鸭源沙门氏菌灭活疫苗及其免疫原性研究

发布时间：2021-03-04 18:26

　　随着大型集约化养殖业的发展,规模化的养禽生产中常伴有沙门氏菌病的发生,被感染的雏禽若不加以治疗,重者死亡,耐过者终身带菌,产出带菌蛋,不仅造成严重的经济损失,对公共卫生的危害也不容忽视。由于耐药性的产生,药物治疗效果差,可供选择药物的空间缩小。有效的疫苗接种对传染病的预防起着举足轻重的作用。目前,我国并没有针对鸭沙门氏菌病的标准疫苗。本研究根据川渝地区鸭源沙门氏菌的血清型分布情况,通过动物攻毒试验进行对比,筛选出一株血清型分布广且毒力最强的菌株作为研究对象。采用传统方法制备蜂胶灭活疫苗,对试验鸭进行免疫接种,从细胞免疫和体液免疫两个方面来检测该疫苗的免疫水平,对免疫效果进行评价,以期为鸭源沙门氏菌病的防控提供参考依据。本文所开展的研究和取得的结果如下：1本试验选取了12株鸭源沙门氏菌,在相同菌液浓度下对试验鸭进行分组攻毒,筛选出死亡率最高、毒力较强的菌株：用30种沙门氏菌诊断血清进行血清型鉴定为鸭源彻斯特沙门氏菌（1,4,[5],12：e,h：e,n,x）,细菌毒力试验测得该菌株的LD50为1×108.47 CFU。将该菌株作为疫苗菌株,研制出三个浓度（108 CFU/ml、109 C... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
符号说明
第一章 文献综述
    1 沙门氏菌概述
        1.1 病原学概况
        1.2 毒力因子的研究
            1.2.1 菌毛
            1.2.2 外膜蛋白
            1.2.3 脂多糖
            1.2.4 荚膜
            1.2.5 肠毒素
            1.2.6 毒力相关基因
    2 沙门氏菌病研究进展
        2.1 流行病学
        2.2 临诊症状及病理变化
        2.3 检测方法
            2.3.1 实验室分离鉴定
            2.3.2 免疫学技术
            2.3.3 分子生物学技术
        2.4 治疗概况
            2.4.1 耐药性研究
            2.4.2 药物防治进展
    3 沙门氏菌疫苗研究进展
        3.1 灭活疫苗
        3.2 弱毒疫苗
        3.3 疫苗载体
    4 选题目的与意义
第二章 鸭源沙门氏菌灭活疫苗的研制
    1 材料
        1.1 供试菌株
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 试验动物
    2 方法
        2.1 疫苗菌株筛选
            2.1.1 动物致病性试验
            2.1.2 目的菌株再分离
        2.2 细菌毒力测定
        2.3 灭活疫苗研制
            2.3.1 疫苗菌液制备
            2.3.2 蜂胶佐剂制备
            2.3.3 疫苗配制
        2.4 疫苗安全性检测
        2.5 动物保护试验
    3 结果
        3.1 疫苗菌株筛选结果
            3.1.1 动物致病性试验结果
            3.1.2 目的菌株再分离结果
        3.2 细菌毒力测定结果
        3.3 灭活疫苗的物理性状
        3.4 安全性试验结果
        3.5 动物保护试验结果
    4 讨论
第三章 鸭源沙门氏菌抗体检测间接ELISA方法的建立
    1 材料
        1.1 主要试剂
        1.2 主要仪器
        1.3 试验动物
    2 方法
        2.1 主要试剂的配制
        2.2 菌体裂解抗原制备
        2.3 阳性和阴性血清的制备
            2.3.1 阳性血清制备
            2.3.2 阴性血清制备
        2.4 间接ELISA操作步骤
        2.5 间接ELISA参数选择
            2.5.1 抗原最适包被浓度和血清最佳稀释度的选择
            2.5.2 酶标羊抗鸭IgG最佳作用浓度选择
        2.6 判断标准的确定
        2.7 特异性试验
            2.7.1 交叉试验
            2.7.2 阻断试验
        2.8 重复性试验
    3 结果
        3.1 抗原蛋白含量的测定
        3.2 抗原和血清最适浓度的确定
        3.3 酶标二抗最适工作浓度
        3.4 阴性临界值确定
        3.5 特异性试验
        3.6 重复性试验
    4 讨论
第四章 鸭源沙门氏菌灭活疫苗的免疫原性研究
    1 材料
        1.1 主要试剂
        1.2 主要仪器
        1.3 试验动物
    2 方法
        2.1 试验鸭分组与免疫程序
        2.2 细胞免疫水平检测
            2.2.1 淋巴细胞增殖能力检测
            2.2.2 外周血清中细胞因子含量检测
            2.2.3 外周血白细胞吞噬活性检测
        2.3 血清抗体水平检测
    3 结果
        3.1 细胞免疫水平检测结果
            3.1.1 淋巴细胞增殖试验结果
            3.1.2 外周血清中IL-4和IFN-γ的含量
            3.1.3 白细胞吞噬活性检测结果
        3.2 血清抗体的消长规律
    4 讨论
        4.1 疫苗免疫对细胞免疫水平的影响
            4.1.1 疫苗免疫对淋巴细胞增殖活性的影响
            4.1.2 疫苗免疫对外周血细胞因子浓度的影响
            4.1.3 疫苗免疫对白细胞吞噬活性的影响
        4.2 疫苗免疫对血清抗体水平的影响
第五章 结论
参考文献
致谢
发表论文情况


【参考文献】：
期刊论文
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[2]浅谈鸡白痢的防治[J]. 刘剑峰.  中国畜牧兽医文摘. 2013(03)
[3]鸡白痢的诊断及防治[J]. 蔡志远.  中国畜牧兽医文摘. 2013(02)
[4]市售鲜鸡蛋中沙门氏菌的分离鉴定及毒力岛基因检测[J]. 王晶钰,董睿,王利勤,芮弦,陈婷,李成山,张三东,张彦明,郭抗抗.  食品科学. 2012(16)
[5]鸭源沙门氏菌的分离鉴定及耐药性检测[J]. 刘加圣,龚建森.  中国家禽. 2012(10)
[6]食品动物源沙门氏菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测与分析[J]. 林居纯,覃春红,赖婧,舒刚,吴聪明.  畜牧兽医学报. 2012(05)
[7]crp缺失对猪霍乱沙门氏菌强弱毒株毒力的影响[J]. 徐引弟,梁跃,王治方,朱文豪,郭成留.  河南农业科学. 2012(04)
[8]屠宰猪肠道沙门氏菌的分离鉴定、耐药性分析及致病性试验[J]. 黄福标,卢冰霞,刘磊,郭旋,张民秀,兰家暖,廖承球,赵彩群,黄伟坚.  中国畜牧兽医. 2012(01)
[9]仔猪副伤寒活疫苗生产工艺的改进[J]. 郑铁鑫,张继东,柴华,于洪涛,王昊,卢爱国,张金辉.  养殖技术顾问. 2011(08)
[10]肉鸭感染沙门氏菌的诊断与治疗[J]. 胡永玉,卢一丰.  畜牧兽医科技信息. 2011(03)

硕士论文
[1]四川、重庆地区鸭源沙门氏菌分离鉴定及耐药性研究[D]. 程平.四川农业大学 2013
[2]减毒鸡伤寒沙门氏菌△asd缺失株的构建及其携带外源基因的表达[D]. 陈晓娟.扬州大学 2009
[3]间接ELISA检测鸭疫里默氏杆菌抗体方法的建立及应用[D]. 方钦.西南大学 2007



本文编号：3063684