体
        2 3β-HSD的表遗传调控
第二部分 实验研究
    第四章 雄性断奶仔猪肾上腺3β-HSD基因表达调控的品种差异
        1 材料与方法
            1.1 实验动物及样品采集
            1.2 主要试剂和仪器
            1.3 主要溶液
            1.4 血清激素水平测定
            1.5 RT-PCR检测相关基因表达
            1.6 3β-HSD启动子序列扩增及活性检测
            1.7 免疫印迹（Western blot,WB）检测相关蛋白表达
            1.8 染色质免疫沉淀（Chromatin immunoprecipitation,ChIP）
            1.9 免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation,Co-IP）
            1.10 数据分析和统计
        2 结果与分析
            2.1 大白猪和二花脸猪血清激素水平
            2.2 大白猪和二花脸猪肾上腺3β-HSD表达
            2.3 大白猪和二花脸猪3β-HSD基因启动子区多态性和活性分析
            2.4 大白猪和二花脸猪肾上腺转录因子的表达
            2.5 大白猪和二花脸猪肾上腺3β-HSD基因启动子区C/EBPβ的结合
            2.6 大白猪和二花脸猪肾上腺3β-HSD基因启动子区组蛋白乙酰化水平
            2.7 免疫共沉淀检测GR、AR与C/EBPβ的互作关系
        3 讨论
    第五章 雄性断奶仔猪肝脏3β-HSD基因表达调控的品种差异
        1 材料与方法
            1.1 实验动物及样品采集
            1.2 主要试剂和仪器
            1.3 主要溶液
            1.4 PCR检测相关基因表达
            1.5 肝脏3β-HSD启动子活性检测
            1.6 免疫印迹（Western blot,WB）检测肝脏核蛋白表达
            1.7 染色质免疫沉淀（Chromatin immunoprecipitation,ChIP）
            1.8 数据分析和统计
        2 结果与分析
            2.1 大白猪和二花脸猪肝脏3β-HSD表达
            2.2 大白猪和二花脸猪肝脏3β-HSD基因启动子活性分析
            2.3 大白猪和二花脸猪肝脏转录因子表达
            2.4 大白猪和二花脸猪肝脏3β-HSD基因启动子区GR、AR和C/EB邓的结合
            2.5 免疫共沉淀检测GR与AR、C/EBPβ的互作关系
        3 讨论
    第六章 出栏猪肾上腺3β-HSD基因表达调控的性别差异
        1 材料与方法
            1.1 实验动物及样品采集
        2 结果与分析
            2.1 不同性别猪血清激素水平
            2.2 不同性别猪肾上腺3β-HSD表达
            2.3 不同性别猪肾上腺转录因子表达
            2.4 不同性别猪肾上腺3β-HSD基因启动子区C/EBPβ的结合
            2.4 不同性别猪肾上腺C/EBPβ和AR、GR结合的检测
        3 讨论
    第七章 出栏猪肝脏3β-HSD基因表达调控的性别差异
        1 材料与方法
            1.1 实验动物及样品采集
        2 结果与分析
            2.1 不同性别猪肝脏3-HSD表达
            2.2 不同性别猪肝脏转录因子表达
            2.3 不同性别猪肝脏3β-HSD基因启动子区GR和C/EBPβ的结合水平
            2.4 不同性别猪肝脏3β-HSD基因启动子区组蛋白乙酰化水平
            2.5 不同性别猪肝脏AR和GR结合的检测
        3 讨论
总体讨论
结论
本文创新点
参考文献
致谢
攻读博士期间发表论文情况



本文编号：3049734