新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及油乳剂灭活疫苗的制备
发布时间：2021-03-04 19:52
新型鸭呼肠孤病毒（Novel duck reovirus,NDRV）病是一种以脾脏肿大、出血、坏死为主要特征的疾病,自2017年以来,发病率和死亡率相对较高,给我国养鸭业造成了严重的经济损失。本研究从临床疑似样品中分离到NDRV,对分离株进行分离鉴定,构建病毒感染模型,制备油乳剂灭活疫苗,为NDRV的防控提供技术支持。本实验室在2017年2019年对来自山东、安徽等地送检的30份疑似患病样品进行RT-PCR检测,结果显示10份样品为阳性。对这10份阳性样品进行病毒分离,接种SPF鸡胚胚体明显出血,接种鸡胚肝细胞产生合胞体病变。分离株测序后对其进行同源性比对分析并绘制遗传进化树,同源性比对结果显示:10株分离株的同源性在97.4%99.4%之间,分离株与DRV经典毒株的同源性在94.6%96.5%之间,说明NDRV较DRV发生明显的变异。遗传进化树结果显示:分离株与水禽源呼肠孤病毒位于同一分支,说明NDRV与水禽源呼肠孤病毒的遗传关系相对较近。通过对分离株进行同源性比对及遗传进化树分析,SDYC株与DRV的同源性差异最大,...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
病毒感染SPF鸡胚的病变图
新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及油乳剂灭活疫苗的制备243结果与分析3.1病毒的分离鉴定结果3.1.1病毒的分离与传代病毒分离液接种SPF鸡胚后，自第三代开始，鸡胚的死亡时间以及剖检病变症状趋于稳定，鸡胚的死亡时间集中在48h~72h，死亡鸡胚的胚体发育不良，胚体全身严重充血、出血症状，主要呈现弥漫性针尖状的出血点。图1病毒感染SPF鸡胚的病变图Figure1CytopathiceffectofSPFchickenembryoinfectedbyNDRVA:鸡胚胚体出血B:鸡胚胚体正常A：EmbryobodybleedingofchickenB：Embryobodyisnormalofchicken病毒分离液接种生长状态良好的鸡胚肝细胞，从第三代开始出现以细胞出现球状融合为特征的合胞体细胞病变。传至第六代后，细胞出现病变的时间以及病变程度趋于稳定，具体表现为：接种病毒后48h有80%细胞产生典型病变特征。图2病毒感染鸡胚肝细胞病变图Figure2CytopathiceffectofchickenlivercancercellsinfectedbytheNDRVA：病毒分离株对鸡胚肝细胞的感染病变B：正常的鸡胚肝细胞A:CytopathiceffectofchickenembryohepatocytesbyNDRVB:Normalchickenembryohepatocytes
新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及油乳剂灭活疫苗的制备26性在35.9%~36.3%之间，同源关系在禽呼肠孤病毒中最远。通过绘制遗传进化树，分析可得：分离株与DRV、GRV在同一分支上，说明新型鸭呼肠孤病毒与水禽源鸭呼肠孤病毒的遗传关系相对较近；分离株与ARV在不同的分支上，说明NDRV与ARV的遗传关系相对较远；分离株与MDRV在两个不同的大的分支上，说明NDRV与MDRV的遗传关系在禽呼肠孤病毒中最远。图4SDYC株与ARV标准株同源性分析Figure4HomologyanalysisofSDYCstrainandARVclassicalstrain图5SDYC株与ARV标准株遗传进化树Figure5GeneticevolutiontreeofSDYCstrainandARVclassicalstrain3.1.5病毒的纯净性检测提取稳定分离出的细胞病毒液，提取RNA或DNA，进行PCR或RT-PCR扩增，
【参考文献】：
期刊论文
[1]新型鸭呼肠孤病毒病浓缩灭活疫苗的制备及免疫原性分析[J]. 陈仕龙,肖世峰,程晓霞,林锋强,王劭,王锦祥,朱小丽,陈少莺. 福建农业学报. 2017(11)
[2]一例雏番鸭新型鸭呼肠孤病毒感染的诊断[J]. 章秋月. 福建畜牧兽医. 2017(03)
[3]新型鸭呼肠孤病毒RT-LAMP检测方法的建立[J]. 于可响,马秀丽,韩宏宇,刘存霞,李玉峰,黄兵,宋敏训. 生物技术通报. 2015(08)
[4]宁波地区新型鸭呼肠孤病毒病的流行情况[J]. 陆新浩,陈秋英,刘鸿,黄建勇,吴勇,任祖伊. 中国家禽. 2015(04)
[5]番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗在番鸭体内中和抗体消长规律的研究[J]. 程晓霞,陈少莺,林锋强,陈仕龙,朱小丽,王劭. 福建农业学报. 2014(01)
[6]番鸭呼肠孤病毒M（M1～M3）基因序列克隆及特性分析[J]. 林锋强,陈少莺,王劭,陈仕龙,程晓霞,朱小丽,李兆龙. 福建农业学报. 2012(09)
[7]鸭脾坏死症的病原学初步观察[J]. 黄显明,张小飞,尹秀凤,王伟,靳雨田. 中国兽医杂志. 2012(08)
[8]一例雏半番鸭疑似新型鸭呼肠孤病毒病的诊治[J]. 刘美荣. 畜禽业. 2012(06)
[9]新型鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定[J]. 陈少莺,陈仕龙,林锋强,王劭,江斌,程晓霞,朱小丽,李兆龙. 病毒学报. 2012(03)
[10]新型鸭呼肠孤病毒病灭活疫苗的制备及免疫原性分析[J]. 陈仕龙,李兆龙,林锋强,王劭,程晓霞,朱小丽,陈少莺. 福建农业学报. 2012(05)
博士论文
[1]两株北京鸭源呼肠孤病毒生物学特性比较[D]. 郑献进.中国农业大学 2016
硕士论文
[1]禽腺病毒血清4型的分离鉴定及环介导等温扩增技术诊断方法的建立[D]. 白元斌.西北农林科技大学 2017
[2]禽呼肠孤病毒流行株的进化及致病性研究[D]. 钟丽.中国农业科学院 2017
[3]一株鹅呼肠孤病毒的分离鉴定及全基因组序列分析[D]. 刘水芳.扬州大学 2015
[4]共表达禽（番鸭）呼肠孤病毒σB-σC-LTB蛋白亚单位疫苗载体的构建及免疫保护的研究[D]. 杨志刚.中国农业科学院 2014
[5]表达禽（番鸭）呼肠孤病毒σC、σB蛋白基因DNA疫苗的构建及免疫效力监测[D]. 蒋慷慨.福建农林大学 2007
本文编号：3063813
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
病毒感染SPF鸡胚的病变图
新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及油乳剂灭活疫苗的制备243结果与分析3.1病毒的分离鉴定结果3.1.1病毒的分离与传代病毒分离液接种SPF鸡胚后，自第三代开始，鸡胚的死亡时间以及剖检病变症状趋于稳定，鸡胚的死亡时间集中在48h~72h，死亡鸡胚的胚体发育不良，胚体全身严重充血、出血症状，主要呈现弥漫性针尖状的出血点。图1病毒感染SPF鸡胚的病变图Figure1CytopathiceffectofSPFchickenembryoinfectedbyNDRVA:鸡胚胚体出血B:鸡胚胚体正常A：EmbryobodybleedingofchickenB：Embryobodyisnormalofchicken病毒分离液接种生长状态良好的鸡胚肝细胞，从第三代开始出现以细胞出现球状融合为特征的合胞体细胞病变。传至第六代后，细胞出现病变的时间以及病变程度趋于稳定，具体表现为：接种病毒后48h有80%细胞产生典型病变特征。图2病毒感染鸡胚肝细胞病变图Figure2CytopathiceffectofchickenlivercancercellsinfectedbytheNDRVA：病毒分离株对鸡胚肝细胞的感染病变B：正常的鸡胚肝细胞A:CytopathiceffectofchickenembryohepatocytesbyNDRVB:Normalchickenembryohepatocytes
新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及油乳剂灭活疫苗的制备26性在35.9%~36.3%之间，同源关系在禽呼肠孤病毒中最远。通过绘制遗传进化树，分析可得：分离株与DRV、GRV在同一分支上，说明新型鸭呼肠孤病毒与水禽源鸭呼肠孤病毒的遗传关系相对较近；分离株与ARV在不同的分支上，说明NDRV与ARV的遗传关系相对较远；分离株与MDRV在两个不同的大的分支上，说明NDRV与MDRV的遗传关系在禽呼肠孤病毒中最远。图4SDYC株与ARV标准株同源性分析Figure4HomologyanalysisofSDYCstrainandARVclassicalstrain图5SDYC株与ARV标准株遗传进化树Figure5GeneticevolutiontreeofSDYCstrainandARVclassicalstrain3.1.5病毒的纯净性检测提取稳定分离出的细胞病毒液，提取RNA或DNA，进行PCR或RT-PCR扩增，
【参考文献】：
期刊论文
[1]新型鸭呼肠孤病毒病浓缩灭活疫苗的制备及免疫原性分析[J]. 陈仕龙,肖世峰,程晓霞,林锋强,王劭,王锦祥,朱小丽,陈少莺. 福建农业学报. 2017(11)
[2]一例雏番鸭新型鸭呼肠孤病毒感染的诊断[J]. 章秋月. 福建畜牧兽医. 2017(03)
[3]新型鸭呼肠孤病毒RT-LAMP检测方法的建立[J]. 于可响,马秀丽,韩宏宇,刘存霞,李玉峰,黄兵,宋敏训. 生物技术通报. 2015(08)
[4]宁波地区新型鸭呼肠孤病毒病的流行情况[J]. 陆新浩,陈秋英,刘鸿,黄建勇,吴勇,任祖伊. 中国家禽. 2015(04)
[5]番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗在番鸭体内中和抗体消长规律的研究[J]. 程晓霞,陈少莺,林锋强,陈仕龙,朱小丽,王劭. 福建农业学报. 2014(01)
[6]番鸭呼肠孤病毒M（M1～M3）基因序列克隆及特性分析[J]. 林锋强,陈少莺,王劭,陈仕龙,程晓霞,朱小丽,李兆龙. 福建农业学报. 2012(09)
[7]鸭脾坏死症的病原学初步观察[J]. 黄显明,张小飞,尹秀凤,王伟,靳雨田. 中国兽医杂志. 2012(08)
[8]一例雏半番鸭疑似新型鸭呼肠孤病毒病的诊治[J]. 刘美荣. 畜禽业. 2012(06)
[9]新型鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定[J]. 陈少莺,陈仕龙,林锋强,王劭,江斌,程晓霞,朱小丽,李兆龙. 病毒学报. 2012(03)
[10]新型鸭呼肠孤病毒病灭活疫苗的制备及免疫原性分析[J]. 陈仕龙,李兆龙,林锋强,王劭,程晓霞,朱小丽,陈少莺. 福建农业学报. 2012(05)
博士论文
[1]两株北京鸭源呼肠孤病毒生物学特性比较[D]. 郑献进.中国农业大学 2016
硕士论文
[1]禽腺病毒血清4型的分离鉴定及环介导等温扩增技术诊断方法的建立[D]. 白元斌.西北农林科技大学 2017
[2]禽呼肠孤病毒流行株的进化及致病性研究[D]. 钟丽.中国农业科学院 2017
[3]一株鹅呼肠孤病毒的分离鉴定及全基因组序列分析[D]. 刘水芳.扬州大学 2015
[4]共表达禽（番鸭）呼肠孤病毒σB-σC-LTB蛋白亚单位疫苗载体的构建及免疫保护的研究[D]. 杨志刚.中国农业科学院 2014
[5]表达禽（番鸭）呼肠孤病毒σC、σB蛋白基因DNA疫苗的构建及免疫效力监测[D]. 蒋慷慨.福建农林大学 2007
本文编号：3063813
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3063813.html
