猪源性嗜酸乳杆菌的分离驯化及其微胶囊化的研究

发布时间：2021-03-15 08:44

　　嗜酸乳杆菌作为动物肠道中重要的益生菌,具有维护动物肠道健康、缓解不良应激、改善饲养环境、调节机体脂肪代谢和改善畜禽产品品质等功能。乳酸菌微生态制剂作为动物饲料添加剂正逐渐被广大消费者应用。本课题从仔猪粪便中分离获得一株嗜酸乳杆菌。经驯化,提高其对胃肠道的耐受性,并研制出微胶囊制剂,其研究结果如下：（1）利用MRS琼脂平板梯度稀释法自15d龄、未使用过任何抗生素药物的仔猪粪便中筛选得到13株乳酸杆菌疑似菌株,通过生理生化鉴定,初步确定其中9为乳酸杆菌。经碳水化合物发酵试验,推测编号La-5, La-6, La-8和La-9的4株菌为嗜酸乳杆菌。比较4株菌的形态,长势及产酸能力,选定菌株La-5作为本研究的出发菌株。通过对菌株La-5的16 SrDNA同源性分析,结合其生理生化试验结果确定菌株La-5为嗜酸乳杆菌（Lactobaclllus acidophilus）。（2）以嗜酸乳杆菌La-5为出发菌株,采用梯度传代驯化法,对其耐酸、耐胆盐、耐热性能进行驯化,得到一株对低pH、高胆盐、高温具有良好强耐受性的优良菌株La-5c。对菌株La-5c的产酸性能研究表明,经发酵48h后的MRS培养液... 

【文章来源】：江西农业大学江西省

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1 文献综述
        1.1 国内外嗜酸乳杆菌的研究进展
            1.1.1 嗜酸乳杆菌的生物学特性
            1.1.2 嗜酸乳杆菌的益生功能特性
            1.1.3 嗜酸乳杆菌对畜禽养殖的应用效果
            1.1.4 嗜酸乳杆菌的分类及分布
                1.1.4.1 嗜酸乳杆菌的分类
                1.1.4.2 嗜酸乳杆菌的分布
        1.2 抗性突变菌株的选育方法
            1.2.1 自然突变选育
            1.2.2 诱发突变选育
        1.3 微生态制剂的概述
            1.3.1 微生态制剂的概念
            1.3.2 微生态制剂的分类
            1.3.3 动物微生态制剂的作用机制
    2 本课题的研究目的和内容
        2.1 研究目的
        2.2 研究内容
第二章 猪源性嗜酸乳杆菌的分离筛选与鉴定
    1 材料
        1.1 样品来源
        1.2 培养基的成分以及配制方法
        1.3 主要的试剂
        1.4 引物
        1.5 主要仪器
    2 方法
        2.1 样品的采集及前处理
            2.1.1 取样
            2.1.2 样品处理
        2.2 嗜酸乳杆菌的分离纯化
            2.2.1 菌株的初筛
            2.2.2 菌株的复筛
        2.3 嗜酸乳杆菌的鉴定
            2.3.1 细菌的形态特征观察
            2.3.2 生理生化特性的鉴定
                2.3.2.1 乳杆菌属的初步鉴定
                2.3.2.2 碳水化合物发酵产酸鉴定
            2.3.3 16 SrDNA序列分析
    3 结果与分析
        3.1 细菌的形态特征
        3.2 生理生化特性的鉴定
            3.2.1 乳杆菌属初步鉴定
            3.2.2 碳水化合物发酵产酸鉴定
        3.3 菌株La-5的16 SrDNA序列分析
            3.3.1 PCR片段扩增
            3.3.2 序列分析和种系发生关系
    4 小结
第三章 嗜酸乳杆菌La-5优良菌株的选育
    1 材料
        1.1 试验菌株
        1.2 培养基成分以及配制方法
        1.3 主要试剂与药品
        1.4 主要仪器
    2 方法
        2.1 菌株La-5的生长动力学测定
        2.2 菌株La-5耐酸性能的驯化
        2.3 菌株La-5a耐胆盐性能的驯化
        2.4 菌株La-5b耐热性能的驯化
        2.5 菌株La-5c产酸性能的测定
            2.5.1 电位滴定法测总酸
            2.5.2 发酵液总酸计算方法
        2.6 嗜酸乳杆菌活菌数和存活率的计算
            2.6.1 嗜酸乳杆菌活菌数的计算
            2.6.2 嗜酸乳杆菌存活率的计算
    3 结果与分析
        3.1 菌株La-5的生长动力学测定
        3.2 菌株La-5耐酸性能的驯化
        3.3 菌株La-5a耐胆盐能力的驯化
        3.4 菌株La-5b耐热性能的驯化
        3.5 菌株La-5c产酸性能测定
    4 小结
第四章 嗜酸乳杆菌La-5c的小白鼠喂养试验
    1 材料
        1.1 供试菌株及动物
        1.2 培养基成分及配制方法
        1.3 主要试剂与药品
        1.4 主要仪器
    2 方法
        2.1 菌株La-5c菌液制备和试验准备
        2.2 菌株La-5c的安全性试验
        2.3 菌株La-5c的益生效果试验
            2.3.1 菌株La-5c对小白鼠体态特征的作用试验
            2.3.2 菌株La-5c对小白鼠的增重试验
            2.3.3 菌株La-5c对小白鼠免疫器官的影响
    3 结果与分析
        3.1 菌株La-5c的安全性试验
            3.1.1 小白鼠体态特征的变化
            3.1.2 小白鼠肝肾组织形态的变化
            3.1.3 血常规检测
        3.2 菌株La-5c的益生效果试验
            3.2.1 菌株La-5c对小白鼠体态特征的作用试验
            3.2.2 菌株La-5c对小白鼠的增重试验
            3.2.3 菌株La-5c对小白鼠免疫器官的影响
    4 小结
第五章 嗜酸乳杆菌La-5c的微生态制剂壁材的优化
    1 材料
        1.1 供试菌株
        1.2 培养基成分及配制方法
        1.3 主要试剂与药品
        1.4 主要仪器
    2 方法
        2.1 芯材的制备
        2.2 壁材与菌株La-5c的生物相容性测定
            2.2.1 阿拉伯胶与菌株La-5c的生物相容性测定
            2.2.2 海藻糖与菌株La-5c的生物相容性测定
            2.2.3 麦芽糊精与菌株La-5c的生物相容性测定
        2.3 菌株La-5c微胶囊化的单因素试验
            2.3.1 阿拉伯胶浓度对微生态制剂的影响
            2.3.2 海藻糖浓度对微生态制剂的影响
            2.3.3 麦芽糊精浓度对微生态制剂的影响
        2.4 菌株La-5c微胶囊化的正交试验
        2.5 菌株La-5c微生态制剂的技术路线图
        2.6 菌株La-5c微生态制剂的稳定性试验
    3 结果与分析
        3.1 壁材与菌株La-5c的生物相容性测定
            3.1.1 阿拉伯胶与菌株La-5c的生物相容性测定
            3.1.2 海藻糖与菌株La-5c的生物相容性测定
            3.1.3 麦芽糊精与菌株La-5c的生物相容性测定
        3.2 菌株La-5c微胶囊化的单因素试验
            3.2.1 阿拉伯胶浓度对微生态制剂的影响
            3.2.2 海藻糖浓度对微生态制剂的影响
            3.2.3 麦芽糊精浓度对微生态制剂的影响
        3.3 菌株La-5c微胶囊化的正交试验
        3.4 菌株La-5c微生态制剂的稳定性试验
    4 小结
第六章 结论与展望
    1 结论
    2 展望
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]微生物饲料添加剂的主要功能及其研究进展[J]. 徐鹏,董晓芳,佟建明.  动物营养学报. 2012(08)
[2]嗜酸乳杆菌部分生理特性的研究[J]. 王菡,代海兵,连一霏.  牡丹江医学院学报. 2011(06)
[3]基于易错PCR技术的黏质沙雷氏菌脂肪酶基因LipA的定向进化[J]. 陈英,朱绮霞,张搏,陈东,黄日波.  生物技术通报. 2011(04)
[4]微生物饲料添加剂的应用现状与展望[J]. 贾志霞.  畜牧与饲料科学. 2011(02)
[5]乳酸菌添加剂在我国畜牧业中的应用研究[J]. 潘艳,何胜江.  粮食与饲料工业. 2010(09)
[6]化学诱变及其突变体筛选在育种中的应用[J]. 李清国,付晶,钮力亚,于亮,陆莉,张焕英,王奉芝.  河北农业科学. 2010(05)
[7]无活性放线菌野生株抗肿瘤活性突变株的自发突变抗性筛选和化学诱变抗性筛选[J]. 孙玉雯,崔承彬,韩小贤,李长伟,杨明.  军事医学科学院院刊. 2010(01)
[8]化学诱变技术在微生物育种研究中的应用[J]. 程明,崔承彬,李长伟,田从魁,杜智敏.  国际药学研究杂志. 2009(06)
[9]阿魏菇多糖高产菌株筛选的离子束诱变和复合诱变对比研究[J]. 王连峰,陈恒雷,张军,曾宪贤.  辐射研究与辐射工艺学报. 2009(04)
[10]微生态饲料添加剂及其在畜禽生产中的应用研究现状[J]. 王金合.  畜牧与饲料科学. 2009(02)

硕士论文
[1]耐高温乳酸菌的选育及应用研究[D]. 崔国艳.西北大学 2007
[2]益生性微生物饲料添加剂的研究[D]. 尹苗.山东师范大学 2000



本文编号：3083899