北京市牛病毒性腹泻的流行病学调查、持续性感染牛IFN-α/β反应及连翘酯苷A免疫调节作用的研究
发布时间：2021-03-10 04:14
牛病毒性腹泻（Bovine viral diarrhea, BVD）是由牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus, BVDV）引起的给奶牛业造成严重损失的传染性疾病。本研究的目的是确定北京地区牛场牛病毒性腹泻的流行病学特点及筛查持续性感染牛。2010-2013年间,本研究调查了北京郊区的25个牛场,采集和检测样品4,327份（4,320份血清样品和7份组织样品）,应用间接ELISA方法对随机选取的1,000份样本进行了抗体检测,应用抗原捕获ELISA和RT-PCR方法对全部样本的病毒抗原进行了检测,结果检测出18份抗原阳性样品,其中12份样本确定来自于持续性感染牛。随机选取的1,000份血清样本抗体检测结果表明有934份呈现阳性。应用细胞培养法对18份阳性样本进行病毒分离,细胞培养结果显示所有毒株的生物型都为非致细胞病变型（noncytopathic, NCP）型,随后本研究对病毒的5’端非编码区（untranslated region, UTR）和Npro进行了PCR扩增和克隆测序,参考国内外报道毒株,依据5’-UTR构建了系统进化树,结果显示18株病...
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１?ＢＶＤＶ在电镜下的形态??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｔｈｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｇｒａｐｈ?ｏｆ?ＢＶＤＶ?（Ａｎｎｅ?Ｗｅｇｅｈ?ｅｔ?ａｌ．，２０１１）??
２．４．３分离株序列测定??对实验室分离的１８株ＢＶＤＶ进斤了?２３个基因片段（１８株病毒的５＇－ＵＴＲ与５株病毒的??ＮＰ？）的测序，对每份样品经ＲＮＡ提取、ＲＴ－ＰＣＲ后部分电泳结果见图２－１与２－２。最后将测序??结果上传到ＧｅｎＢａｎｋ数据库，相应的登录号为１８株病毒５’－ＵＴ民：ＫＦ９２５５０３－?ＫＦ９２５５２０，５株??病毒?ＮＰｒｏ：?ＫＦＷ５５２Ｉ－ＫＦ９２５５２５。??２．４．４系统进化树分析??为研究ＢＶＤＶ在北京地区牛群中基因遗传进化规律，我们Ｌ：＞１?ＮＣＢ１?Ｇｅｎｂａｎｋ数据库中巧株??ＢＶＤＶ－１型和２型病毒的５’－ＵＴＲ基因片段序列和２２株的ＮＰ？基因片段序列为参考，这些参考??病毒株分离自多个国家，包爸了?ｌａ到Ｉｑ基因型。结果显示我们的分离毒株分别为：Ｉｍ?（６株）、??ｌａ?（５株）、Ｉｄ?（３株）、Ｉｑ?（３株）、化（Ｉ株）。我们的ＢＶＤＶ分离株基因系统进化树分析??结果见图２－４。５’－ＵＴＲ进化树与ＮＰｍ进化树中毒株ＢＪ１２０１被归为不同的亚型，其中在５’－ＵＴ艮??进化树中为Ｉｄ亚型，而在ＮＰｍ进化树中为Ｉｍ亚型。??２２??
化於２?（Ａ），化化３脚，７ＸＲ－４（Ｃ），化Ｗ－７?（巧，７１Ｒ－Ｓ〇Ｅ），胤７－＂巧及Ｍ化１５脚在健康牛及ＰＩ牛外周血单个核??细胞中的ｍＲＮＡ表达???３－１?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅ泌ｉｏｎ?ｏｆ?ｍＲＮＡ?化ｒ?ｇｅｎｅｓ?ｅｎｃｏｄｉｎｇ?（Ａ）?７１护２，（巧?１１肛３，（Ｃ）化Ｒ－４，?（Ｄ）化化７，（巧?７ＸＫ－Ｓ，（巧???ａｎｄ?（Ｇ）?Ｍ１４５?ｉｎ?阳ＭＣｓ?ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ｈｅａｌｔｈｙ?ｃａｔｔｌｅ?ａｎｄ?ＰＩ?ｃａｔｔｌｅ?ｗａｓ?地ａｌｙｚｅｄ?ｂｙ?ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ．??Ｄａｔａ?ａｒｅ?ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?化化ｅ?ｍｅａｎ?±?化ｒ?ｅａｃｈ?ｓａｍｐｌｅ?（ｎ?＝?６）．?＊，?Ｐ?＜?０．０５；?＊＊，?Ｐ?＜?０．０１?；＊＊＊，?Ｐ?＜?０．００１．??ＩＲＦ－３与ＩＲＦ－７表达量变化??痘病毒感染过程中，ＩＲＦ－３和ＩＲＦ－７是调节Ｉ型干扰素表达的主要转录因子。其中ＩＲＦ－３??节ＩＦＮ－Ｐ，而ＩＲＦ－７主要调节ＩＦＮ－ａ的表达，当然ＩＲＦ－３和ＩＲＦ－７也能形成异二聚体共同??ＦＮ－ｏ／ｐ的表达。本研巧中我们应用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测了牛ＰＢＭＣｓ中ＩＲＦ－３和ＩＲＦ－７的表达??结果显示来自于ＰＩ牛的巧ＭＣｓ中ＩＲＦ－３?（Ｐ?＝?０．００３）和ＩＲＦ－７?（户＝０．０３２）都出现了显??低。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]山羊源牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定[J]. 毛立,李文良,严少华,赵永前,张则斌,钟声,郭俊尧,江杰元. 中国兽医科学. 2013(07)
[2]北京地区奶牛场牛传染性鼻气管炎、牛病毒性腹泻病风险评估及流行情况分析[J]. 李栋梁,赵景义,沈俊乐,史苍桀,曹杰. 中国奶牛. 2013(11)
[3]牛病毒性腹泻病毒双单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用[J]. 杨俊兴,曹琛福,曾少灵,卢体康,孙洁,张彩虹,唐金明,陶虹,吕建强,花群义. 动物医学进展. 2013(05)
[4]牛病毒性腹泻病毒JN株的分离鉴定及E2基因的序列分析[J]. 汤中和. 中国畜牧兽医. 2013(05)
[5]太原地区奶牛病毒性腹泻流行病学调查[J]. 张改文,李赟,郝卫芳,史新涛. 中国奶牛. 2013(07)
[6]内蒙古牛病毒性腹泻病毒血清学调查[J]. 童钦,吕晓妍,王炜,项键. 中国农学通报. 2013(05)
[7]河南牛病毒性腹泻-黏膜病流行病学调查[J]. 菅复春,王建领,王炜,刘海花,付彤,邓立新,郝丽影,寇亚楠,张龙现,宁长申. 中国兽医杂志. 2012(05)
[8]北京地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻病血清学调查[J]. 张俊杰,凌宗帅,黄凯,齐长明,马翀,刘英霞,曹杰. 中国奶牛. 2010(10)
[9]连翘酯苷对IFN-α和Mx1表达的影响[J]. 马元元,张中文,李华伟,孙健华,许承扬,吴国娟. 中国农业科学. 2010(15)
[10]牛病毒性腹泻病毒石河子株的分离与基因型鉴定[J]. 任艳,陈创夫,乔军,杨霞,张辉,王鹏雁,盛金良,倪伟. 中国兽医学报. 2010(04)
硕士论文
[1]牛病毒性腹泻病毒JZ05-1株基因分型、全基因序列测定及分析[D]. 李庆超.中国农业科学院 2010
[2]同时检测和区分猪瘟野毒株和兔化弱毒疫苗株及牛病毒性腹泻病毒1型的三重荧光定量RT-PCR方法的建立[D]. 张兴娟.扬州大学 2010
本文编号：3074034
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１?ＢＶＤＶ在电镜下的形态??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｔｈｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｇｒａｐｈ?ｏｆ?ＢＶＤＶ?（Ａｎｎｅ?Ｗｅｇｅｈ?ｅｔ?ａｌ．，２０１１）??
２．４．３分离株序列测定??对实验室分离的１８株ＢＶＤＶ进斤了?２３个基因片段（１８株病毒的５＇－ＵＴＲ与５株病毒的??ＮＰ？）的测序，对每份样品经ＲＮＡ提取、ＲＴ－ＰＣＲ后部分电泳结果见图２－１与２－２。最后将测序??结果上传到ＧｅｎＢａｎｋ数据库，相应的登录号为１８株病毒５’－ＵＴ民：ＫＦ９２５５０３－?ＫＦ９２５５２０，５株??病毒?ＮＰｒｏ：?ＫＦＷ５５２Ｉ－ＫＦ９２５５２５。??２．４．４系统进化树分析??为研究ＢＶＤＶ在北京地区牛群中基因遗传进化规律，我们Ｌ：＞１?ＮＣＢ１?Ｇｅｎｂａｎｋ数据库中巧株??ＢＶＤＶ－１型和２型病毒的５’－ＵＴＲ基因片段序列和２２株的ＮＰ？基因片段序列为参考，这些参考??病毒株分离自多个国家，包爸了?ｌａ到Ｉｑ基因型。结果显示我们的分离毒株分别为：Ｉｍ?（６株）、??ｌａ?（５株）、Ｉｄ?（３株）、Ｉｑ?（３株）、化（Ｉ株）。我们的ＢＶＤＶ分离株基因系统进化树分析??结果见图２－４。５’－ＵＴＲ进化树与ＮＰｍ进化树中毒株ＢＪ１２０１被归为不同的亚型，其中在５’－ＵＴ艮??进化树中为Ｉｄ亚型，而在ＮＰｍ进化树中为Ｉｍ亚型。??２２??
化於２?（Ａ），化化３脚，７ＸＲ－４（Ｃ），化Ｗ－７?（巧，７１Ｒ－Ｓ〇Ｅ），胤７－＂巧及Ｍ化１５脚在健康牛及ＰＩ牛外周血单个核??细胞中的ｍＲＮＡ表达???３－１?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅ泌ｉｏｎ?ｏｆ?ｍＲＮＡ?化ｒ?ｇｅｎｅｓ?ｅｎｃｏｄｉｎｇ?（Ａ）?７１护２，（巧?１１肛３，（Ｃ）化Ｒ－４，?（Ｄ）化化７，（巧?７ＸＫ－Ｓ，（巧???ａｎｄ?（Ｇ）?Ｍ１４５?ｉｎ?阳ＭＣｓ?ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ｈｅａｌｔｈｙ?ｃａｔｔｌｅ?ａｎｄ?ＰＩ?ｃａｔｔｌｅ?ｗａｓ?地ａｌｙｚｅｄ?ｂｙ?ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ．??Ｄａｔａ?ａｒｅ?ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?化化ｅ?ｍｅａｎ?±?化ｒ?ｅａｃｈ?ｓａｍｐｌｅ?（ｎ?＝?６）．?＊，?Ｐ?＜?０．０５；?＊＊，?Ｐ?＜?０．０１?；＊＊＊，?Ｐ?＜?０．００１．??ＩＲＦ－３与ＩＲＦ－７表达量变化??痘病毒感染过程中，ＩＲＦ－３和ＩＲＦ－７是调节Ｉ型干扰素表达的主要转录因子。其中ＩＲＦ－３??节ＩＦＮ－Ｐ，而ＩＲＦ－７主要调节ＩＦＮ－ａ的表达，当然ＩＲＦ－３和ＩＲＦ－７也能形成异二聚体共同??ＦＮ－ｏ／ｐ的表达。本研巧中我们应用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测了牛ＰＢＭＣｓ中ＩＲＦ－３和ＩＲＦ－７的表达??结果显示来自于ＰＩ牛的巧ＭＣｓ中ＩＲＦ－３?（Ｐ?＝?０．００３）和ＩＲＦ－７?（户＝０．０３２）都出现了显??低。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]山羊源牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定[J]. 毛立,李文良,严少华,赵永前,张则斌,钟声,郭俊尧,江杰元. 中国兽医科学. 2013(07)
[2]北京地区奶牛场牛传染性鼻气管炎、牛病毒性腹泻病风险评估及流行情况分析[J]. 李栋梁,赵景义,沈俊乐,史苍桀,曹杰. 中国奶牛. 2013(11)
[3]牛病毒性腹泻病毒双单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用[J]. 杨俊兴,曹琛福,曾少灵,卢体康,孙洁,张彩虹,唐金明,陶虹,吕建强,花群义. 动物医学进展. 2013(05)
[4]牛病毒性腹泻病毒JN株的分离鉴定及E2基因的序列分析[J]. 汤中和. 中国畜牧兽医. 2013(05)
[5]太原地区奶牛病毒性腹泻流行病学调查[J]. 张改文,李赟,郝卫芳,史新涛. 中国奶牛. 2013(07)
[6]内蒙古牛病毒性腹泻病毒血清学调查[J]. 童钦,吕晓妍,王炜,项键. 中国农学通报. 2013(05)
[7]河南牛病毒性腹泻-黏膜病流行病学调查[J]. 菅复春,王建领,王炜,刘海花,付彤,邓立新,郝丽影,寇亚楠,张龙现,宁长申. 中国兽医杂志. 2012(05)
[8]北京地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻病血清学调查[J]. 张俊杰,凌宗帅,黄凯,齐长明,马翀,刘英霞,曹杰. 中国奶牛. 2010(10)
[9]连翘酯苷对IFN-α和Mx1表达的影响[J]. 马元元,张中文,李华伟,孙健华,许承扬,吴国娟. 中国农业科学. 2010(15)
[10]牛病毒性腹泻病毒石河子株的分离与基因型鉴定[J]. 任艳,陈创夫,乔军,杨霞,张辉,王鹏雁,盛金良,倪伟. 中国兽医学报. 2010(04)
硕士论文
[1]牛病毒性腹泻病毒JZ05-1株基因分型、全基因序列测定及分析[D]. 李庆超.中国农业科学院 2010
[2]同时检测和区分猪瘟野毒株和兔化弱毒疫苗株及牛病毒性腹泻病毒1型的三重荧光定量RT-PCR方法的建立[D]. 张兴娟.扬州大学 2010
本文编号：3074034
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