二氢丹参酮Ⅰ及PA-X单抗对A型流感病毒感染介导的肺损伤的保护作用研究
发布时间：2021-03-21 09:55
A型流感病毒（Influenza A virus,IAV）尤其是强毒力毒株感染机体后,肺组织内的各种细胞释放大量的炎性介质,进而导致巨噬细胞等免疫细胞的炎性浸润,造成炎症性病理损伤,加重病毒感染的严重程度,是流感病毒感染高病死率的重要原因之一。因此,调控机体对流感病毒的过度免疫反应,减轻肺组织的炎性损伤,不失为研制有效的抗流感药物的重要手段。而且,由于IAV的高突变率,导致病毒对现有的多种抗流感病毒西药已经产生耐药性。鉴于此,研制新的广谱抗流感病毒药物或者寻找新的治疗方法,对于流感病毒的防治尤为关键。中药在治疗病毒性疾病等方面已积累了丰富的临床经验。中药可通过多种方式抑制病毒感染,例如抑制病毒复制、减轻由病毒感染介导的炎症反应、增强免疫力等方面。本文旨在筛选和验证能够对流感病毒感染介导的免疫损伤有干预作用的有效中药单体,为抗流感病毒的天然药物的研制奠定基础。方法:（1）通过CCK8法检测中药在MDCK细胞上对PR8感染的保护作用,对现有的60多种中药单体进行了筛选。CCK8实验检测中药对MDCK细胞半数中毒剂量(TD50),建立体外细胞感染模型,通过给予中药治疗后...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
二氢丹参酮I化学结构
第一篇文献综述第三章流感病毒蛋白PA-X研究概况7第三章流感病毒蛋白PA-X研究概况3.1PA-X蛋白研究背景PA-X是A型流感病毒片段3编码的病毒基因产物，被发现是一种宿主的封闭蛋白。该蛋白包含了蛋白PAN-末端191个氨基酸序列与C-末端ORF编码的41或61个氨基酸[82]。X-ORF是基因PA的一个核糖体移位所形成的(如图3.1）[7,82,83]。尽管大多数IAVPA-X基因C-末端具有61个密码子，但仍然存在一些分离株有41个密码子[84]。携带这种截短形式的PA-X（41个密码子X-ORF）,主要由第42个密码子发生的无义突变而产生。这种截短的PA-X蛋白大多数来自2009年大流行的H1N1病毒[83]。图3.1PA-X框架结构Fig.3.1PA-Xframestructure（注：本图片引自参考文献[85]）3.2PA-X蛋白的功能自2012年PA-X蛋白被发现以来，这种小蛋白就已被证实具有多种功能。包括宿主关闭、调节聚合酶活性[84,86]、参与病毒复制[87,88]、病毒诱导的细胞凋亡、PA核定位和毒力[87,89]等。然而，提出的许多功能都特定于菌株、亚型、宿主或细胞系。3.2.1PA-X蛋白的宿主关闭活性IAV感染导致细胞的宿主蛋白合成迅速下降，这个过程称为宿主关闭。在这
第二篇研究内容第一章二氢丹参酮I抗流感病毒研究191.3.2CCK8检测DHTI药物毒性结果将药物按预计的浓度梯度依次分组，加入培养的细胞中处理24h。经检测如图1.1所示，DHTI在浓度为10μM时无细胞毒性。图1.1CCK8检测DHTI对MDCK细胞毒性实验Fig.1.1CytotoxicityofDHTItoMDCKcellsdetectedbyCCK81.3.2DHTI在细胞水平上抗IAV的研究结果1.Westernblot实验结果通过构建IAVH1N1PR8感染细胞模型，2h后加DHTI处理。结果表明，与PR8组，DMSO+PR8组相比，DHTI可抑制流感病毒M和NP蛋白的表达，显著降低了MAPK信号通路中ERK和JNK激酶的磷酸化水平（图1.2）。图1.2DHTI降低IAV对ERK和JNK激酶的磷酸化Fig.1.2DHTIdecreasesphosphorylationofERKandJNKkinasesbyIAV2.荧光定量PCR实验结果实验结果显示：与正常组相比，A549细胞感染H1N1PR8毒株后，经DHT
【参考文献】：
期刊论文
[1]Research progress in human infection with avian influenza H7N9 virus[J]. Jing Tang,Dayan Wang. Science China（Life Sciences）. 2017(12)
[2]金银花注射液抗流感病毒作用的实验研究[J]. 陈丽,顾燕. 现代医药卫生. 2016(02)
[3]流感疫苗研究进展[J]. 窦成利,于凯源,于喜冰. 现代畜牧兽医. 2015(10)
[4]中药抗流感病毒的研究进展[J]. 钟恒斯. 广东职业技术教育与研究. 2014(03)
[5]机体抗流感病毒免疫防御机制研究进展[J]. 张玫. 黑龙江医药. 2010(03)
博士论文
[1]我国鸡群中H7N9亚型禽流感病毒的遗传进化及PA-X蛋白在高、低致病性毒株感染中的作用和机制研究[D]. 刘东.扬州大学 2019
[2]中药中神经氨酸酶抑制剂的筛选及其抗流感病毒实验研究[D]. 田莉.吉林大学 2011
硕士论文
[1]金银花与山银花抗流感病毒功效差异及关键药效组分研究[D]. 张静茹.北京中医药大学 2018
[2]白及菲类化合物抗流感病毒药效及其机理研究[D]. 张兵.浙江中医药大学 2018
[3]二氢丹参酮Ⅰ改善葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎实验研究[D]. 郭艳玲.遵义医学院 2018
[4]黄芪甲苷抗甲型流感病毒作用研究[D]. 周红霞.华南农业大学 2016
本文编号：3092665
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
二氢丹参酮I化学结构
第一篇文献综述第三章流感病毒蛋白PA-X研究概况7第三章流感病毒蛋白PA-X研究概况3.1PA-X蛋白研究背景PA-X是A型流感病毒片段3编码的病毒基因产物，被发现是一种宿主的封闭蛋白。该蛋白包含了蛋白PAN-末端191个氨基酸序列与C-末端ORF编码的41或61个氨基酸[82]。X-ORF是基因PA的一个核糖体移位所形成的(如图3.1）[7,82,83]。尽管大多数IAVPA-X基因C-末端具有61个密码子，但仍然存在一些分离株有41个密码子[84]。携带这种截短形式的PA-X（41个密码子X-ORF）,主要由第42个密码子发生的无义突变而产生。这种截短的PA-X蛋白大多数来自2009年大流行的H1N1病毒[83]。图3.1PA-X框架结构Fig.3.1PA-Xframestructure（注：本图片引自参考文献[85]）3.2PA-X蛋白的功能自2012年PA-X蛋白被发现以来，这种小蛋白就已被证实具有多种功能。包括宿主关闭、调节聚合酶活性[84,86]、参与病毒复制[87,88]、病毒诱导的细胞凋亡、PA核定位和毒力[87,89]等。然而，提出的许多功能都特定于菌株、亚型、宿主或细胞系。3.2.1PA-X蛋白的宿主关闭活性IAV感染导致细胞的宿主蛋白合成迅速下降，这个过程称为宿主关闭。在这
第二篇研究内容第一章二氢丹参酮I抗流感病毒研究191.3.2CCK8检测DHTI药物毒性结果将药物按预计的浓度梯度依次分组，加入培养的细胞中处理24h。经检测如图1.1所示，DHTI在浓度为10μM时无细胞毒性。图1.1CCK8检测DHTI对MDCK细胞毒性实验Fig.1.1CytotoxicityofDHTItoMDCKcellsdetectedbyCCK81.3.2DHTI在细胞水平上抗IAV的研究结果1.Westernblot实验结果通过构建IAVH1N1PR8感染细胞模型，2h后加DHTI处理。结果表明，与PR8组，DMSO+PR8组相比，DHTI可抑制流感病毒M和NP蛋白的表达，显著降低了MAPK信号通路中ERK和JNK激酶的磷酸化水平（图1.2）。图1.2DHTI降低IAV对ERK和JNK激酶的磷酸化Fig.1.2DHTIdecreasesphosphorylationofERKandJNKkinasesbyIAV2.荧光定量PCR实验结果实验结果显示：与正常组相比，A549细胞感染H1N1PR8毒株后，经DHT
【参考文献】：
期刊论文
[1]Research progress in human infection with avian influenza H7N9 virus[J]. Jing Tang,Dayan Wang. Science China（Life Sciences）. 2017(12)
[2]金银花注射液抗流感病毒作用的实验研究[J]. 陈丽,顾燕. 现代医药卫生. 2016(02)
[3]流感疫苗研究进展[J]. 窦成利,于凯源,于喜冰. 现代畜牧兽医. 2015(10)
[4]中药抗流感病毒的研究进展[J]. 钟恒斯. 广东职业技术教育与研究. 2014(03)
[5]机体抗流感病毒免疫防御机制研究进展[J]. 张玫. 黑龙江医药. 2010(03)
博士论文
[1]我国鸡群中H7N9亚型禽流感病毒的遗传进化及PA-X蛋白在高、低致病性毒株感染中的作用和机制研究[D]. 刘东.扬州大学 2019
[2]中药中神经氨酸酶抑制剂的筛选及其抗流感病毒实验研究[D]. 田莉.吉林大学 2011
硕士论文
[1]金银花与山银花抗流感病毒功效差异及关键药效组分研究[D]. 张静茹.北京中医药大学 2018
[2]白及菲类化合物抗流感病毒药效及其机理研究[D]. 张兵.浙江中医药大学 2018
[3]二氢丹参酮Ⅰ改善葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎实验研究[D]. 郭艳玲.遵义医学院 2018
[4]黄芪甲苷抗甲型流感病毒作用研究[D]. 周红霞.华南农业大学 2016
本文编号：3092665
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