藏猪源益生芽孢杆菌的分离鉴定及候选益生菌株的筛选

发布时间：2017-04-14 17:20

  本文关键词：藏猪源益生芽孢杆菌的分离鉴定及候选益生菌株的筛选，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：抗生素可降低动物患病机率,提高动物生长性能,提高养殖业的经济效益,但随着抗生素的过量使用,出现如病原菌耐药、畜产品抗生素残留等问题。微生态制剂中的益生菌可以在胃肠道调节动物体微生态平衡,实现预防疾病、提高动物生产性能,因此使用微生态制剂替代抗生素已成为一种趋势,而其中的芽孢杆菌制剂因其具有较高的抗逆性而应用得较为广泛。藏猪是中国特有的国宝级高原放牧型食草猪种,其适应力极强,能够在青藏高原低氧、严寒的恶劣环境中依靠草等粗纤维作为营养物进行生长繁殖,且极少患病,藏猪资源开发具有可观的前景。本试验以西藏林芝地区健康藏猪粪便为试验材料,从中分离有益生潜力的芽孢杆菌,首先将健康藏猪粪便滤液于90℃水浴处理10分钟杀死样品中的非芽孢杆菌,再进行拮抗试验筛选能抑制常见病原菌的芽孢杆菌,综合形态学、生理生化特征及16S rDNA序列分析对筛选菌株进行鉴定,通过菌株耐受性试验、产水解酶试验、抗生素敏感试验等对菌株生物学特性进行研究,选出最佳菌株,最后对最佳菌株在小鼠和饲料应用方面进行了初步探索。具体结果如下:1、从4份健康藏猪粪便样品中分离到56株芽孢杆菌,通过拮抗试验从中筛选到3株对常见病原菌(沙门氏菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌)具有一定抑制作用的芽孢杆菌,然后通过生理生化试验和16S rDNA鉴定分析,确定菌株SWUN-TP13和SWUN-TP22为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、菌株SWUN-TP23为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。2、对筛选到的枯草芽孢杆菌SWUN-TP13、SWUN-TP22和解淀粉芽孢杆菌SWUN-TP23的生物学特性进行研究,发现解淀粉芽孢杆菌SWUN-TP23具有良好的潜在益生能力,其在不利环境中具有较强的稳定性,可代谢产生纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶,菌体对大多数含常用兽用抗生素敏感。3、通过对解淀粉芽孢杆菌SWUN-TP23在小鼠和饲料应用方面的初步研究,发现该菌株能在一定程度上提高小鼠生长性能和免疫力,且对黄曲霉毒素B1(AFB1)具有一定的降解作用。
【关键词】：藏猪 芽孢杆菌 益生菌 分离 鉴定 解淀粉芽孢杆菌
【学位授予单位】：西南民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.6
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 第一章 绪论11-20
• 1 抗生素在畜牧业生产中使用现状及存在问题11-12
• 1.1 饲用抗生素的使用现状11-12
• 1.2 过量使用抗生素存在的问题12
• 2 替代抗生素添加的物质种类12-14
• 2.1 微生态制剂13
• 2.2 饲用酶制剂13
• 2.3 抗菌肽制剂13
• 2.4 天然中草药制剂13-14
• 3 微生态制剂研究现状14-16
• 3.1 微生态制剂概述14
• 3.2 微生态制剂益生机理14-15
• 3.3 影响微生态制剂益生因素15-16
• 4 益生芽孢杆菌研究进展16-17
• 4.1 芽孢杆菌概述16
• 4.2 益生芽孢杆菌应用现状16-17
• 5 解淀粉芽孢杆菌研究进展17-18
• 5.1 解淀粉芽孢杆菌概况17
• 5.2 解淀粉芽孢杆菌研究现状17-18
• 6 本研究背景及目的意义18-20
• 第二章 藏猪源益生芽孢杆菌的分离和鉴定20-32
• 1 试验材料20-22
• 1.1 样品来源20
• 1.2 试验菌株20
• 1.3 主要试剂及配制20-21
• 1.4 培养基21
• 1.5 主要仪器21-22
• 2 试验方法22-26
• 2.1 芽孢杆菌的分离及纯化22-23
• 2.2 抑菌菌株的筛选23
• 2.3 筛选菌株生理生化试验23-24
• 2.4 菌株分子生物学鉴定24-26
• 3 结果与分析26-30
• 3.1 芽孢杆菌的分离及筛选26
• 3.2 生理生化特性26-27
• 3.3 16S rDNA分子生物学鉴定分析27-30
• 4 讨论30
• 5 小结30-32
• 第三章 候选益生菌株生物学特性研究32-42
• 1 试验材料32-34
• 1.1 试验菌种32
• 1.2 主要试剂及配制32-33
• 1.3 培养基33
• 1.4 主要仪器33-34
• 2 试验方法34-35
• 2.1 耐人工胃液试验34
• 2.2 耐人工肠液试验34
• 2.3 耐胆盐试验34
• 2.4 水解酶试验34-35
• 2.5 药敏试验35
• 2.6 耐高温试验35
• 3 结果与分析35-40
• 3.1 枯草芽孢杆菌SWUN-TP13在人工胃液环境中具有较强的抗逆性35-36
• 3.2 解淀粉芽孢杆菌SWUN-TP23在人工肠液环境中具有较强的抗逆性36-37
• 3.3 枯草芽孢杆菌SWUN-TP13和解淀粉芽孢杆菌SWUN-TP23在胆盐环境中抗逆性相当37
• 3.4 解淀粉芽孢杆菌SWUN-TP23可产生纤维素酶、蛋白酶和淀粉酶37-38
• 3.5 各菌株对大多数兽用抗生素敏感38-39
• 3.6 解淀粉芽孢杆菌SWUN-TP23在热环境中稳定性较好39-40
• 4 讨论40-41
• 5 小结41-42
• 第四章 菌株SWUN-TP23对小鼠影响及黄曲霉毒素降解研究42-51
• 1 试验材料42-44
• 1.1 试验菌种42
• 1.2 主要试剂及配制42-43
• 1.3 培养基及饲料43
• 1.4 主要仪器43-44
• 1.5 试验动物44
• 2 试验方法44-46
• 2.1 小鼠体重影响试验44
• 2.2 小鼠内脏影响试验44-45
• 2.3 对黄曲霉毒素B1（AFB1）降解试验45-46
• 3 结果与分析46-49
• 3.1 解淀粉芽孢杆菌SWUN-TP23可促进小鼠生长和刺激免疫器官发育46-47
• 3.2 解淀粉芽孢杆菌SWUN-TP23对小鼠内脏器官无损害47-48
• 3.3 解淀粉芽孢杆菌SWUN-TP23具有降解黄曲霉毒素B1的能力48-49
• 4 讨论49-50
• 5 小结50-51
• 第五章 结论与展望51-52
• 1 结论51
• 2 展望51-52
• 参考文献52-57
• 致谢57-58

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