日本血吸虫Wnt信号通路受配体相互作用
发布时间：2021-03-20 20:26
Wnt信号通路存在于所有真核多细胞生物,是生物体内细胞发育和生长调节的关键途径,具有非常重要的作用,目前,我们已在日本血吸虫体内找到Wnt信号通路的各种成员,已证实的日本血吸虫Wnt信号通路配体有Wnt1、Wnt2、Wnt4、Wnt5、Wnt11,受体有Fz5、Fz7、Fz8、Fz9。Wnt信号通路中的受配体相互作用是此通路的起始,理清日本血吸虫Wnt信号通路的受配体之间相互作用,可推测血吸虫中可能存在的信号通路的激活方式,进一步了解日本血吸虫生长发育过程中的调节机制,丰富日本血吸虫发育生物学的内容。因此本研究在前期工作的基础上将对Wnt信号通路受配体进行真核载体构建,并筛选出最佳蛋白表达效果,为受配体交互研究提供实验基础。利用免疫共沉淀技术从分子水平来筛选和分析日本血吸虫Wnt/Fz交互的特异性。1.日本血吸虫Wnt信号通路受配体真核载体构建采用巢式PCR方法,对日本血吸虫Wnts ORF去除信号肽的部分,以及Fzs的CRD部分进行特异性扩增。其中Fz5构建了含5’UTR和不含5’UTR两种真核载体,以比较表达蛋白的量是否受上游非编码序列的调控。将p3xFLAG-CMV-7.1载体用...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Wnt4、Fzs巢式PCR产物琼脂糖凝胶分析
图2.3 WntK \Vnt2分段PCR产物谅脂糖凝胶分析Figure 2.3 Electrophoresis analysis of Wntl gene and Wnt2 gene amplified by PCR in agorose gel注：M;DNA marker DL 2000： A屮的1为Wml去掉信号肽的ORF片段3’ PCR忙增；B屮的2为Wntl去抑倍号肽的ORF片段5’ PCR扩斯C屮的3为Wnt2去掉信弓-肽的ORF片段3’ PCR扩增；D屮的4为Wnt2去掉信号肽的ORF片段5’ PCR扩增《te:M:DNA marker DL 2000;lane 1 represents amplification for 3'PCR of Wntl ORF fragments were removed signal peptide in picture A;lane
myc标签蛋白（图2.5)，插入ffi基因Fzs CRD序列后的重组质粒转染细胞，目的蛋白也将在胞奖内表达，便于Wnts与Fzs相互作用；真核表达载体PRK5经过改造后，含有myc标签（图2.6)，插入祀基因Fz5的重组质粒转染细胞，目的蛋白将在胞衆进行表达，便于Wnts与Fz5相互作用。而载体上标签的存在，使得目的蛋白的跟踪与检测变得更加简化。本部分实验在载体上选择双酶切位点，同时在扩增的上下游引物上引入相应的酶切位点，采用定向克隆的方式插入目的基因，进行真核载体构建
【参考文献】：
期刊论文
[1]2012年全国血吸虫病疫情通报[J]. 李石柱,郑浩,高婧,张利娟,朱蓉,许静,郭家钢,肖宁,周晓农. 中国血吸虫病防治杂志. 2013(06)
[2]日本血吸虫病候选分子疫苗免疫保护力研究进展[J]. 吴平,汪世平,温志立. 中国病原生物学杂志. 2010(06)
[3]日本血吸虫吡喹酮耐药虫体筛选及其超微结构观察[J]. 杨巧林,蔡茹,李欣,李颖,郭俊杰,刘爱平,张惠琴,夏超明. 中国血吸虫病防治杂志. 2010(03)
[4]Wnt蛋白:从合成到分泌[J]. 庄瑜,刘俊,肖明第. 现代生物医学进展. 2009(14)
[5]发育相关的信号通路与脑肿瘤干细胞[J]. 段晓春,武永康. 国际神经病学神经外科学杂志. 2008(06)
[6]日本血吸虫尾蚴经口腔粘膜感染小鼠的可行性研究[J]. 李伟,申丽洁,杨毅梅. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2004(02)
[7]Wnt信号通路与哺乳动物生殖[J]. 孙晓阳,王雁玲. 生物化学与生物物理进展. 2003(02)
[8]Wnt与其他信号通路在胚胎发育过程中的crosstalk[J]. 白戈,唐珂,景乃禾. 生命的化学. 2002(04)
[9]关于血吸虫病的防治研究 日本血吸虫病化学治疗药物与展望[J]. 王在华. 中国公共卫生. 2000(08)
[10]CMV启动子和RSV LTR启动子表达sIL-6R效率的比较[J]. 于占洋,任蕴芳,沈倍奋. 生物技术通讯. 1999(02)
本文编号：3091620
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Wnt4、Fzs巢式PCR产物琼脂糖凝胶分析
图2.3 WntK \Vnt2分段PCR产物谅脂糖凝胶分析Figure 2.3 Electrophoresis analysis of Wntl gene and Wnt2 gene amplified by PCR in agorose gel注：M;DNA marker DL 2000： A屮的1为Wml去掉信号肽的ORF片段3’ PCR忙增；B屮的2为Wntl去抑倍号肽的ORF片段5’ PCR扩斯C屮的3为Wnt2去掉信弓-肽的ORF片段3’ PCR扩增；D屮的4为Wnt2去掉信号肽的ORF片段5’ PCR扩增《te:M:DNA marker DL 2000;lane 1 represents amplification for 3'PCR of Wntl ORF fragments were removed signal peptide in picture A;lane
myc标签蛋白（图2.5)，插入ffi基因Fzs CRD序列后的重组质粒转染细胞，目的蛋白也将在胞奖内表达，便于Wnts与Fzs相互作用；真核表达载体PRK5经过改造后，含有myc标签（图2.6)，插入祀基因Fz5的重组质粒转染细胞，目的蛋白将在胞衆进行表达，便于Wnts与Fz5相互作用。而载体上标签的存在，使得目的蛋白的跟踪与检测变得更加简化。本部分实验在载体上选择双酶切位点，同时在扩增的上下游引物上引入相应的酶切位点，采用定向克隆的方式插入目的基因，进行真核载体构建
【参考文献】：
期刊论文
[1]2012年全国血吸虫病疫情通报[J]. 李石柱,郑浩,高婧,张利娟,朱蓉,许静,郭家钢,肖宁,周晓农. 中国血吸虫病防治杂志. 2013(06)
[2]日本血吸虫病候选分子疫苗免疫保护力研究进展[J]. 吴平,汪世平,温志立. 中国病原生物学杂志. 2010(06)
[3]日本血吸虫吡喹酮耐药虫体筛选及其超微结构观察[J]. 杨巧林,蔡茹,李欣,李颖,郭俊杰,刘爱平,张惠琴,夏超明. 中国血吸虫病防治杂志. 2010(03)
[4]Wnt蛋白:从合成到分泌[J]. 庄瑜,刘俊,肖明第. 现代生物医学进展. 2009(14)
[5]发育相关的信号通路与脑肿瘤干细胞[J]. 段晓春,武永康. 国际神经病学神经外科学杂志. 2008(06)
[6]日本血吸虫尾蚴经口腔粘膜感染小鼠的可行性研究[J]. 李伟,申丽洁,杨毅梅. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2004(02)
[7]Wnt信号通路与哺乳动物生殖[J]. 孙晓阳,王雁玲. 生物化学与生物物理进展. 2003(02)
[8]Wnt与其他信号通路在胚胎发育过程中的crosstalk[J]. 白戈,唐珂,景乃禾. 生命的化学. 2002(04)
[9]关于血吸虫病的防治研究 日本血吸虫病化学治疗药物与展望[J]. 王在华. 中国公共卫生. 2000(08)
[10]CMV启动子和RSV LTR启动子表达sIL-6R效率的比较[J]. 于占洋,任蕴芳,沈倍奋. 生物技术通讯. 1999(02)
本文编号：3091620
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