猪源呼肠孤病毒分子流行病学调查及分离株的鉴定

发布时间：2021-02-28 17:54

　　2011年,我国猪群中暴发一种以腹泻等为主要症状的传染病。为了研究“猪腹泻病”中主要病毒性病原在国内的流行情况,本研究对猪源哺乳动物呼肠孤病毒进行了分子流行病学调查；分析了MRV国内流行株与国内外其它毒株间的遗传演化关系。在对病毒分离鉴定方法认识的基础上,利用Vero细胞分离到一株猪源1型呼肠孤病毒；构建了分离株的全长cDNA克隆。本研究为我国猪群中主要病毒病原的分子流行病学特征提供科学依据,同时也丰富了猪源MRV流行病学研究资源。本研究具体内容如下：1中国部分地区猪群中哺乳动物呼肠孤病毒分子流行病学调查为了研究中国猪群中哺乳动物呼肠孤病毒（Mammalian Reovirus, MRV）的分子流行病学,本试验用巢式RT-PCR检测2010年1月到2012年12月送检的不同猪场病料,并对其中45份阳性病料的核酸进行浓缩后用根据S1基因设计的型特异性的引物进行RT-PCR,同时将扩增产物纯化并克隆至T载体经测序后进行进化分析。进化分析结果表明这些毒株分属血清1、2、3型。3型毒株为优势流行毒株,流行范围覆盖大陆绝大部分地区。这些结果丰富了国内MRV基因变异情况的数据,将为新的诊断方法的建... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：97 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
目录
摘要
ABSTRACT
第一章 呼肠孤病毒结构和形态发生学研究进展
    1 呼肠孤病毒基因组和蛋白综述
        1.1 基因组结构
        1.2 内衣壳结构
        1.3 外衣壳
    2 呼肠孤病毒复制的概述
    3 病毒组装的探讨
    4 呼肠孤病毒基因组的组装
    5 病毒包涵体的形态发生
    参考文献
第二章 中国部分地区猪群中哺乳动物呼肠孤病毒分子流行病学调查
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 临床样品
        1.2 RNA提取,RT-套式PCR（RT-nPCR）
        1.3 S1基因的克隆与测序
        1.4 进化分析
    2 结果
        2.1 MRV病料的采集、检测
        2.2 S1基因序列的同源性分析
        2.3 氨基酸序列分析
        2.4 进化分析
    3 讨论
    参考文献
    Abstract
第三章 一株猪源1型呼肠孤病毒的分离及鉴定
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 细胞及试剂
        1.2 引物设计
        1.3 病毒分离
        1.4 病毒的纯化
        1.5 病毒形态学观察
        1.6 病毒RNA提取、核酸电泳、基因的扩增及克隆与序列测定
        1.7 目的基因的序列分析
    2 结果
        2.1 病毒感染单层Vero细胞后的CPE
        2.2 病毒形态学观察
        2.3 病毒全基因组的RNA凝胶电泳
        2.4 病毒S1基因基因同源性分析和核苷酸系统发育进化树分析
        2.5 病毒S2、S3、S4基因核苷酸系统发育进化分析
    3 讨论
    参考文献
    Abstract
第四章 呼肠孤病毒SHR-A株全长CDNA克隆的构建及序列分析
    摘要
    1 材料
        1.1 毒株、菌株、细胞株等主要试剂
        1.2 主要试剂配制
        1.3 MRVs参考毒株全基因序列
        1.4 生物信息学软件
    2 方法
        2.1 病毒增殖
        2.2 病毒浓缩
        2.3 病毒RNA的提取
        2.4 引物设计及合成
        2.5 反转录cDNA合成
        2.6 全基因RT-PCR扩增
        2.7 PCR产物的纯化
        2.8 DNA片段与克隆载体的连接
        2.9 连接产物的转化
        2.10 重组质粒的抽提及测序
        2.11 病毒5'-RACE扩增
        2.12 病毒3'-RACE扩增
        2.13 全基因序列拼接
        2.14 SHR-A与呼肠孤病毒参考株同源性分析
        2.15 SHR-A分离株全基因核苦酸序列进化关系分析
    3 结果
        3.1 病毒基因RT-PCR扩增
        3.2 病毒5'-RACE与3'-RACE PCR扩增结果
        3.3 SHR-A各段基因与MRV参考株同源性分析
    4 讨论
    参考文献
    Abstract
第五章 呼肠孤病毒1型S1、S4基因在SF9昆虫细胞中的表达
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.1 S1基因的PCR扩增
        2.2 重组供体质粒pBAC-S1和pBAC-S4的酶切鉴定
        2.3 重组病毒rBS-S1和rBS-S4的获得
        2.4 重组病毒PCR鉴定
        2.5 表达产物的IFA检测
    3 讨论
    参考文献
    Abstract
全文总结
致谢
硕士期间论文发表情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]果子狸源呼肠孤病毒MPC/04株全基因组序列测定与分析[J]. 邵昱昊,韩宗玺,李慧昕,孔宪刚,刘胜旺.  中国预防兽医学报. 2010(08)
[2]果子狸源呼肠孤病毒的分离鉴定[J]. 邵昱昊,韩宗玺,陈露菲,孔宪刚,刘胜旺.  病毒学报. 2008(05)
[3]呼肠孤病毒3型S1基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立[J]. 冷雪梅,胡建华,高诚,谢建云.  中国兽医科学. 2008(07)
[4]猪呼肠孤病毒SC-A株的分离鉴定及σ2基因的克隆与序列分析[J]. 曾智勇,郭万柱,徐志文,梁海英,宋振辉,殷华平,王新,王小玉.  中国兽医学报. 2008(07)
[5]犬呼肠孤病毒1型BJ-JB-3株的分离鉴定[J]. 周珍辉,陈万荣,向双云,尚太成,付少才.  中国兽医科学. 2008(06)
[6]仔猪腹泻粪样中猪呼肠孤病毒的分离鉴定[J]. 曾智勇,郭万柱,徐志文,宋振辉,殷华平,王新,王小玉.  畜牧兽医学报. 2007(06)
[7]ICTV第八次报告的最新病毒分类系统[J]. 洪健,周雪平.  Virologica Sinica. 2006(01)
[8]最新动物病毒分类简介[J]. 陆承平.  中国病毒学. 2005(06)
[9]呼肠病毒的生物学特征及其致病性[J]. 孙颖,辛绍杰,貌盼勇.  国外医学.流行病学传染病学分册. 2005(03)
[10]呼肠孤病毒与SARS相关的形态学依据[J]. 杨怡,陈德蕙,端青,朱虹,郎振为,孟忻,张德添,张飒.  中国病毒学. 2005(02)

博士论文
[1]猪呼肠孤病毒SC-A株的分离鉴定及全基因组cDNA文库的构建和分子遗传特征分析[D]. 曾智勇.四川农业大学 2006



本文编号：3056226