H5N6亚型禽流感病毒HA和NA基因核酸标准物质的制备及分析

发布时间：2021-03-19 20:03

　　H5N6亚型禽流感是传播性极强的人畜共患病。为了提高H5N6亚型禽流感病毒（AIV）核酸检测结果的准确性,本研究根据其HA、NA基因的序列分别设计合成特异性引物,利用基因克隆和体外转录技术,分别制备出H5N6亚型AIV检测用HA-cRNA、NA-cRNA核酸标准物质。利用荧光定量PCR检测方法测定均匀性和稳定性,绘制标准扩增曲线和协作标定,计算HA-cRNA、NA-cRNA的含量（拷贝）及不确定度。结果:H5N6亚型AIV核酸标准物质的组间和组内精密度无显著差异（P>0.05）,均匀性好;稳定性检验表明,保存在不同温度时间内的标准物质含量无明显变化;本研究制备的H5N6亚型AIV HA、NA基因核酸标准物质最终定值为（4.13±0.18）×10⁹ 拷贝数/μL和（1.77±0.15）×10¹⁰拷贝数/μL。 

【文章来源】：畜牧与兽医. 2020,52(12)北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

H5N6亚型AIV HA基因、NA基因序列比对结果

用设计好的引物对H5N6亚型流感病毒的HA和NA基因全长片段PCR扩增。1%琼脂糖凝胶电泳结果显示,HA、NA基因片段大小约为1 704 bp、1 413 bp,与预期相符(图2)。2.3 重组质粒PCR鉴定

重组质粒PCR结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]禽流感病毒H5亚型一种新分支（clade2.3.4.4）的流行概况[J]. 胡景凯,金宣讲,李智贤,王潇,戴怡雪,李晓,廖明,贾伟新.  中国兽医科学. 2019(01)
[2]病毒性神经坏死病病毒核酸检测用标准物质的制备[J]. 段燕喻,陈茹,吴晓薇,朱道中,林志雄,田纯见,刘志玲.  中国动物检疫. 2018(02)
[3]4株H5N6亚型禽流感病毒毒株的分离鉴定与致病性研究[J]. 周佩娇,邢利,贾伟新,廖明.  畜牧兽医学报. 2018(01)
[4]HCV核糖核酸国家二级标准物质的研制[J]. 蒋玲丽,王华梁,王雪亮,鲍芸,肖艳群.  临床检验杂志. 2016(01)

硕士论文
[1]H5N6亚型禽流感病毒HA-NA匹配性的初步探索[D]. 曾昭勇.华南农业大学 2016



本文编号：3090147