鸭H5亚型禽流感灭活疫苗的研究及其免疫应答的监测
发布时间：2021-02-25 12:40
疫苗免疫是防控禽流感暴发流行、保障养禽业及人类健康的重要措施之一。当前所用禽流感油乳剂灭活疫苗对蛋鸡和蛋鸭免疫效果非常好，但免疫肉鸭抗体稍偏低，而且肉鸭生长周期短，白油佐剂疫苗吸收较慢，在一定程度上影响了养鸭者的免疫积极性。因此有必要系统研究鸭免疫后体液和细胞免疫反应，比较不同佐剂禽流感灭活疫苗的免疫效果，筛选适合鸭，特别是肉鸭免疫的禽流感灭活疫苗佐剂，为水禽禽流感的疫苗免疫防控提供参考和借鉴。通过用HI试验监测肉鸭母源抗体消长规律以及不同日龄雏鸭的抗强毒攻击保护性研究，表明肉鸭也需要进行免疫才能防止发生禽流感。结合不同日龄免疫抗体变化和生产实践，确定肉鸭首免日龄为9到15日龄较为合适。为研究重组金黄色葡萄球菌肠毒素A（rSEA）对禽流感疫苗的免疫增强效果，制备了不同rSEA含量的禽流感油乳剂灭活疫苗。试验结果表明，白油佐剂疫苗中rSEA含量为16.7μg/0.5ml时，能明显缩短保护性抗体产生时间，提高抗体滴度。试验确定了体外表达的未纯化rSEA（rrSEA）不能增强SPF鸭对禽流感油乳剂灭活疫苗体液免疫应答反应；通过对灭活禽流感病毒液中加入不同含量的左旋咪唑的免疫抗体检测，确定含0...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
1.1 禽流感概述
1.2 禽流感疫苗概述
1.2.1 禽流感全病毒灭活疫苗
1.2.2 减毒活疫苗
1.2.3 禽流感亚单位疫苗
1.2.4 禽流感 DNA 疫苗
1.2.5 基因重组活载体疫苗
1.3 疫苗佐剂的研究现状和未来发展趋势
1.3.1 疫苗佐剂的作用、选择及安全性
1.3.2 佐剂的分类
1.4 机体抗流感病毒免疫应答反应
1.4.1 禽类对高致病性禽流感的免疫机制
1.4.2 疫苗免疫与病毒进化
1.5 本研究的目的和意义
第二章 肉鸭最佳首免日龄研究
2.1 材料
2.1.1 疫苗生产种毒及攻毒用毒株
2.1.2 禽流感 Re-6 株标准抗原、阳性和阴性血清
2.1.3 实验动物和鸡胚
2.2 方法
2.2.1 攻毒毒株鸡胚半数感染量（EID50）测定
2.2.2 禽流感油乳剂灭活疫苗制备
2.2.3 樱桃谷肉鸭禽流感病毒携带情况和母源抗体消长规律监测
2.2.4 母源抗体攻毒保护试验
2.2.5 不同日龄鸭免疫禽流感灭活疫苗 HI 抗体检测
2.3 结果
2.3.1 攻毒病毒株鸡胚半数感染量（EID50）测定结果
2.3.2 白油佐剂禽流感灭活疫苗制备检测结果
2.3.3 疫苗安全性检验
2.3.4 樱桃谷肉鸭禽流感病毒携带情况和母源抗体消长规律监测结果
2.3.5 樱桃谷肉鸭母源抗体攻毒保护结果
2.3.6 不同日龄鸭免疫禽流感灭活疫苗 HI 抗体检测
2.4 讨论
第三章 最佳含量的重组 SEA 和左旋咪唑禽流感灭活疫苗研究
3.1 材料
3.1.1 疫苗生产种毒、攻毒用毒株、菌种
3.1.2 实验动物和鸡胚
3.1.3 仪器和主要试剂
3.2 方法
3.2.1 rSEA 的制备
3.2.2 不同佐剂禽流感灭活疫苗的制备
3.2.3 不同 rSEA 含量白油佐剂禽流感灭活疫苗免疫效果比较
3.2.4 白油、白油+rSEA、白油+rrSEA 佐剂禽流感灭活疫苗免疫抗体比较
3.2.5 左旋咪唑作为禽流感疫苗佐剂剂量优化研究
3.3 结果
3.3.1 重组 SEA SDS-PAGE 电泳及 western-blot 鉴定结果
3.3.2 重组 SEA 对体外淋巴细胞的增殖活性试验结果
3.3.3 不同 rSEA 含量白油佐剂禽流感灭活疫苗免疫效果比较
3.3.4 白油、白油+rSEA、白油+rrSEA 佐剂禽流感灭活疫苗免疫抗体比较
3.3.5 左旋咪唑作为禽流感疫苗佐剂剂量优化结果
3.4 讨论
第四章 不同佐剂禽流感灭活疫苗对 SPF 鸭免疫效果研究
4.1 材料
4.1.1 疫苗种毒、攻毒用毒株
4.1.2 禽流感 HI 试验抗原、阳性和阴性血清
4.1.3 主要仪器
4.1.4 疫苗佐剂
4.1.5 实验动物和鸡胚
4.2 方法
4.2.1 白油佐剂和白油+rSEA 佐剂禽流感灭活疫苗的制备
4.2.2 蜂胶佐剂禽流感灭活疫苗的制备
4.2.3 Montanide ISA 71VG 佐剂禽流感灭活疫苗的制备
4.2.4 Montanide ISA 206VG 佐剂禽流感灭活疫苗的制备
4.2.5 左旋咪唑佐剂、rSEA 佐剂及无佐剂禽流感灭活疫苗的制备
4.2.6 不同佐剂禽流感疫苗安全性检验
4.2.7 试验分组、疫苗免疫及攻毒保护效果研究
4.3 结果
4.3.1 不同佐剂禽流感灭活疫苗安全性检验
4.3.2 油乳剂禽流感灭活疫苗免疫 SPF 鸭抗体研究
4.3.3 蜂胶和水剂禽流感灭活疫苗免疫 SPF 鸭后抗体检测
4.3.4 不同佐剂禽流感灭活疫苗免疫后攻毒保护情况
4.4 讨论
第五章 鸭 IFN-γ和 IL-2 mRNA 荧光定量 RT-PCR 方法的建立
5.1 材料
5.2 方法
5.2.1 实时荧光定量 RT-PCR 用引物设计与合成
5.2.2 肉鸭组织 Total RNA 样品的制备和质量鉴定
5.2.3 常规 PCR 反应体系和条件优化
5.2.4 荧光定量 RT-PCR 反应体系和条件优化及相对标准曲线的建立
5.2.5 特异性、稳定性和重复性检测
5.3 结果
5.3.1 组织提取 Total RNA 质量鉴定
5.3.2 常规 PCR 反应体系和条件优化
5.3.3 实时荧光定量 RT-PCR 反应体系和条件优化及相对标准曲线建立
5.3.4 特异性、稳定性和重复性
5.4 讨论
第六章 不同佐剂禽流感灭活疫苗对肉鸭的免疫效果研究
6.1 材料
6.1.1 禽流感灭活疫苗以及攻毒用毒株
6.1.2 主要仪器、材料和试剂
6.1.3 实验动物和鸡胚
6.2 方法
6.2.1 不同佐剂禽流感灭活疫苗免疫肉鸭后的免疫反应及疫苗吸收检测
6.2.2 不同佐剂禽流感灭活苗对樱桃谷鸭免疫攻毒保护试验
6.2.3 统计分析方法
6.3 结果
6.3.1 不同佐剂禽流感灭活疫苗免疫樱桃谷肉鸭 HI 抗体检测
6.3.2 不同佐剂禽流感灭活疫苗对樱桃谷肉鸭外周血淋巴细胞增殖活性的影响
6.3.3 不同佐剂禽流感灭活疫苗免疫樱桃谷肉鸭脾脏中IFN-γ和IL-2 mRNA表达量的检测
6.3.4 不同佐剂疫苗免疫肉鸭后疫苗代谢吸收情况
6.3.5 不同佐剂禽流感灭活疫苗对樱桃谷肉鸭免疫攻毒保护试验
6.4 讨论
第七章 全文结论
参考文献
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]重组SEA增强H5亚型禽流感灭活疫苗对肉鸡的免疫效果研究[J]. 苏文,曾显营,田国彬,杨婧,张盼涛,王彦妮,陈化兰. 中国预防兽医学报. 2012(05)
[2]鸭IL-2 mRNA SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法的建立[J]. 于学武,郑世民,葛宝伟,刘超男,高雪丽. 中国兽医杂志. 2011(12)
[3]AA肉鸡免疫禽流感油乳剂灭活疫苗细胞免疫应答的变化[J]. 王彦妮,曾显营,田国彬,苏文,陈化兰. 中国预防兽医学报. 2011(02)
[4]左旋咪唑对新城疫灭活疫苗抗体滴度的影响[J]. 王新卫,杨永珍,王艳. 中国农学通报. 2008(12)
[5]鸭IFN-γ mRNA实时荧光定量RT-PCR方法的建立[J]. 谢秀兰,汤承,杨发龙,岳华. 动物医学进展. 2008(05)
[6]左旋咪唑对鸡新城疫抗体滴度的影响[J]. 宋修春,许秋菊,王春玲. 家禽科学. 2007(05)
[7]H5N1亚型禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达及其生物活性鉴定[J]. 张晓霁,刘明,刘春国,杨涛,张云. 中国生物工程杂志. 2007(03)
[8]蜂胶的免疫增强作用及其在疫苗中的应用[J]. 王茹,谢印乾,沈志强,缪晓青. 中国畜牧兽医. 2007(02)
[9]鸭GAPDH基因实时荧光定量PCR方法的建立[J]. 杨发龙,岳华,谢秀兰,贾文祥. 西南民族大学学报(自然科学版). 2007(01)
[10]蜂胶佐剂在畜禽疫苗中的应用[J]. 裴志花,王开. 吉林畜牧兽医. 2007(01)
硕士论文
[1]禽流感核酸疫苗免疫保护性研究[D]. 邱美珍.湖南师范大学 2005
本文编号：3050982
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
1.1 禽流感概述
1.2 禽流感疫苗概述
1.2.1 禽流感全病毒灭活疫苗
1.2.2 减毒活疫苗
1.2.3 禽流感亚单位疫苗
1.2.4 禽流感 DNA 疫苗
1.2.5 基因重组活载体疫苗
1.3 疫苗佐剂的研究现状和未来发展趋势
1.3.1 疫苗佐剂的作用、选择及安全性
1.3.2 佐剂的分类
1.4 机体抗流感病毒免疫应答反应
1.4.1 禽类对高致病性禽流感的免疫机制
1.4.2 疫苗免疫与病毒进化
1.5 本研究的目的和意义
第二章 肉鸭最佳首免日龄研究
2.1 材料
2.1.1 疫苗生产种毒及攻毒用毒株
2.1.2 禽流感 Re-6 株标准抗原、阳性和阴性血清
2.1.3 实验动物和鸡胚
2.2 方法
2.2.1 攻毒毒株鸡胚半数感染量（EID50）测定
2.2.2 禽流感油乳剂灭活疫苗制备
2.2.3 樱桃谷肉鸭禽流感病毒携带情况和母源抗体消长规律监测
2.2.4 母源抗体攻毒保护试验
2.2.5 不同日龄鸭免疫禽流感灭活疫苗 HI 抗体检测
2.3 结果
2.3.1 攻毒病毒株鸡胚半数感染量（EID50）测定结果
2.3.2 白油佐剂禽流感灭活疫苗制备检测结果
2.3.3 疫苗安全性检验
2.3.4 樱桃谷肉鸭禽流感病毒携带情况和母源抗体消长规律监测结果
2.3.5 樱桃谷肉鸭母源抗体攻毒保护结果
2.3.6 不同日龄鸭免疫禽流感灭活疫苗 HI 抗体检测
2.4 讨论
第三章 最佳含量的重组 SEA 和左旋咪唑禽流感灭活疫苗研究
3.1 材料
3.1.1 疫苗生产种毒、攻毒用毒株、菌种
3.1.2 实验动物和鸡胚
3.1.3 仪器和主要试剂
3.2 方法
3.2.1 rSEA 的制备
3.2.2 不同佐剂禽流感灭活疫苗的制备
3.2.3 不同 rSEA 含量白油佐剂禽流感灭活疫苗免疫效果比较
3.2.4 白油、白油+rSEA、白油+rrSEA 佐剂禽流感灭活疫苗免疫抗体比较
3.2.5 左旋咪唑作为禽流感疫苗佐剂剂量优化研究
3.3 结果
3.3.1 重组 SEA SDS-PAGE 电泳及 western-blot 鉴定结果
3.3.2 重组 SEA 对体外淋巴细胞的增殖活性试验结果
3.3.3 不同 rSEA 含量白油佐剂禽流感灭活疫苗免疫效果比较
3.3.4 白油、白油+rSEA、白油+rrSEA 佐剂禽流感灭活疫苗免疫抗体比较
3.3.5 左旋咪唑作为禽流感疫苗佐剂剂量优化结果
3.4 讨论
第四章 不同佐剂禽流感灭活疫苗对 SPF 鸭免疫效果研究
4.1 材料
4.1.1 疫苗种毒、攻毒用毒株
4.1.2 禽流感 HI 试验抗原、阳性和阴性血清
4.1.3 主要仪器
4.1.4 疫苗佐剂
4.1.5 实验动物和鸡胚
4.2 方法
4.2.1 白油佐剂和白油+rSEA 佐剂禽流感灭活疫苗的制备
4.2.2 蜂胶佐剂禽流感灭活疫苗的制备
4.2.3 Montanide ISA 71VG 佐剂禽流感灭活疫苗的制备
4.2.4 Montanide ISA 206VG 佐剂禽流感灭活疫苗的制备
4.2.5 左旋咪唑佐剂、rSEA 佐剂及无佐剂禽流感灭活疫苗的制备
4.2.6 不同佐剂禽流感疫苗安全性检验
4.2.7 试验分组、疫苗免疫及攻毒保护效果研究
4.3 结果
4.3.1 不同佐剂禽流感灭活疫苗安全性检验
4.3.2 油乳剂禽流感灭活疫苗免疫 SPF 鸭抗体研究
4.3.3 蜂胶和水剂禽流感灭活疫苗免疫 SPF 鸭后抗体检测
4.3.4 不同佐剂禽流感灭活疫苗免疫后攻毒保护情况
4.4 讨论
第五章 鸭 IFN-γ和 IL-2 mRNA 荧光定量 RT-PCR 方法的建立
5.1 材料
5.2 方法
5.2.1 实时荧光定量 RT-PCR 用引物设计与合成
5.2.2 肉鸭组织 Total RNA 样品的制备和质量鉴定
5.2.3 常规 PCR 反应体系和条件优化
5.2.4 荧光定量 RT-PCR 反应体系和条件优化及相对标准曲线的建立
5.2.5 特异性、稳定性和重复性检测
5.3 结果
5.3.1 组织提取 Total RNA 质量鉴定
5.3.2 常规 PCR 反应体系和条件优化
5.3.3 实时荧光定量 RT-PCR 反应体系和条件优化及相对标准曲线建立
5.3.4 特异性、稳定性和重复性
5.4 讨论
第六章 不同佐剂禽流感灭活疫苗对肉鸭的免疫效果研究
6.1 材料
6.1.1 禽流感灭活疫苗以及攻毒用毒株
6.1.2 主要仪器、材料和试剂
6.1.3 实验动物和鸡胚
6.2 方法
6.2.1 不同佐剂禽流感灭活疫苗免疫肉鸭后的免疫反应及疫苗吸收检测
6.2.2 不同佐剂禽流感灭活苗对樱桃谷鸭免疫攻毒保护试验
6.2.3 统计分析方法
6.3 结果
6.3.1 不同佐剂禽流感灭活疫苗免疫樱桃谷肉鸭 HI 抗体检测
6.3.2 不同佐剂禽流感灭活疫苗对樱桃谷肉鸭外周血淋巴细胞增殖活性的影响
6.3.3 不同佐剂禽流感灭活疫苗免疫樱桃谷肉鸭脾脏中IFN-γ和IL-2 mRNA表达量的检测
6.3.4 不同佐剂疫苗免疫肉鸭后疫苗代谢吸收情况
6.3.5 不同佐剂禽流感灭活疫苗对樱桃谷肉鸭免疫攻毒保护试验
6.4 讨论
第七章 全文结论
参考文献
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]重组SEA增强H5亚型禽流感灭活疫苗对肉鸡的免疫效果研究[J]. 苏文,曾显营,田国彬,杨婧,张盼涛,王彦妮,陈化兰. 中国预防兽医学报. 2012(05)
[2]鸭IL-2 mRNA SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法的建立[J]. 于学武,郑世民,葛宝伟,刘超男,高雪丽. 中国兽医杂志. 2011(12)
[3]AA肉鸡免疫禽流感油乳剂灭活疫苗细胞免疫应答的变化[J]. 王彦妮,曾显营,田国彬,苏文,陈化兰. 中国预防兽医学报. 2011(02)
[4]左旋咪唑对新城疫灭活疫苗抗体滴度的影响[J]. 王新卫,杨永珍,王艳. 中国农学通报. 2008(12)
[5]鸭IFN-γ mRNA实时荧光定量RT-PCR方法的建立[J]. 谢秀兰,汤承,杨发龙,岳华. 动物医学进展. 2008(05)
[6]左旋咪唑对鸡新城疫抗体滴度的影响[J]. 宋修春,许秋菊,王春玲. 家禽科学. 2007(05)
[7]H5N1亚型禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达及其生物活性鉴定[J]. 张晓霁,刘明,刘春国,杨涛,张云. 中国生物工程杂志. 2007(03)
[8]蜂胶的免疫增强作用及其在疫苗中的应用[J]. 王茹,谢印乾,沈志强,缪晓青. 中国畜牧兽医. 2007(02)
[9]鸭GAPDH基因实时荧光定量PCR方法的建立[J]. 杨发龙,岳华,谢秀兰,贾文祥. 西南民族大学学报(自然科学版). 2007(01)
[10]蜂胶佐剂在畜禽疫苗中的应用[J]. 裴志花,王开. 吉林畜牧兽医. 2007(01)
硕士论文
[1]禽流感核酸疫苗免疫保护性研究[D]. 邱美珍.湖南师范大学 2005
本文编号：3050982
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