猪精子尾部发生相关基因的研究
发布时间：2021-03-08 16:07
精子尾部是由位于曲精细管上皮的精原干细胞经历有丝分裂、减数分裂后,在精子变态过程中形成。尾部是精子的代谢与运动器官,与精子的活动能力有密切关系,而精子的活动能力是完成受精的重要前提条件。当精子的活力低下、尾部畸形或行动方向不规则都可能导致不育。研究精子尾部形成的分子机理对于探寻精子形成及精子结构异常造成的精液品质不良的成因具有重要意义。目前的研究还无法还原精子尾部的体外生成过程。本研究选择在精子尾部起重要作用的基因Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr,通过克隆获得完整CDS序列,对其序列特征、时空表达规律、表达产物的亚细胞定位进行分析研究,并探索基因的过表达对体外培养精原干细胞分化的影响,从而为深入研究精子尾部发生的分子机理及调控机制奠定基础。全文结果如下：一、采用RT-PCR和RACE的方法克隆了猪Odf2、Odf3、Tektin4基因及Cabyr基因的3种剪接体cDNA序列；对所获序列利用软件分析编码氨基酸的结构、同源性比较及分子进化树的构建。结果表明Odf2基因cDNA长3300bp,编码蛋白长度为810个氨基酸,有连续的Coiled coil结构；Odf3基因cDNA...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：114 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩写
文献综述
1 精子发生的过程及参与精子发生的基因
1.1 精子的结构
1.2 精子发生的过程
1.3 参与精子发生的基因
2 参与精子尾部发生的相关基因研究进展
2.1 精子尾部的发生过程
2.2 精子尾部主要结构单元的功能及相关基因
2.3 精子尾部结构异常造成不育
3 精原干细胞培养和体内外诱导分化的研究进展
3.1 精原干细胞的来源
3.2 精原干细胞体外的长期培养
3.3 精原干细胞维持和分化的分子调控机制
3.4 精原干细胞的移植
3.5 精原干细胞的体外诱导分化
4 本研究的目的与意义
参考文献
第一章 Odf2、Odf3、Tektin4及Cabyr基因的克隆
摘要
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 主要试剂
1.3 睾丸组织RNA提取与cDNA的合成
1.4 Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因cDNA序列的克隆
1.5 RACE
1.6 序列的生物信息学分析
2 结果与分析
2.1 猪Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因的克隆
2.2 猪Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr序列及编码蛋白的结构分析
2.3 猪Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr同源性比较和系统发育树分析
2.3.1 同源性分析
2.3.2 序列的多重比较
2.3.3 进化树构建
3 讨论
4 结论
第二章 Odf2、Odf3、Tektin4及Cabyr基因的时空表达规律
摘要
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 主要试剂
1.3 梅山猪组织RNA提取与cDNA合成
1.4 Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因组织表达特异性检测
1.5 Odf2,Odf3,Tektin4及Cabyr基因定量表达分析
1.6 睾丸石蜡切片的制作
1.7 附睾尾精子数测定
1.8 数据分析与统计
2 结果与分析
2.1 梅山猪Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因的组织表达特征
2.2 Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因在不同日龄段睾丸的表达规律
2.3 睾丸组织结构
2.4 梅山公猪附睾尾精子数测定
3 讨论
3.1 Odf2,Odf3,Tektin4Cabyr基因组织表达特异性
3.2 不同日龄梅山猪睾丸基因的表达与精子的发生
4 结论
第三章 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因的亚细胞定位
摘要
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 主要试剂
1.3 重组表达载体的构建及鉴定
1.4 融合表达载体转染NIH-3T3细胞
1.5 融合表达载体转染后目的基因mRNA的RT-PCR检测
1.6 多克隆抗体的制备与检测
2 结果与分析
2.1 重组表达载体的鉴定
2.2 重组质粒转染NIH-3T3细胞
2.3 RT-PCR检测融合蛋白在细胞中的表达
2.4 pcDNA3.1重组载体质粒鉴定
2.5 间接免疫荧光检测抗体的效价及亚细胞定位
3 讨论
4 结论
第四章 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr在精子中的表达
摘要
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 主要试剂
1.3 精子RNA的提取与反转录
1.4 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因在精子RNA中的检测
1.5 间接免疫荧光检测蛋白在成熟精子中的定位
2 结果与分析
2.1 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因在精子RNA的表达
2.2 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr在精子中的定位
3 讨论
4 结论
第五章 猪精原干细胞体外培养与鉴定
摘要
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 主要试剂
1.3 猪精原干细胞的分离培养与纯化
1.4 精原干细胞的鉴定
2 结果与分析
2.1 猪精原干细胞的形态和AKP染色
2.2 标记基因的检测
3 讨论
4 结论
第六章 利用猪和小鼠的SSCs验证Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因的功能
摘要
1 材料与方法
1.1 主要试剂
1.2 实验设计
1.3 半定量PCR检测猪精原干细胞体外分化的影响
1.4 荧光定量PCR检测小鼠精原干细胞系体外分化的影响
2 结果与分析
2.1 转染重组质粒后的精原干细胞
2.2 转染重组质粒后Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因mRNA水平的鉴定
2.3 过表达目的基因对于猪精原干细胞体外分化的影响
2.4 不同浓度的RA对于小鼠精原干细胞分化的影响
2.5 RA诱导后过表达目的基因对于精原干细胞系体外分化的影响
3 讨论
3.1 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr过表达对于猪精原干细胞体外分化的影响
3.2 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr过表达对于小鼠精原干细胞系体外分化的影响
4 结论
参考文献
主要结论与意义
特色与创新点
不足及下一步工作建议
附图
致谢
攻读学位期间发表学术论文目录
本文编号：3071305
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：114 页
【学位级别】：博士
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文献综述
1 精子发生的过程及参与精子发生的基因
1.1 精子的结构
1.2 精子发生的过程
1.3 参与精子发生的基因
2 参与精子尾部发生的相关基因研究进展
2.1 精子尾部的发生过程
2.2 精子尾部主要结构单元的功能及相关基因
2.3 精子尾部结构异常造成不育
3 精原干细胞培养和体内外诱导分化的研究进展
3.1 精原干细胞的来源
3.2 精原干细胞体外的长期培养
3.3 精原干细胞维持和分化的分子调控机制
3.4 精原干细胞的移植
3.5 精原干细胞的体外诱导分化
4 本研究的目的与意义
参考文献
第一章 Odf2、Odf3、Tektin4及Cabyr基因的克隆
摘要
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 主要试剂
1.3 睾丸组织RNA提取与cDNA的合成
1.4 Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因cDNA序列的克隆
1.5 RACE
1.6 序列的生物信息学分析
2 结果与分析
2.1 猪Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因的克隆
2.2 猪Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr序列及编码蛋白的结构分析
2.3 猪Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr同源性比较和系统发育树分析
2.3.1 同源性分析
2.3.2 序列的多重比较
2.3.3 进化树构建
3 讨论
4 结论
第二章 Odf2、Odf3、Tektin4及Cabyr基因的时空表达规律
摘要
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 主要试剂
1.3 梅山猪组织RNA提取与cDNA合成
1.4 Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因组织表达特异性检测
1.5 Odf2,Odf3,Tektin4及Cabyr基因定量表达分析
1.6 睾丸石蜡切片的制作
1.7 附睾尾精子数测定
1.8 数据分析与统计
2 结果与分析
2.1 梅山猪Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因的组织表达特征
2.2 Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因在不同日龄段睾丸的表达规律
2.3 睾丸组织结构
2.4 梅山公猪附睾尾精子数测定
3 讨论
3.1 Odf2,Odf3,Tektin4Cabyr基因组织表达特异性
3.2 不同日龄梅山猪睾丸基因的表达与精子的发生
4 结论
第三章 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因的亚细胞定位
摘要
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 主要试剂
1.3 重组表达载体的构建及鉴定
1.4 融合表达载体转染NIH-3T3细胞
1.5 融合表达载体转染后目的基因mRNA的RT-PCR检测
1.6 多克隆抗体的制备与检测
2 结果与分析
2.1 重组表达载体的鉴定
2.2 重组质粒转染NIH-3T3细胞
2.3 RT-PCR检测融合蛋白在细胞中的表达
2.4 pcDNA3.1重组载体质粒鉴定
2.5 间接免疫荧光检测抗体的效价及亚细胞定位
3 讨论
4 结论
第四章 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr在精子中的表达
摘要
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 主要试剂
1.3 精子RNA的提取与反转录
1.4 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因在精子RNA中的检测
1.5 间接免疫荧光检测蛋白在成熟精子中的定位
2 结果与分析
2.1 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因在精子RNA的表达
2.2 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr在精子中的定位
3 讨论
4 结论
第五章 猪精原干细胞体外培养与鉴定
摘要
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 主要试剂
1.3 猪精原干细胞的分离培养与纯化
1.4 精原干细胞的鉴定
2 结果与分析
2.1 猪精原干细胞的形态和AKP染色
2.2 标记基因的检测
3 讨论
4 结论
第六章 利用猪和小鼠的SSCs验证Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因的功能
摘要
1 材料与方法
1.1 主要试剂
1.2 实验设计
1.3 半定量PCR检测猪精原干细胞体外分化的影响
1.4 荧光定量PCR检测小鼠精原干细胞系体外分化的影响
2 结果与分析
2.1 转染重组质粒后的精原干细胞
2.2 转染重组质粒后Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因mRNA水平的鉴定
2.3 过表达目的基因对于猪精原干细胞体外分化的影响
2.4 不同浓度的RA对于小鼠精原干细胞分化的影响
2.5 RA诱导后过表达目的基因对于精原干细胞系体外分化的影响
3 讨论
3.1 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr过表达对于猪精原干细胞体外分化的影响
3.2 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr过表达对于小鼠精原干细胞系体外分化的影响
4 结论
参考文献
主要结论与意义
特色与创新点
不足及下一步工作建议
附图
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本文编号：3071305
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