H5N1亚型禽流感病毒HA糖基化位点修饰对小鼠树突状细胞天然免疫应答的影响

发布时间：2021-03-21 16:47

　　H5N1亚型高致病性禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）可导致禽类较高的发病率和死亡率,给世界养禽业带来了巨大的经济损失。该病在全球多地呈地方流行性,还可出现感染人的现象,因此给人类生命健康带来巨大的威胁。目前,H5N1亚型AIV的HA蛋白头部糖基化位点变化日益增大,糖基化组合模式日益复杂化,这使H5N1亚型的AIV的流行趋势变得更加多样化,同时也增加了疫苗的防控难度。本实验室前期研究表明,HA蛋白头部158或169位糖基化位点缺失后可使H5N1亚型AIV对哺乳动物的易感性和致病性显著增强。“细胞因子风暴”的爆发是H5N1亚型AIV产生高致病性的主要原因。树突状细胞（DCs）除了作为专职的抗原递呈细胞,近年来该细胞在调控宿主天然免疫应答方面也具有主导作用,在AIV诱导的“细胞因子风暴”中可能发挥重要作用但具体作用机制尚不明确。本研究首先在体外成功诱导培养了小鼠骨髓源DCs,其次评估了 HA蛋白不同糖基化修饰的H5N1亚型AIV（rS-WT、rS△158和rS△169）对DCs天然免疫水平的影响,最后进一步阐明分析糖基化位点的改变对DCs表面C型凝集素受体识别... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１?ＤＣｓ形态学特点??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｔｈｅ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ?ｏｆ?ＤＣｓ??

一，也代表ＤＣｓ发挥抗原递呈功能的重要标志之一。应用ＣＤ８０的流式抗体对培养的ＤＣｓ??进行流式细胞术检测，结果发现，无论是否加ＬＰＳ刺激细胞均能表达ＣＤ８０分子（图１－??３Ａ和Ｂ），加入ＬＰＳ刺激ＤＣｓ２４ｈ后，与未刺激组相比，表面标志ＣＤ８０的表达量显著??增加（图?１－３Ｃ，?；？＜?０．０／）。??以上形态学，纯度和功能的鉴定结果共同表明，诱导培养的ＤＣｓ具有典型的形态学特??征，纯度符合要求，功能完整，ＤＣｓ培养成功可用于后续实验。??

激光共聚焦观察发现，ＣＤｌｌｃ在ＤＣｓ细胞膜上高表达，且培养的细胞具有典型的树突??结构（蓝色箭头所示）。应用ＣＤｌｌｃ的流式抗体对ＤＣｓ进行荧光标记，流式细胞检测发现，??所诱导培养的ＤＣｓ纯度高达９０．９％?（图１－２?Ｂ），上述结果表明，培养的ＤＣｓ纯度符合要??求并具有ＤＣｓ的典型特征。??ａＭＩＭｉ?Ｒ?，００１?二??＿?丨：：ｒ＼??１０°?１０?１０２?１０３?１〇４???＾?ＣＤ１１Ｃ＋??图１－２?ＤＣｓ纯度鉴定结果??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＣＤｌｌｃ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ＤＣｓ??Ａ：激光共聚焦观察ＤＣｓ标志ＣＤｌｌｃ的表迗情况；标尺：２０ｐｍ；?Ｂ：流式细胞术检测ＣＤｌｌｃ的表迗情??况。试验图片来自于三次独立试验之－－。??Ａ?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＣＤｌｌｃ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｎ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ＤＣｓ?ｂｙ?ＣＬＳＭ；?Ｂａｒ＝２０?（ｉｍ．?Ｂ?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＣＤｌｌｃ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ??ｏｎ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ＤＣｓ?ｂｙ?ＦＡＣＳ．?Ｉｍａｇｅｓ?ａｒｅ?ｆｒｏｍ?ｏｎｅ?ｏｆ?３?ｓｅｐａｒａｔｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．??２．３树突状细胞的功能鉴定??ＤＣｓ的表面标志ＣＤ８０为协同共刺激分子，是ＤＣｓ由未成熟转变为成熟的的标志之??一，也代表ＤＣｓ发挥抗原递呈功能的重要标志之一。应用ＣＤ８０的流式抗体对培养的ＤＣｓ??进行流式细胞术检测，结果发现，无论是否加ＬＰＳ刺激细胞均能表达ＣＤ８０分子（图１－??３Ａ和Ｂ）

【参考文献】：
期刊论文
[1]树突状细胞的研究进展[J]. 张融玮,赵振林.  临床医药实践. 2014(10)
[2]树突状细胞的研究进展[J]. 冯钟煦,刘剑勇.  医学综述. 2012(20)
[3]树突状细胞表面标志及功能研究进展[J]. 刘秀红,付萍.  皮肤病与性病. 2009(03)
[4]树突状细胞及其应用研究进展[J]. 王勇.  大理学院学报(自然科学). 2005(03)

博士论文
[1]禽流感灭活病毒诱导鼻腔免疫应答机制的研究[D]. 秦涛.南京农业大学 2015
[2]HA蛋白糖基化修饰对H5N1亚型禽流感病毒复制、致病性和抗原性的影响[D]. 张晓剑.扬州大学 2014



本文编号：3093210