羊源性D型产气荚膜梭菌的分离及PCR鉴定

发布时间：2021-03-10 00:39

　　对青海省互助县送检的2份病死羊组织,经细菌学厌氧分离培养,参考已发表的产气荚膜梭菌16S rRNA基因和毒素基因（α、β、ε、ι）合成引物,采用PCR和多重PCR扩增目的基因条带,并对分离株细菌的16S rRNA基因序列进行了同源性及系统发育分析。结果显示:从其中1份病死羊组织中分离获得1株β溶血型革兰阳性杆菌,经PCR和多重PCR扩增可得16S rRNA基因和α、ε毒素基因的目的条带;分离株细菌的16S rRNA基因序列与GenBank上已登录（登录号:NR113204.1、NR121697.2）的产气荚膜梭菌的相应序列具有高度同源性（≥99.0%）,同KU714939.1的遗传关系最为亲密,因此经分子生物学方法鉴定分离株细菌为D型产气荚膜梭菌。 

【文章来源】：中国兽医杂志. 2020,56(03)北大核心

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【部分图文】：

图3 分离株细菌牛乳“爆裂发酵”现象

分离株细菌和参考菌株D型产气荚膜梭菌、E型产气荚膜梭菌经α、β、ε、ι毒素基因多重PCR扩增,分离株细菌扩增可得α毒素基因(900 bp)和ε毒素基因(396 bp)的目的基因条带,扩增结果如图4所示。2.4 16S rRNA基因PCR扩增和同源性及系统发育分析

分离株细菌经产气荚膜梭菌16S rRNA基因PCR扩增,可得481 bp的目的基因条带,扩增结果如图5所示。对分离菌株细菌16S rRNA基因进行测序,测序结果显示:分离株细菌的16S rRNA基因序列在线Blast分析显示,其16S rRNA基因序列与GenBank上已登录的(登录号:NR113204.1、NR121697.2)产气荚膜梭菌相应序列具有高度同源性(≥99.0%)。根据16S rRNA基因序列与上述同源性较高的D型产气荚膜梭菌GenBank (登录号:NR113204.1、NR121697.2)的相应序列和相关D型产气荚膜梭菌(登录号:LC386311.1、KU714939.1,来源见表2)建立系统进化树,如图6所示,分离株细菌与参考菌株分属2个大的分支,其中分离株与其同源性较高的NR113204.1、NR121697.2处于一个小的分支,且分离株细菌同伊朗疫苗毒株(KU714939.1)的遗传关系较为亲密。表2 4株D型产气荚膜梭菌参考菌株的名称及来源Table 2 The name and source of a reference strain of Clostridium perfringens GenBank登录号GenBank accession number 菌株Bacterial strain 地区 Location 来源Source NR113204.1 Clostridium perfringens strain JCM 1290 日本 Japan 微生物采集中心Microbial collection center NR121697.2 Clostridium perfringens strain ATCC 13124 美国 America 人 Human being LC386311.1 Clostridium perfringens D strain Tokyo_Cp_TypeD 日本 Japan 山羊 Goat KU714939.1 Clostridium perfringens D strain CN409 伊朗 Iran 疫苗毒株 Vaccine strains


本文编号：3073749