用于制备抗菌肽的山羊成纤维细胞系与鸡输卵管上皮细胞系的建立
发布时间：2021-03-20 21:55
抗菌肽因具有广谱杀菌、抗肿瘤、抗病毒和抗原虫等特点而成为新型抗生素类药物的研究热点。为了加快抗菌肽的生产速度,提高抗菌肽的产量,本研究在克隆获得中国林蛙皮肤抗菌肽基因Temporin-1CEa的基础上,构建山羊乳腺特异性表达载体pBC1-neo-Temporin-1CEa,将其线性片段导入山羊成纤维细胞中,通过G418筛选获得转抗菌肽基因的山羊成纤维细胞系；利用克隆获得的鸡输卵管上皮特异表达调控序列50V和Temporin-1CEa基因,构建鸡输卵管特异性表达抗菌肽的双顺反子逆转录病毒载体pMX-GFP-5OV-TemporinlCEa;为了建立鸡输卵管基因表达调控的体外模型,在建立鸡输卵管封闭内部消化法（Obturated Interior Digesting,OID法）的基础上建立了鸡输卵管上皮细胞系；采用脂质体法将pMX-GFP-5OV-Temporinl CEa载体转染至鸡输卵管上皮细胞中,检测其在细胞中的表达情况。本研究的主要结果如下：1.山羊乳腺特异性表达载体的构建根据GenBank中的参照序列克隆Temporin-1CEa基因并将其连入pBC1-neo载体中,PCR鉴定、...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：98 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
抗菌肽诱导杀菌作用模型
2.1.2实验载体pEASY-T3 购于 transgene 公司（图 2-1);pBCl-neo载体由吉林大学农学部畜牧兽医学院动物胚胎工程实验室惠赠（图2-2)。
pEASY-T3 购于 transgene 公司（图 2-1);pBCl-neo载体由吉林大学农学部畜牧兽医学院动物胚胎工程实验室惠赠（图2-2)。V -T3 1 a y图2-1克隆载体pEASY-T3 图2-2真核表达载体pBCl-neoFigiire2-1 The cloning vector of pEASY-T3 Figure2-2 The eukaryoUc expression vector of pBCl neo2.1.3试剂与设备表2-1主要试剂及来源Table 2- ！ Major reagents and sources 试剂 公司 Trizol 丨 nvitrogenDNA 测序 Invitrogen引物合成 丨nvitrogenRNase inhibitor TaKaRaRTase M-MLV TaKaRa-19-
【参考文献】：
期刊论文
[1]人乳铁蛋白cDNA基因乳腺表达载体的构建与鉴定[J]. 孟立,张艳丽,许欣,王子玉,闫益波,庞训胜,钟部帅,黄荣,宋洋,王金玉,王锋. 生物工程学报. 2011(02)
[2]中国林蛙皮肤抗菌肽基因的cDNA克隆及抗菌、抗癌和溶血活性的测定[J]. 虞凤慧,张丽芳,李俊峰,李晓帆,付欣,尚德静. 生物工程学报. 2009(01)
[3]慢病毒载体介导的增强型绿色荧光蛋白转基因小鼠的建立[J]. 刘勤,张晋宇,王露露,刘昌峨,王勇,万瑛. 第三军医大学学报. 2008(10)
[4]鸡卵清蛋白基因第一内含子和3′-调控区对外源基因表达的调控作用[J]. 房浩霞,王安平,高波,孙怀昌. 生物工程学报. 2008(02)
[5]发情期家兔输卵管上皮细胞和基质细胞的分离培养与鉴定[J]. 赵永贞,陈秀荔,张彦明,曹斌云,马云,王利心. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2008(02)
[6]鸡输卵管特异表达载体的优化及体内表达[J]. 高波,孙怀昌,王永娟,房浩霞,宋成义. 生物工程学报. 2008(01)
[7]小鼠肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定[J]. 吴国娟,杨明,王典仁,王彦英,沈红,张中文. 解剖学报. 2007(06)
[8]Transfection and expression of exogenous gene in laying hens oviduct in vitro and in vivo[J]. 高波,孙怀昌,宋成义,王志跃,陈芹,宋红芹. Journal of Zhejiang University Science. 2005(02)
[9]鸡卵清蛋白基因启动子调控GFP基因在鸡原代输卵管上皮细胞和中国仓鼠卵巢细胞的表达[J]. 逄越,李庆伟. 生物工程学报. 2005(01)
[10]生长曲线拟合及细胞群体倍增时间的简化计算[J]. 严泉剑,李六金,张宇梅,杨贵忠,刘海军,郭金龙,王禾,邵国兴. 第四军医大学学报. 2002(10)
博士论文
[1]转基因山羊乳腺上皮细胞系建立与转基因克隆胚发育[D]. 郑月茂.西北农林科技大学 2005
[2]表达人组织激肽释放酶鸡输卵管暂态生物反应器的研究[D]. 高波.扬州大学 2005
硕士论文
[1]转RNA干涉Myostatin基因小鼠成纤维细胞的筛选[D]. 薛超.东北林业大学 2011
[2]不同乳蛋白调控区指导hLF基因在转基因小鼠中表达水平的研究[D]. 缪明星.扬州大学 2009
[3]逆转录病毒为载体制备转基因鸡的初步研究[D]. 张秋婷.东北林业大学 2009
[4]转蜘蛛拖丝蛋白基因四聚体绵羊成纤维细胞株的筛选[D]. 原璐.东北林业大学 2009
本文编号：3091734
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：98 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
抗菌肽诱导杀菌作用模型
2.1.2实验载体pEASY-T3 购于 transgene 公司（图 2-1);pBCl-neo载体由吉林大学农学部畜牧兽医学院动物胚胎工程实验室惠赠（图2-2)。
pEASY-T3 购于 transgene 公司（图 2-1);pBCl-neo载体由吉林大学农学部畜牧兽医学院动物胚胎工程实验室惠赠（图2-2)。V -T3 1 a y图2-1克隆载体pEASY-T3 图2-2真核表达载体pBCl-neoFigiire2-1 The cloning vector of pEASY-T3 Figure2-2 The eukaryoUc expression vector of pBCl neo2.1.3试剂与设备表2-1主要试剂及来源Table 2- ！ Major reagents and sources 试剂 公司 Trizol 丨 nvitrogenDNA 测序 Invitrogen引物合成 丨nvitrogenRNase inhibitor TaKaRaRTase M-MLV TaKaRa-19-
【参考文献】：
期刊论文
[1]人乳铁蛋白cDNA基因乳腺表达载体的构建与鉴定[J]. 孟立,张艳丽,许欣,王子玉,闫益波,庞训胜,钟部帅,黄荣,宋洋,王金玉,王锋. 生物工程学报. 2011(02)
[2]中国林蛙皮肤抗菌肽基因的cDNA克隆及抗菌、抗癌和溶血活性的测定[J]. 虞凤慧,张丽芳,李俊峰,李晓帆,付欣,尚德静. 生物工程学报. 2009(01)
[3]慢病毒载体介导的增强型绿色荧光蛋白转基因小鼠的建立[J]. 刘勤,张晋宇,王露露,刘昌峨,王勇,万瑛. 第三军医大学学报. 2008(10)
[4]鸡卵清蛋白基因第一内含子和3′-调控区对外源基因表达的调控作用[J]. 房浩霞,王安平,高波,孙怀昌. 生物工程学报. 2008(02)
[5]发情期家兔输卵管上皮细胞和基质细胞的分离培养与鉴定[J]. 赵永贞,陈秀荔,张彦明,曹斌云,马云,王利心. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2008(02)
[6]鸡输卵管特异表达载体的优化及体内表达[J]. 高波,孙怀昌,王永娟,房浩霞,宋成义. 生物工程学报. 2008(01)
[7]小鼠肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定[J]. 吴国娟,杨明,王典仁,王彦英,沈红,张中文. 解剖学报. 2007(06)
[8]Transfection and expression of exogenous gene in laying hens oviduct in vitro and in vivo[J]. 高波,孙怀昌,宋成义,王志跃,陈芹,宋红芹. Journal of Zhejiang University Science. 2005(02)
[9]鸡卵清蛋白基因启动子调控GFP基因在鸡原代输卵管上皮细胞和中国仓鼠卵巢细胞的表达[J]. 逄越,李庆伟. 生物工程学报. 2005(01)
[10]生长曲线拟合及细胞群体倍增时间的简化计算[J]. 严泉剑,李六金,张宇梅,杨贵忠,刘海军,郭金龙,王禾,邵国兴. 第四军医大学学报. 2002(10)
博士论文
[1]转基因山羊乳腺上皮细胞系建立与转基因克隆胚发育[D]. 郑月茂.西北农林科技大学 2005
[2]表达人组织激肽释放酶鸡输卵管暂态生物反应器的研究[D]. 高波.扬州大学 2005
硕士论文
[1]转RNA干涉Myostatin基因小鼠成纤维细胞的筛选[D]. 薛超.东北林业大学 2011
[2]不同乳蛋白调控区指导hLF基因在转基因小鼠中表达水平的研究[D]. 缪明星.扬州大学 2009
[3]逆转录病毒为载体制备转基因鸡的初步研究[D]. 张秋婷.东北林业大学 2009
[4]转蜘蛛拖丝蛋白基因四聚体绵羊成纤维细胞株的筛选[D]. 原璐.东北林业大学 2009
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