H9N2亚型流感病毒NS1蛋白位点突变对IFN-β及其诱导基因转录活性的影响
发布时间：2021-03-03 15:32
利用反向遗传技术拯救了H9N2亚型流感病毒NS1蛋白效应区第114,124,202和212位的定点突变病毒。病毒感染后9 h,荧光定量PCR结果显示,当NS1蛋白发生P114S、M124V、S212P氨基酸置换后,可以显著抑制IFN-β及RIG-1、PKR、OAS1、Mx1和ISG15等干扰素刺激基因（ISGs） mRNA的转录活性。由此表明,NS1蛋白的114,124和212位点与H9N2亚型流感病毒拮抗宿主先天性免疫应答密切相关。
【文章来源】：中国兽医学报. 2020,40(05)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
G1毒株反向遗传重组质粒凝胶电泳结果
将8质粒转染的293T细胞上清经MDCK细胞增殖后,血凝试验结果证实NS1氨基酸位点未置换病毒及4株NS1氨基酸位点置换病毒均具有血凝活性(图2)。提取血凝结果阳性细胞上清RNA,经RT-PCR扩增拯救病毒的NS基因。基因测序结果显示,NS1蛋白的114位由核苷酸CCC编码的氨基酸P置换为TCC编码的S,124位由ATG编码的M置换为GTG编码的V,202位由ACT编码的T置换为GCT编码的A,212位由TCT编码的S置换为CCT编码的P,所有置换位点均与预期相符。将拯救的5株病毒分别命名为:NS1基因未突变的亲本毒株reG1、NS1基因位点置换毒株reG1-NS1P114S、reG1-NS1M124V、reG1-NS1T202A和reG1-NS1S212P。2.3 拯救病毒TCID50测定结果
利用IFN-β ELISA检测试剂盒,分别测定病毒感染后4,8,12,24 h的细胞上清液中IFN-β的表达水平。如图3所示,在病毒感染后4,8,12 h,reG1-NS1P114S、reG1-NS1M124V、reG1-NS1S212P感染组IFN-β表达水平与reG1相比,均受到显著性抑制(P<0.05～0.01);而reG1-NS1T202A感染组与reG1相比,IFN-β表达水平无显著差异(P>0.05)。但在病毒感染后24 h,所有NS1突变组与reG1相比,均差异不显著(P>0.05)。由此说明,NS1在病毒感染早期对IFN-β的拮抗能力更强。2.5 拯救病毒感染细胞后IFN-β及ISGs的mRNA转录水平变化
本文编号：3061509
【文章来源】：中国兽医学报. 2020,40(05)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
G1毒株反向遗传重组质粒凝胶电泳结果
将8质粒转染的293T细胞上清经MDCK细胞增殖后,血凝试验结果证实NS1氨基酸位点未置换病毒及4株NS1氨基酸位点置换病毒均具有血凝活性(图2)。提取血凝结果阳性细胞上清RNA,经RT-PCR扩增拯救病毒的NS基因。基因测序结果显示,NS1蛋白的114位由核苷酸CCC编码的氨基酸P置换为TCC编码的S,124位由ATG编码的M置换为GTG编码的V,202位由ACT编码的T置换为GCT编码的A,212位由TCT编码的S置换为CCT编码的P,所有置换位点均与预期相符。将拯救的5株病毒分别命名为:NS1基因未突变的亲本毒株reG1、NS1基因位点置换毒株reG1-NS1P114S、reG1-NS1M124V、reG1-NS1T202A和reG1-NS1S212P。2.3 拯救病毒TCID50测定结果
利用IFN-β ELISA检测试剂盒,分别测定病毒感染后4,8,12,24 h的细胞上清液中IFN-β的表达水平。如图3所示,在病毒感染后4,8,12 h,reG1-NS1P114S、reG1-NS1M124V、reG1-NS1S212P感染组IFN-β表达水平与reG1相比,均受到显著性抑制(P<0.05～0.01);而reG1-NS1T202A感染组与reG1相比,IFN-β表达水平无显著差异(P>0.05)。但在病毒感染后24 h,所有NS1突变组与reG1相比,均差异不显著(P>0.05)。由此说明,NS1在病毒感染早期对IFN-β的拮抗能力更强。2.5 拯救病毒感染细胞后IFN-β及ISGs的mRNA转录水平变化
本文编号：3061509
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