H9N2亚型禽流感病毒HA和NP蛋白单克隆抗体的制备及在抗原变异分析中的初步应用
发布时间：2021-03-06 18:35
H9N2亚型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）自首次分离至今,已在全世界各地造成了广泛的传播。在国内,H9N2亚型AIV呈地方性流行且传播范围广,不但给养殖业造成巨大的经济损失,也给公共卫生安全造成潜在的威胁。在免疫压力和抗原漂移作用下,AIV容易发生抗原变异,最终导致免疫失败。因此研发针对H9N2亚型AIV较为理想的单抗对H9亚型AIV监测和诊断有重要的意义。1.H9N2亚型禽流感病毒HA和NP基因的克隆及表达选取 H9N2 AIV 流行株 A/Chicken/Taixing/10/2010（简称 rTX）和疫苗株A/Chicken/Shanghai/F/98（简称F98）作为研究对象,通过PCR分别扩增其HA基因和NP基因,将其克隆到真核表达载体PCAGGS上,成功构建出重组质粒PCAGGS-rTX-HA、PCAGGS-F98-HA 和 PCAGGS-rTX-NP。然后将其转染入 293T 细胞,通过间接免疫荧光试验（Indirect immunofluorescence assay,IFA）和蛋白印迹试验（Western blot,WB）检测确定HA...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１流感病毒粒子的形态结构（引自张剑２０１６）??Ｆｉｇ?１?．Ｐａｒｔｉｃｌｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｉｎｆｌｕｅｎｚａ?ｖｉｒｕｓ??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]2017—2018年华东地区H9亚型禽流感病毒分离毒株的抗原差异分析[J]. 申松玮,王泽源,范威峰,祝常椿,陆游,石宝兰,刘雷,沈海峰,焦库华,秦涛,陈素娟,彭大新,刘秀梵. 畜牧兽医学报. 2019(06)
[2]禽流感病毒NP蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 肖倩,姚露,毕振威,雷静,颜焰,闫丽萍. 畜牧与兽医. 2018(12)
[3]DNA免疫技术在单克隆抗体开发中的研究进展[J]. 叶尔那扎尔·努尔吐热,邱丽芬,张富春,张茂祥. 生物技术通报. 2019(02)
[4]H6N6亚型禽流感病毒N6基因的原核表达与多克隆抗体制备[J]. 万润,华敏,龙立书,贺欣薇,罗引幸,周碧君,王开功,程振涛,文明. 中国畜牧兽医. 2018(11)
[5]2016—2017年华东地区活禽市场7株H9N2禽流感病毒遗传进化分析[J]. 蒋大秀,马静,王晓泉,胡顺林,刘晓文,刘秀梵. 畜牧兽医学报. 2018(08)
[6]H9N2亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及生物学特性分析[J]. 李佳昕,孙文强,袁水庆,王晓泉,刘晓文,刘秀梵. 中国家禽. 2017(21)
[7]华东地区H9N2亚型禽流感病毒HA基因的遗传演化分析[J]. 黄欣梅,李银,刘宇卓,赵冬敏,杨婧,韩凯凯. 江苏农业学报. 2015(02)
[8]禽流感诊断检测方法综述[J]. 王涌. 山东畜牧兽医. 2014(05)
[9]真核表达载体pcDNA3.1（+）-MyoD-HA-His的构建及功能检测[J]. 杜朝,玉蕾叶,孙国杰,王英泽. 河北科技大学学报. 2014(02)
[10]DNA疫苗的研究进展[J]. 杨海,王芳宇. 中国畜牧兽医. 2013(01)
博士论文
[1]H7N9亚型禽流感病毒检测方法的建立及标记疫苗的研制[D]. 孙志豪.扬州大学 2018
[2]H9N2亚型流感病毒HA基因变异分析及对鸡免疫机能的影响[D]. 冯强.山东农业大学 2010
[3]禽流感病毒M2重组多肽疫苗和DNA疫苗及其粘膜免疫研究[D]. 张国广.厦门大学 2007
[4]中国大陆H9N2亚型禽流感病毒遗传演化关系的研究[D]. 李曦.中国农业科学院 2002
硕士论文
[1]2017-2018中国H5亚型禽流感病毒的生物学特性研究[D]. 韩舒雨.中国农业科学院 2019
[2]H9N2亚型禽流感病毒抗原变异的研究[D]. 屈孟锦.中国农业科学院 2019
[3]抗H7亚型流感病毒单克隆抗体的制备与应用[D]. 陈玲玲.南昌大学 2019
[4]2016-2018年华东地区H9N2亚型禽流感病毒分子流行病学及致病性研究[D]. 蒋大秀.扬州大学 2019
[5]基于NP单克隆抗体的检测禽流感病毒ELISA方法的建立[D]. 刘敏.扬州大学 2018
[6]2014～2016年华东地区H9N2亚型禽流感病毒遗传进化分析及气溶胶传播特性研究[D]. 孙文琪.扬州大学 2017
[7]抗H9N2亚型禽流感病毒X-19流行株单克隆抗体的制备及鉴定[D]. 张剑.河南农业大学 2016
[8]2013-2015年华东地区H9N2禽流感病毒的流行病学调查及单克隆抗体的研制[D]. 鞠勇.扬州大学 2016
[9]H9N2亚型禽流感病毒抗原变异株单抗的制备及其在抗原变异机制研究中的应用[D]. 顾家英.扬州大学 2016
[10]鸡传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立[D]. 张林.扬州大学 2016
本文编号：3067598
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１流感病毒粒子的形态结构（引自张剑２０１６）??Ｆｉｇ?１?．Ｐａｒｔｉｃｌｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｉｎｆｌｕｅｎｚａ?ｖｉｒｕｓ??
?第一章Ｈ９Ｎ２亚型禽流感病毒ＨＡ和ＮＰ基因克隆及表达???以毒株ｒＴＸ和Ｆ９８的ｃＤＮＡ为模版，用对应的引物进行ＰＣＲ扩増，ＰＣＲ产物经１?％??琼脂糖凝胶电泳分析，电泳结果如图１－１和图１－２所示，扩增出大约１７００?ｂｐ左右的??ＨＡ片段和１５００?ｂｐ左右ＮＰ片段，结果与预期相符。??Ｍ?１?２??２０００ｂｐ?—??ｉ?ＯＯＯｂｐ?——??图１－１?ＨＡ片段的ＰＣＲ扩增图??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?１：?ｒＴＸ?毒株的?ＨＡ?片段；２：?Ｆ９８?毒株的?ＨＡ?片段；??Ｆｉｇ．?１－１?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＨＡ?ｇｅｎｅｓ??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ｒＴＸ－ＨＡ；?２：?Ｆ９８－ＨＡ；??ｌＯＯＯｂｐ－丨?＇￣１４９７ｂｐ??图１－２?ＮＰ片段的ＰＣＲ扩增图??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?ｈ?ｒＴＸ?毒株的?ＮＰ?片段；??Ｆｉｇ．?１－２?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＮＰ?ｇｅｎｅ??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ｒＴＸ－ＮＰ；??３．１．２酶切鉴定??将ＨＡ基因和ＮＰ基因真核重组质粒的酶切产物用１?％琼脂糖凝胶电泳进行鉴定，??结果显示：ＰＣＡＧＧＳ－ｒＴＸ－ＨＡ和ＰＣＡＧＧＳ－Ｆ９８－ＨＡ重组质粒酶切图中出现两条大小分??别为１７００?ｂｐ左右和４７００?ｂｐ左右的条带（图１－３）：?ＰＣＡＧＧＳ－ｒＴＸ－ＮＰ重组质粒酶切图??中出现两条大小分别为１５００?ｂｐ左右和４７００?ｂｐ左右的条带（图１－４），所得结果与预期??一致。比对测序验证结果得出插入的目的基因序列也和原始序列
?第一章Ｈ９Ｎ２亚型禽流感病毒ＨＡ和ＮＰ基因克隆及表达???以毒株ｒＴＸ和Ｆ９８的ｃＤＮＡ为模版，用对应的引物进行ＰＣＲ扩増，ＰＣＲ产物经１?％??琼脂糖凝胶电泳分析，电泳结果如图１－１和图１－２所示，扩增出大约１７００?ｂｐ左右的??ＨＡ片段和１５００?ｂｐ左右ＮＰ片段，结果与预期相符。??Ｍ?１?２??２０００ｂｐ?—??ｉ?ＯＯＯｂｐ?——??图１－１?ＨＡ片段的ＰＣＲ扩增图??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?１：?ｒＴＸ?毒株的?ＨＡ?片段；２：?Ｆ９８?毒株的?ＨＡ?片段；??Ｆｉｇ．?１－１?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＨＡ?ｇｅｎｅｓ??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ｒＴＸ－ＨＡ；?２：?Ｆ９８－ＨＡ；??ｌＯＯＯｂｐ－丨?＇￣１４９７ｂｐ??图１－２?ＮＰ片段的ＰＣＲ扩增图??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?ｈ?ｒＴＸ?毒株的?ＮＰ?片段；??Ｆｉｇ．?１－２?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＮＰ?ｇｅｎｅ??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ｒＴＸ－ＮＰ；??３．１．２酶切鉴定??将ＨＡ基因和ＮＰ基因真核重组质粒的酶切产物用１?％琼脂糖凝胶电泳进行鉴定，??结果显示：ＰＣＡＧＧＳ－ｒＴＸ－ＨＡ和ＰＣＡＧＧＳ－Ｆ９８－ＨＡ重组质粒酶切图中出现两条大小分??别为１７００?ｂｐ左右和４７００?ｂｐ左右的条带（图１－３）：?ＰＣＡＧＧＳ－ｒＴＸ－ＮＰ重组质粒酶切图??中出现两条大小分别为１５００?ｂｐ左右和４７００?ｂｐ左右的条带（图１－４），所得结果与预期??一致。比对测序验证结果得出插入的目的基因序列也和原始序列
【参考文献】：
期刊论文
[1]2017—2018年华东地区H9亚型禽流感病毒分离毒株的抗原差异分析[J]. 申松玮,王泽源,范威峰,祝常椿,陆游,石宝兰,刘雷,沈海峰,焦库华,秦涛,陈素娟,彭大新,刘秀梵. 畜牧兽医学报. 2019(06)
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[5]2016—2017年华东地区活禽市场7株H9N2禽流感病毒遗传进化分析[J]. 蒋大秀,马静,王晓泉,胡顺林,刘晓文,刘秀梵. 畜牧兽医学报. 2018(08)
[6]H9N2亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及生物学特性分析[J]. 李佳昕,孙文强,袁水庆,王晓泉,刘晓文,刘秀梵. 中国家禽. 2017(21)
[7]华东地区H9N2亚型禽流感病毒HA基因的遗传演化分析[J]. 黄欣梅,李银,刘宇卓,赵冬敏,杨婧,韩凯凯. 江苏农业学报. 2015(02)
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[9]真核表达载体pcDNA3.1（+）-MyoD-HA-His的构建及功能检测[J]. 杜朝,玉蕾叶,孙国杰,王英泽. 河北科技大学学报. 2014(02)
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[1]H7N9亚型禽流感病毒检测方法的建立及标记疫苗的研制[D]. 孙志豪.扬州大学 2018
[2]H9N2亚型流感病毒HA基因变异分析及对鸡免疫机能的影响[D]. 冯强.山东农业大学 2010
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硕士论文
[1]2017-2018中国H5亚型禽流感病毒的生物学特性研究[D]. 韩舒雨.中国农业科学院 2019
[2]H9N2亚型禽流感病毒抗原变异的研究[D]. 屈孟锦.中国农业科学院 2019
[3]抗H7亚型流感病毒单克隆抗体的制备与应用[D]. 陈玲玲.南昌大学 2019
[4]2016-2018年华东地区H9N2亚型禽流感病毒分子流行病学及致病性研究[D]. 蒋大秀.扬州大学 2019
[5]基于NP单克隆抗体的检测禽流感病毒ELISA方法的建立[D]. 刘敏.扬州大学 2018
[6]2014～2016年华东地区H9N2亚型禽流感病毒遗传进化分析及气溶胶传播特性研究[D]. 孙文琪.扬州大学 2017
[7]抗H9N2亚型禽流感病毒X-19流行株单克隆抗体的制备及鉴定[D]. 张剑.河南农业大学 2016
[8]2013-2015年华东地区H9N2禽流感病毒的流行病学调查及单克隆抗体的研制[D]. 鞠勇.扬州大学 2016
[9]H9N2亚型禽流感病毒抗原变异株单抗的制备及其在抗原变异机制研究中的应用[D]. 顾家英.扬州大学 2016
[10]鸡传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立[D]. 张林.扬州大学 2016
本文编号：3067598
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