适配体缓解FB1诱导的小鼠细胞凋亡和氧化损伤的机制研究

发布时间：2021-02-25 13:51

　　伏马毒素B1（Fumonisin B1,FB1）多产自串珠镰刀菌等真菌,是一种污染广泛的霉菌毒素。FB1对多种动物具有毒性作用,如猪肺水肿、马脑白质软化,不仅危害动物健康,而且造成巨大经济损失。目前还未见体内有效清除FB1的方法。为了寻找可以快速高效清除或吸附FB1的物质并探究其体内体外的保护作用,本试验中利用链霉亲和素磁珠与生物素探针的亲和作用,采用非固定靶标的SELEX筛选策略获得了适配体F102。采用ELISA试验测定其亲和力为42.0±13.7 nmol/L,特异性良好,与玉米赤霉烯酮、T-2毒素和黄曲霉毒素B1的交叉反应较低。利用分子模拟方法推测适配体和FB1的结合机制,结果发现FB1的羰基“O”原子与适配体F102的A-8,A-39,A-40和A-42主要是氢键作用。原代培养小鼠肾细胞,不同浓度FB1（终浓度为0-20,000 ng/mL）处理小鼠肾细胞24 h后确定FB1的损伤浓度为2,500 ng/mL。不同浓度适配体（终浓度为0-100μmol/L）处理小鼠肾细胞24 h后确定适配体的安全保护剂量为1μmol/L。适配体F102和F39分别与FB1共同处理小鼠肾细胞2... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 霉菌毒素概述
        1.1.1 霉菌毒素的产生
        1.1.2 霉菌毒素的污染与危害
        1.1.3 霉菌毒素的检测技术
        1.1.4 霉菌毒素的防控
    1.2 FB1简介
        1.2.1 FB1的基本性质
        1.2.2 FB1的污染状况
        1.2.3 FB1的毒性作用及限量
        1.2.4 FB1的检测和清除方法
    1.3 适配体概述
        1.3.1 适配体的的性质及特点
        1.3.2 SELEX技术
        1.3.3 适配体的应用发展
    1.4 分子模拟简介
        1.4.1 分子模拟技术
        1.4.2 分子模拟的方法
        1.4.3 分子模拟的应用
    1.5 本研究的目的与意义
2 材料
    2.1 毒素及磁珠
    2.2 实验动物
    2.3 引物及分子模拟软件
        2.3.1 分子模拟软件
        2.3.2 引物
    2.4 酶及生化试剂
    2.5 主要仪器和设备
3 方法
    3.1 FB1适配体的筛选
        3.1.1 ssDNA文库的固定
        3.1.2 SELEX筛选过程
        3.1.3 PCR扩增
        3.1.4 扩增文库的回收与纯化
        3.1.5 亲和力和特异性的测定
        3.1.6 适配体与FB1的分子模拟
    3.2 适配体体外缓解FB1诱导小鼠肾细胞损伤机制
        3.2.1 小鼠肾细胞的培养
        3.2.2 FB1损伤浓度的测定
        3.2.3 适配体安全及保护剂量的选择
        3.2.4 适配体对FB1诱导肾细胞损伤的保护
    3.3 适配体体内缓解FB1诱导小鼠组织损伤机制
        3.3.1 动物感染试验
        3.3.2 小鼠脏器指数的测定
        3.3.3 FB1组织残留量的测定
        3.3.4 血液生化指标的测定
        3.3.5 肾组织氧化指标的测定
        3.3.6 肾组织细胞凋亡情况的测定
        3.3.7 统计学处理
4 结果与分析
    4.1 FB1适配体的筛选分析
        4.1.1 筛选条件的优化
        4.1.2 筛选过程的监控
        4.1.3 同源序列的富集比对
        4.1.4 亲和力及特异性的测定
        4.1.5 特异性适配体的结构预测
        4.1.6 适配体与FB1的结合机制
    4.2 适配体缓解FB1诱导小鼠肾细胞损伤的毒性研究
        4.2.1 FB1损伤浓度的确定
        4.2.2 适配体安全剂量的选择
        4.2.3 适配体对FB1诱导肾细胞损伤的保护
    4.3 适配体缓解FB1诱导肾组织损伤的毒性研究
        4.3.1 肾组织中FB1残留量
        4.3.2 适配体对FB1损伤小鼠肾组织病理变化的影响
        4.3.3 适配体对FB1损伤小鼠肾组织脏器指数的影响
        4.3.4 适配体对FB1损伤小鼠血液生化指标的影响
        4.3.5 适配体对FB1损伤小鼠肾组织氧化指标的影响
        4.3.6 适配体对FB1损伤肾组织细胞凋亡情况的影响
5 讨论
    5.1 适配体筛选方法的选择
    5.2 适配体筛选的富集过程
    5.3 适配体亲和力的比较
    5.4 适配体与FB1的结合机制
    5.5 适配体缓解FB1损伤的病理变化
    5.6 适配体缓解FB1损伤的血液生化水平
    5.7 适配体缓解FB1氧化损伤的机制
    5.8 适配体缓解FB1诱导凋亡的机制
6 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
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[3]食品检测中基于荧光标记的DNA分子和氧化石墨烯体系检测汞离子[J]. 邢思琦.  山西农经. 2017(22)
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[5]基于主客体竞争模式的凝血酶适配体传感器的研究[J]. 姚雪莲,陈查丹,张晶,崔汉峰,林艳,洪年,何玲玲,孔德荣,樊浩,程林.  分析化学. 2017(10)
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博士论文
[1]饲料中常见霉菌毒素对小鼠的联合毒性作用及机制的研究[D]. 雷明彦.华中农业大学 2013

硕士论文
[1]靶向HER3适配体-药物偶联物递送系统的构建及抑瘤作用研究[D]. 窦晓倩.广西医科大学 2017
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[3]有机极性小分子/丙烯酸酯橡胶、丁腈橡胶基复合材料的制备及其分子动力学模拟研究[D]. 杨大畏.北京化工大学 2016
[4]基于纳米金颗粒的高灵敏适配体传感器的构建及其在真菌毒素检测中的应用[D]. 喻婕.西南大学 2016
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[6]基于适配体识别的棒曲霉素检测方法研究[D]. 张维潇.江南大学 2015
[7]基于适配体的食品中黄曲霉毒素B1和M1的生物传感器检测方法研究[D]. 陈璐.新疆农业大学 2015
[8]黄曲霉毒素B1与伏马菌素B1对HepG2的联合毒性[D]. 杜明.江南大学 2014
[9]伏马菌素吸附菌株的筛选及机理初探[D]. 张军.河北农业大学 2014
[10]BACE1特异DNA适配子的筛选及其抑制BACE1作用的初步研究[D]. 梁惠玉.南方医科大学 2014



本文编号：3051065