猪附红细胞体eno基因重组蛋白的制备及免疫效果研究

发布时间：2021-02-26 11:27

　　为了研究猪附红细胞体eno基因重组蛋白的免疫效果,本试验将猪附红细胞体eno基因与pET-15b载体进行连接,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。对表达菌株进行诱导表达、纯化,利用纯化后的猪附红细胞体eno重组蛋白（命名为rMseno）对小鼠进行免疫,从而评价该重组蛋白在小鼠体内产生的免疫应答水平。试验将20只4周龄的雄性昆明小鼠随机分为A、B、C、D 4个组。免疫A组接种纯化后的重组蛋白rMseno;免疫B组接种经IPTG诱导表达后的重组菌E.coli-Mseno;对照C组接种等量PBS;对照D组接种未经过诱导表达的重组菌E.coli-Mseno。通过ELISA检测方法分别测定血清中抗猪附红细胞体特异抗体水平及γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素4（IL-4）细胞因子水平,最后通过脾脏淋巴细胞增殖试验来反映小鼠体内T淋巴细胞的增殖情况。结果显示,构建的重组pET-15b-eno质粒目的基因片段大小为1 632 bp,与预期大小相同;纯化的重组蛋白rMseno大小为61 ku,并能够被鼠抗猪附红细胞体血清所识别;免疫A组和免疫B组小鼠血清中抗猪附红细胞体特异抗体水平,IFN-γ、IL-4细胞... 

【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(07)北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

重组质粒pET-15b-eno的PCR及双酶切鉴定结果

不同免疫组小鼠血清IFN-γ的水平

收集不同浓度咪唑过柱后的洗脱液,将各组分进行SDS-PAGE电泳检测。结果如图3所示,用含20和50 mmol/L咪唑的洗脱液能充分的将杂蛋白洗掉,得到较好的纯化效果。图2 重组质粒pET-15b-eno的PCR及双酶切鉴定结果

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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[2]猪支原体肺炎灭活疫苗及活疫苗佐剂研究[D]. 董璐.山西农业大学 2013
[3]猪附红细胞体小鼠感染模型的建立及血液学指标的检测[D]. 余飞.上海交通大学 2008



本文编号：3052522