猪圆环病毒3型新疆株Cap蛋白的原核表达及纯化

发布时间：2021-02-25 12:50

　　本研究旨在通过构建pGEX-4T-1-Cap原核表达载体,制备猪圆环病毒3型（PCV3）重组核衣壳（Cap）蛋白抗原。将密码子优化的PCV3 Cap全基因插入pGEX-4T-1载体,构建重组质粒pGEX-4T-1-Cap,转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,筛选出最佳诱导条件,通过谷胱甘肽琼脂糖树脂纯化重组Cap蛋白。结果表明,成功构建重组质粒pGEX-4T-1-Cap;在IPTG终浓度为0.1 mmol/L、16℃诱导20 h的条件下,可获得大量可溶性重组Cap蛋白,SDS-PAGE结果表明分子质量在51.6 ku,与预期相符;Western blotting分析表明经纯化的Cap蛋白与鼠抗GST单克隆抗体、PCV3兔源阳性血清呈阳性反应,进一步证实了重组蛋白的表达。本研究表达并纯化了PCV3 Cap重组蛋白,为新型基因工程亚单位疫苗的研制和ELISA血清学诊断方法的建立奠定了基础。 

【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(08)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

pGEX-4T-1-Cap重组蛋白IPTG诱导浓度优化

pGEX-4T-1-Cap重组蛋白表达时间优化

pGEX-4T-1-Cap重组蛋白在IPTG终浓度为0.1 mmol/L,16 ℃诱导20 h的条件进行诱导,SDS-PAGE电泳结果显示,重组蛋白在上清中表达,大小为51.6 ku (图3),与预期相符。2.3 pGEX-4T-1-Cap重组蛋白的纯化

【参考文献】：
期刊论文
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[3]新发猪圆环病毒3型Cap蛋白的原核表达和纯化[J]. 连凯琪,周玲玲,张明亮,王英杰,张慢,宋玉伟.  河南农业科学. 2018(11)
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硕士论文
[1]核定位信号对病毒衣壳蛋白在E.coli中表达的影响及重组衣壳蛋白免疫学活性研究[D]. 张献.吉林大学 2019



本文编号：3050996