口蹄疫病毒非结构蛋白2B的离子孔道特性研究
发布时间：2021-03-02 06:36
病毒离子孔道蛋白（Viroporins）是由病毒编码的一类小分子量、疏水性跨膜蛋白。它们一般由50-120个氨基酸残基组成,至少有一个疏水性跨膜结构域。这些疏水性跨膜区能够与宿主细胞内的磷脂双分子层相互作用并使磷脂双分子层扩散。离子孔道蛋白参与破坏宿主细胞的形态并扰乱宿主细胞的生理学功能以保证病毒能够完成其完整的生命周期。小RNA病毒科肠道病毒属病毒编码的2B蛋白具有寡聚化形成跨膜孔道、增加宿主细胞膜通透性、扰乱宿主细胞Ca2+体内平衡、诱导宿主细胞发生自噬以及诱导宿主细胞的凋亡等viroporin特性。本研究中,以小RNA病毒科肠道病毒属中的脊髓灰质炎病毒和柯萨奇病毒的2B蛋白研究为参考,借鉴多种病毒离子孔道蛋白的研究方法,对口蹄疫病毒非结构蛋白2B的结构特性和功能展开初步研究。1.运用在线预测软件对2B蛋白氨基酸序列进行预测,结果显示,亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒2B基因含有462 bp,总共编码154个氨基酸。整条肽链拥有两个疏水区,分别为氨基酸83-104和氨基酸119-137。构建pXJ-FLAG-2B, pXJ-2B-HA及pXJ-2BΔ（110-111）等带有不同标签的重组质粒在B...
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 文献综述
1. 前言
2. 肠道病毒2B蛋白的翻译
3. 肠道病毒2B蛋白的跨膜拓扑结构
4. 肠道病毒非结构蛋白2B离子孔道特性对宿主细胞的影响
4.1 增加宿主细胞的膜结构通透性
2+平衡"> 4.2 扰乱宿主细胞内Ca2+平衡
4.3 诱导宿主细胞凋亡
4.4 诱导细胞自噬
5. 基于2B蛋白的抗病毒药物研究
6. 展望
第二章 口蹄疫病毒非结构蛋白2B的结构特性研究
1. 材料
1.1 质粒和细胞
1.2 主要试剂及仪器
2. 方法
2.1 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒的非结构蛋白2B的在线结构预测
2.2 重组质粒的构建
2.3 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒2B蛋白单体的跨膜方式研究
2.3.1 重组质粒转染及细胞培养
2.3.2 荧光观察
2.4 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒2B蛋白单体的亚细胞定位研究
2.4.1 重组质粒转染及细胞培养
2.4.2 荧光观察
2.5 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒2B蛋白单体的相互作用研究
2.5.1 2B蛋白单体在真核细胞内的相互作用
2.5.2 2B蛋白单体体外寡聚化作用
2.5.2.1 2B蛋白的原核表达及纯化
2.5.2.2 2B蛋白的体外寡聚化作用
3. 结果
3.1 2B蛋白疏水性跨膜区预测
3.2 重组质粒的构建
3.3 2B蛋白单体在细胞中的跨膜拓扑结构
3.4 2B蛋白单体在细胞中的亚细胞定位
3.5 2B蛋白单体的相互作用
3.5.1 2B蛋白在细胞内的相互作用
3.5.2 2B蛋白在细胞外的相互作用
3.5.2.1 2B蛋白在大肠杆菌C43（DE3）中的可溶性表达及纯化
3.5.2.2 2B蛋白的细胞外寡聚化作用
4. 讨论
第三章 口蹄疫病毒非结构蛋白2B的功能特性研究
1. 材料
1.1 质粒和细胞
1.2 主要试剂及仪器
2. 方法
2.1 2B蛋白在大肠杆菌中毒性分析
2.1.1 2B蛋白对大肠杆菌的增殖影响
2.1.2 2B蛋白在大肠杆菌中的表达观察
2+的影响"> 2.2 2B蛋白对BHK-21细胞内Ca2+的影响
2.3 2B蛋白引发细胞发生自噬研究
3. 结果
3.1 2B蛋白对大肠杆菌的毒性分析
3.1.1 大肠杆菌BL21（DE3）和C43（DE3）的增殖
3.1.2 2B蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）和C43（DE3）中的表达
2+的影响"> 3.2 2B蛋白对BHK-21细胞内Ca2+的影响
3.3 2B蛋白诱导细胞发生自噬
3.3.1 Western-blot检测表达2B蛋白的BHK-21细胞内的LC3的切割
3.3.2 免疫荧光法观察LC3在BHK-21细胞内的集聚
3.3.3 荧光观察LC3在H1299（GFP-LC3）细胞内的集聚
4. 讨论
结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]参与小RNA病毒感染和复制的宿主及病毒蛋白功能研究进展[J]. 魏衍全,郭慧琛,徐进,孙德惠,孙世琪. 中国人兽共患病学报. 2013(01)
[2]口蹄疫病毒非结构蛋白3D原核表达、纯化和反应原性分析[J]. 骆继怀,杨利恒,高闪电,独军政,常惠芸,薛慧文. 甘肃农业大学学报. 2012(03)
[3]口蹄疫非结构蛋白研究进展[J]. 朱咏梅,朱来华,郑小龙,王宫璞,王琰. 中国动物检疫. 2011(05)
[4]Ion Channels as Antivirus Targets[J]. Xin LIANG and Zhi-yuan LI (State Key Laboratory of Respiratory Diseases, Guangzhou Institute of Biomedicine and Health, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou 510530, China ). Virologica Sinica. 2010(04)
[5]口蹄疫病毒非结构蛋白3AB、3A基因的克隆与原核表达[J]. 张先锋,易忠,魏玉荣,胡尔玛西,符子华. 新疆农业大学学报. 2010(03)
[6]病毒跨膜蛋白的结构功能与抗病毒药物设计[J]. 杨金华,叶荣. 微生物与感染. 2009(04)
[7]小RNA病毒蛋白与细胞凋亡的关系[J]. 马晓霞,周建华,沈心亮. 生物技术通讯. 2009(01)
[8]口蹄疫病毒非结构蛋白3A、3B和2C基因的表达及产物纯化与活性检测[J]. 付元芳,卢曾军,曹轶梅,郭建宏,张小丽,田美娜,刘在新,才学鹏. 微生物学报. 2008(06)
[9]口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因的可溶性表达与反应原性的鉴定[J]. 祝秀梅,卢曾军,胡永浩,曹轶梅,马江涛,刘在新. 农业生物技术学报. 2008(01)
[10]口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的克隆与原核表达[J]. 罗宝正,薄清如,王伟毅,程钢,何蕴韶. 农业生物技术学报. 2005(02)
硕士论文
[1]口蹄疫病毒3B非结构蛋白单克隆抗体的制备及应用[D]. 李永亮.中国农业科学院 2009
本文编号：3058800
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
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英文缩略词表
第一章 文献综述
1. 前言
2. 肠道病毒2B蛋白的翻译
3. 肠道病毒2B蛋白的跨膜拓扑结构
4. 肠道病毒非结构蛋白2B离子孔道特性对宿主细胞的影响
4.1 增加宿主细胞的膜结构通透性
2+平衡"> 4.2 扰乱宿主细胞内Ca2+平衡
4.3 诱导宿主细胞凋亡
4.4 诱导细胞自噬
5. 基于2B蛋白的抗病毒药物研究
6. 展望
第二章 口蹄疫病毒非结构蛋白2B的结构特性研究
1. 材料
1.1 质粒和细胞
1.2 主要试剂及仪器
2. 方法
2.1 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒的非结构蛋白2B的在线结构预测
2.2 重组质粒的构建
2.3 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒2B蛋白单体的跨膜方式研究
2.3.1 重组质粒转染及细胞培养
2.3.2 荧光观察
2.4 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒2B蛋白单体的亚细胞定位研究
2.4.1 重组质粒转染及细胞培养
2.4.2 荧光观察
2.5 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒2B蛋白单体的相互作用研究
2.5.1 2B蛋白单体在真核细胞内的相互作用
2.5.2 2B蛋白单体体外寡聚化作用
2.5.2.1 2B蛋白的原核表达及纯化
2.5.2.2 2B蛋白的体外寡聚化作用
3. 结果
3.1 2B蛋白疏水性跨膜区预测
3.2 重组质粒的构建
3.3 2B蛋白单体在细胞中的跨膜拓扑结构
3.4 2B蛋白单体在细胞中的亚细胞定位
3.5 2B蛋白单体的相互作用
3.5.1 2B蛋白在细胞内的相互作用
3.5.2 2B蛋白在细胞外的相互作用
3.5.2.1 2B蛋白在大肠杆菌C43（DE3）中的可溶性表达及纯化
3.5.2.2 2B蛋白的细胞外寡聚化作用
4. 讨论
第三章 口蹄疫病毒非结构蛋白2B的功能特性研究
1. 材料
1.1 质粒和细胞
1.2 主要试剂及仪器
2. 方法
2.1 2B蛋白在大肠杆菌中毒性分析
2.1.1 2B蛋白对大肠杆菌的增殖影响
2.1.2 2B蛋白在大肠杆菌中的表达观察
2+的影响"> 2.2 2B蛋白对BHK-21细胞内Ca2+的影响
2.3 2B蛋白引发细胞发生自噬研究
3. 结果
3.1 2B蛋白对大肠杆菌的毒性分析
3.1.1 大肠杆菌BL21（DE3）和C43（DE3）的增殖
3.1.2 2B蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）和C43（DE3）中的表达
2+的影响"> 3.2 2B蛋白对BHK-21细胞内Ca2+的影响
3.3 2B蛋白诱导细胞发生自噬
3.3.1 Western-blot检测表达2B蛋白的BHK-21细胞内的LC3的切割
3.3.2 免疫荧光法观察LC3在BHK-21细胞内的集聚
3.3.3 荧光观察LC3在H1299（GFP-LC3）细胞内的集聚
4. 讨论
结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]参与小RNA病毒感染和复制的宿主及病毒蛋白功能研究进展[J]. 魏衍全,郭慧琛,徐进,孙德惠,孙世琪. 中国人兽共患病学报. 2013(01)
[2]口蹄疫病毒非结构蛋白3D原核表达、纯化和反应原性分析[J]. 骆继怀,杨利恒,高闪电,独军政,常惠芸,薛慧文. 甘肃农业大学学报. 2012(03)
[3]口蹄疫非结构蛋白研究进展[J]. 朱咏梅,朱来华,郑小龙,王宫璞,王琰. 中国动物检疫. 2011(05)
[4]Ion Channels as Antivirus Targets[J]. Xin LIANG and Zhi-yuan LI (State Key Laboratory of Respiratory Diseases, Guangzhou Institute of Biomedicine and Health, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou 510530, China ). Virologica Sinica. 2010(04)
[5]口蹄疫病毒非结构蛋白3AB、3A基因的克隆与原核表达[J]. 张先锋,易忠,魏玉荣,胡尔玛西,符子华. 新疆农业大学学报. 2010(03)
[6]病毒跨膜蛋白的结构功能与抗病毒药物设计[J]. 杨金华,叶荣. 微生物与感染. 2009(04)
[7]小RNA病毒蛋白与细胞凋亡的关系[J]. 马晓霞,周建华,沈心亮. 生物技术通讯. 2009(01)
[8]口蹄疫病毒非结构蛋白3A、3B和2C基因的表达及产物纯化与活性检测[J]. 付元芳,卢曾军,曹轶梅,郭建宏,张小丽,田美娜,刘在新,才学鹏. 微生物学报. 2008(06)
[9]口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因的可溶性表达与反应原性的鉴定[J]. 祝秀梅,卢曾军,胡永浩,曹轶梅,马江涛,刘在新. 农业生物技术学报. 2008(01)
[10]口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的克隆与原核表达[J]. 罗宝正,薄清如,王伟毅,程钢,何蕴韶. 农业生物技术学报. 2005(02)
硕士论文
[1]口蹄疫病毒3B非结构蛋白单克隆抗体的制备及应用[D]. 李永亮.中国农业科学院 2009
本文编号：3058800
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