伪狂犬病病毒gE/gI基因在昆虫细胞中的表达及鉴定

发布时间：2021-03-04 19:07

　　为获得具有生物活性的伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）gE/gI蛋白,建立PRV抗体快速检测方法。将含有PRV gE、gI基因的质粒pFastBacdual-GP67-gE/gI转化至宿主菌,经位点特异性重组和蓝白斑筛选后获得重组杆粒rBacmid-gE/gI,转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒。采用悬浮的Sf9细胞进行发酵并纯化产物,SDS-PAGE和Western blot分析镍柱纯化后的重组蛋白。结果显示,重组杆粒在4 800 bp处克隆出预期大小的条带,表示重组杆粒构建成功。SDS-PAGE和Western blot表明,在50 ku和65 ku处出现预期大小的条带,能与PRV标准阳性血清特异性反应,不与PRV gE/gI缺失疫苗免疫血清反应。结果表明gE/gI重组蛋白具有良好的反应原性,为PRV抗体快速检测及区分PRV野毒感染和疫苗免疫奠定了基础。 

【文章来源】：动物医学进展. 2020,41(03)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

rBacmid-gE/gI的PCR鉴定结果

gE/gI重组蛋白的Western blot鉴定结果

将经Ni柱纯化过的产物进行SDS-PAGE电泳鉴定结果显示,在50 ku和65 ku处得到2条单一的条带与预期大小相符(图3),表明PRV gE/gI基因在昆虫细胞上成功表达且纯化后蛋白纯度高达90%。利用SDS-PAGE和Western blot技术,变性处理后的纯化产物与PRV标准阳性血清反应,结果显示纯化后的gE/gI重组蛋白能与PRV标准阳性血清反应(图4),表明纯化后的gE/gI蛋白具有良好的反应原性。图4 gE/gI重组纯化蛋白与PRV标准阳性血清杂交结果

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3063743