干扰UCH-L3对牛骨骼肌卫星细胞增殖与分化的影响

发布时间：2021-03-10 01:54

　　实验旨在探究泛素蛋白酶体中羧基末端水解酶L3（UCH-L3）对牛骨骼肌卫星细胞增殖和分化的影响。使用已经建立的牛骨骼肌卫星细胞体外成肌分化模型,体外模仿骨骼肌的发育过程,设计并合成UCH-L3的si-RNA,转染牛骨骼肌卫星细胞,筛选出有显著干扰效果的si-RNA。用EdU染色检测干扰UCH-L3对细胞增殖的影响。用免疫荧光的方法检测干扰UCH-L3表达后对肌管形成的影响,并采用Western blot技术检测分化后分化标志基因MyHC表达水平的变化,综合分析干扰UCH-L3对牛肌卫星细胞成肌分化的影响。结果表明:干扰UCH-L3后肌卫星细胞EdU染色阳性率与对照组无明显差异;干扰UCH-L3后分化形成肌管的数量少于对照组,肌管融合指数显著低于对照组,分化标志因子MyHC的蛋白水平显著低于对照组。本研究结果表明,干扰UCH-L3的表达能够抑制牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化过程。 

【文章来源】：中国畜牧杂志. 2020,56(11)北大核心

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【部分图文】：

牛骨骼肌卫星细胞转染Si-UCH-L3后q RT-PCR检测UCH-L3 RNA表达水平

用si-UCH-L3-3转染牛骨骼肌卫星细胞，进一步利用Western blot技术检测si-UCH-L3-3干扰效果。如图3所示，相比较si-NC组，实验组的UCH-L3在蛋白水平也显著降低，说明si-UCH-L3-3可用于进行下一步实验。图2 牛骨骼肌卫星细胞转染Si-UCH-L3后q RT-PCR检测UCH-L3 RNA表达水平

牛骨骼肌卫星细胞转染干扰后UCH-L3表达的Western blot检测


本文编号：3073851