转基因体细胞克隆绵羊印记基因DNA甲基化研究
发布时间：2021-03-02 10:07
目前,很多研究表明转基因克隆动物中DNA甲基化表现为多相的。但是,很少有研究证明转基因体细胞克隆绵羊中的DNA甲基化水平,可能主要是由于缺少转基因体细胞克隆绵羊的材料,或者绵羊基因组中的印记基因的信息。为了研究转基因体细胞克隆绵羊重编程的程度,本研究中以印记基因H19, IGF2, IGF2R, DLK1和Gtl2为研究对象,研究其CpG岛或者差异甲基化区域（differentially methylated regions,DMR）在转基因体细胞克隆绵羊不同组织（心脏、肺脏、肌肉）DNA甲基化程度。首先,制作石蜡切片、HE染色观察心脏、肺脏、肌肉的形态；然后利用生物信息学软件或者在线数据库分析以上5个印记基因,包括基因结构、CpG岛预测、蛋白质结构预测、构建分子进化树；接着,利用MassArray平台检测了5个印记基因在3种不同组织的甲基化水平；最后,根据获得的甲基化数据,进行了深度数据挖掘分析。通过以上实验,得到的结果如下：1.转基因体细胞克隆绵羊死产绵羊心脏、肺脏、肌肉3种组织经病理组织形态学观察没有明显异常,总体器官形态正常。2.五个印记基因中11个CpG岛,包括基因上游序列、...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：130 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
印记的生命周期[48]
图3 Igf2/m9和Igf2r/Airn印记调控原理Fig.3 Imprinted regulation of Igf2/H 19 and Igf2r/Airn loci1.3.5.2 Igf2r/Airn虽然不是进化最古老的，但是在IgGr/Airn簇中ncRNA模式是一个通用机制，可能也是被描述的最完整的（见图3b)。另外两个确定的簇是IC2/Kcnql 簇和 Gnas 簇，可能 PWS/AS 和 DllcI/Dio3 也利用 ncRNA 模式，但是需要更多的研宄工作来确定ncRNA在这些印记基因簇中的作用"“〕。在ncRNA模式中，ICR内的启动子不同程度甲基化调控着ncRNA的表达：当ICR未甲基化，ncRNA表达，顺式连锁基因被抑制，另一面，当ICR甲基化，ncRNA被抑制，.顺式连锁基因表达。在丨gf2r/Airn簇中，ncRNAAim抑制IgfZr无处不在，Slc22a2和Slc22a3在胎盘。虽然这种抑制机制不清楚，一种假设认为在胎盘中Airn与Slc22a3启动子、H3K9组蛋白甲基转移酶G9a相互作用导致转录表观遗传沉默在鼠和人中，Igf2r/Airn簇的调控机制有些差异。在鼠中，IgfZr母系
内蒙古农业大学硕士学位论文 1J_甲基化。当母本中DMR2的DNA甲基化被维持，则不会激活H3K4的甲基化，在父本中也是DMR2，不过这促进了 Airn转录的沉默[^。1.3.5.3 Dlkl-Dio3DLK1-D103簇通过DNA甲基化和核心组蛋白的尾部修饰来调控亲本不同染色体的印记调控区域，而大多数研宄多是针对印记域内的DNA甲基化和组蛋白修饰，并且己经证明了，印记域ICR的DNA甲基化确实维持正确的基因组印记，而且ICR内的microRNA也可能参与印记调控。(a) (b)
【参考文献】：
期刊论文
[1]1例转基因体细胞克隆牛主要脏器的组织病理学观察[J]. 袁苏娅,姬丽娜,王勇胜,曾晓萍,卿素珠,张涌. 中国兽医学报. 2013(01)
[2]1例转基因克隆牛脑和免疫器官组织形态观察报告[J]. 徐金霞,张羽,王勇胜,边珍,卿素珠,张涌. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2012(06)
[3]克隆猪印迹基因IGF2/H19印迹控制区的甲基化状态[J]. 吴志强,谢一妮,张廷宇,戴建军,吴彩凤,马恒东,张德福. 中国畜牧兽医. 2011(11)
[4]鸡DLK1基因的生物信息学分析[J]. 闫晓红,王宁. 东北农业大学学报. 2011(06)
[5]转基因动物新技术研究进展[J]. 罗庆苗,苗向阳,张瑞杰. 遗传. 2011(05)
[6]Non-coding RNAs and the acquisition of genomic imprinting in mammals[J]. ZHANG YiJun & QU LiangHu Key Laboratory of Gene Engineering of the Ministry of Education,State Key Laboratory for Biocontrol,Sun Yan-Sen University,Guangzhou 510275,China. Science in China（Series C:Life Sciences）. 2009(03)
[7]一例体细胞克隆黄牛肺脏的组织结构观察[J]. 王晓丽,韦精卫,房慧伶,孟凡丽,辛立江,向长剑,石德顺. 中国畜牧兽医. 2009(02)
[8]内蒙古首例体细胞克隆牛2日龄死亡后的病理学观察[J]. 顾玉芳,李善姬,吴素清. 长江大学学报(自科版)农学卷. 2007(04)
[9]成年核移植山羊生长相关基因的表达分析(英文)[J]. 邢宝松,徐银学,成勇,刘红林,杜淼. 遗传学报. 2007(08)
[10]山羊卵核移植的研究[J]. 张涌,王建辰,钱菊汾,郝志明. 中国农业科学. 1991(05)
博士论文
[1]乳腺特异表达嗜热菌糖苷酶转基因牛的研究[D]. 李璐.内蒙古农业大学 2012
[2]转fat-1基因体细胞克隆绵羊的研究[D]. 张东.内蒙古农业大学 2011
[3]克隆猪印迹基因表达及其甲基化状态研究[D]. 魏延昌.东北农业大学 2010
[4]克隆绵羊印记相关基因的DNA甲基化研究[D]. 赵丽霞.内蒙古农业大学 2010
硕士论文
[1]克隆猪部分组织病理学及生理生化指标分析[D]. 陈会兰.上海海洋大学 2012
[2]牛Gtl2基因的克隆及Dlk1-Gtl2印记区域在体细胞核移植牛中的DNA甲基化状态分析[D]. 苏红.河北农业大学 2011
[3]猪DLK1-DIO3印记域4个候选印记基因的分离及其单等位基因表达分析[D]. 杨宗林.西南大学 2009
本文编号：3059080
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：130 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
印记的生命周期[48]
图3 Igf2/m9和Igf2r/Airn印记调控原理Fig.3 Imprinted regulation of Igf2/H 19 and Igf2r/Airn loci1.3.5.2 Igf2r/Airn虽然不是进化最古老的，但是在IgGr/Airn簇中ncRNA模式是一个通用机制，可能也是被描述的最完整的（见图3b)。另外两个确定的簇是IC2/Kcnql 簇和 Gnas 簇，可能 PWS/AS 和 DllcI/Dio3 也利用 ncRNA 模式，但是需要更多的研宄工作来确定ncRNA在这些印记基因簇中的作用"“〕。在ncRNA模式中，ICR内的启动子不同程度甲基化调控着ncRNA的表达：当ICR未甲基化，ncRNA表达，顺式连锁基因被抑制，另一面，当ICR甲基化，ncRNA被抑制，.顺式连锁基因表达。在丨gf2r/Airn簇中，ncRNAAim抑制IgfZr无处不在，Slc22a2和Slc22a3在胎盘。虽然这种抑制机制不清楚，一种假设认为在胎盘中Airn与Slc22a3启动子、H3K9组蛋白甲基转移酶G9a相互作用导致转录表观遗传沉默在鼠和人中，Igf2r/Airn簇的调控机制有些差异。在鼠中，IgfZr母系
内蒙古农业大学硕士学位论文 1J_甲基化。当母本中DMR2的DNA甲基化被维持，则不会激活H3K4的甲基化，在父本中也是DMR2，不过这促进了 Airn转录的沉默[^。1.3.5.3 Dlkl-Dio3DLK1-D103簇通过DNA甲基化和核心组蛋白的尾部修饰来调控亲本不同染色体的印记调控区域，而大多数研宄多是针对印记域内的DNA甲基化和组蛋白修饰，并且己经证明了，印记域ICR的DNA甲基化确实维持正确的基因组印记，而且ICR内的microRNA也可能参与印记调控。(a) (b)
【参考文献】：
期刊论文
[1]1例转基因体细胞克隆牛主要脏器的组织病理学观察[J]. 袁苏娅,姬丽娜,王勇胜,曾晓萍,卿素珠,张涌. 中国兽医学报. 2013(01)
[2]1例转基因克隆牛脑和免疫器官组织形态观察报告[J]. 徐金霞,张羽,王勇胜,边珍,卿素珠,张涌. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2012(06)
[3]克隆猪印迹基因IGF2/H19印迹控制区的甲基化状态[J]. 吴志强,谢一妮,张廷宇,戴建军,吴彩凤,马恒东,张德福. 中国畜牧兽医. 2011(11)
[4]鸡DLK1基因的生物信息学分析[J]. 闫晓红,王宁. 东北农业大学学报. 2011(06)
[5]转基因动物新技术研究进展[J]. 罗庆苗,苗向阳,张瑞杰. 遗传. 2011(05)
[6]Non-coding RNAs and the acquisition of genomic imprinting in mammals[J]. ZHANG YiJun & QU LiangHu Key Laboratory of Gene Engineering of the Ministry of Education,State Key Laboratory for Biocontrol,Sun Yan-Sen University,Guangzhou 510275,China. Science in China（Series C:Life Sciences）. 2009(03)
[7]一例体细胞克隆黄牛肺脏的组织结构观察[J]. 王晓丽,韦精卫,房慧伶,孟凡丽,辛立江,向长剑,石德顺. 中国畜牧兽医. 2009(02)
[8]内蒙古首例体细胞克隆牛2日龄死亡后的病理学观察[J]. 顾玉芳,李善姬,吴素清. 长江大学学报(自科版)农学卷. 2007(04)
[9]成年核移植山羊生长相关基因的表达分析(英文)[J]. 邢宝松,徐银学,成勇,刘红林,杜淼. 遗传学报. 2007(08)
[10]山羊卵核移植的研究[J]. 张涌,王建辰,钱菊汾,郝志明. 中国农业科学. 1991(05)
博士论文
[1]乳腺特异表达嗜热菌糖苷酶转基因牛的研究[D]. 李璐.内蒙古农业大学 2012
[2]转fat-1基因体细胞克隆绵羊的研究[D]. 张东.内蒙古农业大学 2011
[3]克隆猪印迹基因表达及其甲基化状态研究[D]. 魏延昌.东北农业大学 2010
[4]克隆绵羊印记相关基因的DNA甲基化研究[D]. 赵丽霞.内蒙古农业大学 2010
硕士论文
[1]克隆猪部分组织病理学及生理生化指标分析[D]. 陈会兰.上海海洋大学 2012
[2]牛Gtl2基因的克隆及Dlk1-Gtl2印记区域在体细胞核移植牛中的DNA甲基化状态分析[D]. 苏红.河北农业大学 2011
[3]猪DLK1-DIO3印记域4个候选印记基因的分离及其单等位基因表达分析[D]. 杨宗林.西南大学 2009
本文编号：3059080
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