EGTA及W7对猪精液液态保存的影响

发布时间：2021-02-27 10:15

　　人工授精的出现可以用来改善家畜繁殖以及打破一些传统生产方式,是现代动物育种中应用最广泛的繁殖技术,避免了疾病传播及节约成本。公猪精液质量对于人工授精的影响极大,可以直接影响母猪受胎率和产仔数。因此,在体外妥善保管猪精液就尤为重要,可以影响精液质量的因素有很多如:保存液、保存温度以及pH值等。常温液态保存是目前养猪业生产上普遍应用的方法。但在此温度下,精子新陈代谢依然存在,生成活性氧,易发生顶体反应,产生获能样变化,导致体外精子活力降低,存活时间缩短。获能的开始与钙离子摄取有关,钙离子与钙调蛋白结合激活Ca²⁺/CaM信号途径,产生超激活反应。Ca²⁺/CaM复合物调节多种酶的活性,导致蛋白质磷酸化,尤其酪氨酸磷酸化,是获能标志。钙离子通过Ca²⁺/CaM信号传导和cAMP/PKA信号传导途径共同调节蛋白质酪氨酸磷酸化。本实验为了抑制精子在常温保存下体外获能采取两种方式,第一种:在保存液Modena中加入螯合剂EGTA对钙离子进行螯合,阻碍细胞外钙离子进入胞内。第二种:在保存液中加入钙调蛋白特异性的拮抗剂W7,尝试通过与C... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 人工授精
    1.2 精液保存现状
        1.2.1 液态保存
        1.2.2 冷冻保存
        1.2.3 常温保存的问题
    1.3 常用液态保存液
    1.4 精子获能
        1.4.1 体内精子获能
        1.4.2 体外保存发生获能
    1.5 钙离子在细胞中主要作用
        1.5.1 钙离子与神经信号转导
        1.5.2 钙离子与凝血
        1.5.3 钙离子与生殖细胞
            1.5.3.1 钙离子在精子获能中的作用
            1.5.3.2 钙离子在卵母细胞激活中的作用
    1.6 螯合剂在精液保存中作用
        1.6.1 金属螯合剂
        1.6.2 EGTA与EDTA
    1.7 钙调蛋白在精液保存中的影响
        1.7.1 钙调蛋白与获能
        1.7.2 钙调蛋白拮抗剂
    1.8 ROS与精子获能
    1.9 研究目的与意义
2 材料与方法
    2.1 实验动物
    2.2 精液采集与稀释
    2.3 主要试剂和溶液配制
    2.4 主要仪器
    2.5 精子质量的检测
        2.5.1 精子活力和运动参数检测
        2.5.2 质膜完整性检测
        2.5.3 精子获能状态检测
        2.5.4 顶体完整性检测
        2.5.5 精子ROS含量检测
    2.6 体外受精
    2.7 实验设计
        2.7.1 常温保存中加入EGTA
        2.7.2常温保存中加入拮抗剂W7
        2.7.3 加入EGTA及W7对精子ROS含量的影响
        2.7.4 受精能力的检测
    2.8 统计分析
3 结果
    3.1 EGTA对猪精液液态保存的影响
        3.1.1 EGTA对保存精子活力和运动参数的影响
        3.1.2 EGTA对保存精子质膜完整性的影响
        3.1.3 EGTA对保存精子获能的影响
        3.1.4 EGTA对精子顶体完整率的影响
    3.2 W7对精子保存的影响
        3.2.1 W7对保存精子活力和运动参数的影响
        3.2.2 W7对保存精子质膜完整性的影响
        3.2.3 W7对保存精子获能的影响
        3.2.4 W7对精子顶体完整率的影响
    3.3 EGTA和W7对液态保存的猪精子ROS含量的影响
    3.4 EGTA和W7对保存的猪精子受精及后续发育能力的影响
        3.4.1 添加EGTA对精子受精的影响
        3.4.2 添加W7对精子受精的影响
4 讨论
    4.1 常温保存中添加EGTA可以提高精子保存质量
    4.2 常温保存中添加W7可以提高精子保存质量
    4.3 EGTA和W7对精子受精能力的影响
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
硕士论文
[1]钙离子诱导的钙调蛋白动力学及热动力学研究[D]. 武光荣.复旦大学 2012



本文编号：3054082