青岛地区禽源E.coli毒力因子和耐药性调查与分析
发布时间：2021-03-21 22:40
禽源大肠杆菌（E.coli）作为条件致病菌不仅直接影响养禽业生产,而且其携带的耐药基因和毒力基因可随着食物链问接对公众健康造成危害。耐药性和毒力的结合可造成该类细菌引发的疾病更加难以预防和治疗。因此,本研究对2010～2012年青岛地区的249株表观健康禽源E.coli的耐药表型、ESBLs表型与基因型、Ⅰ型与Ⅱ整合子和24种毒力基因进行了检测以及系统进化群分析,探讨了耐药、毒力、系统进化群之间的相关性。旨在了解青岛地区禽源E.coli耐药性和毒力基因的流行分布情况以及两者之间的相互关系,为生产上有效控制此类高毒高耐菌株的流行和传播提供依据。本研究采用PCR法进行了E.coli菌株毒力因子调查与系统进化群分析。结果显示：11种毒力因子的24种毒力基因均有检出,毒力因子在青岛地区健康家禽E.coli中广泛分布和流行,且呈组合形式存在并协同发挥致病作用,携带基因组合fimH+iucD+iutA+iroN+iss+vat+colBM+traT的菌株致病力最强；健康家禽中高致病群D群和B2群E.coli菌株的检出率高于其他国家；E.coli菌株毒力基因的种类和数量、系统进化群与其致病能力的强弱...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：110 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 大肠杆菌对畜牧业生产和公共卫生健康的影响
1.2 禽源大肠埃希菌毒力基因的研究进展
1.2.1 毒力因子的主要种类
1.2.2 毒力因子的毒力特性
1.2.3 毒力因子的分子流行病学
1.3 超广谱B-内酰胺酶的研究进展
1.3.1 ESBLs的定义和来源
1.3.2 ESBLs的分类
1.3.3 ESBLS的流行病学调查
1.4 整合子的研究进展
1.4.1 整合子的结构
1.4.2 整合子的分类
1.4.3 耐药基因盒
1.4.4 整合子-基因盒系统的流行病学
1.5 选题的目的和意义
1.6 本试验的创新点
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 试验菌株
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要仪器与设备
2.1.4 试验动物
2.2 方法
2.2.1 细菌基因组模板的制备
2.2.2 毒力因子的检测
2.2.3 系统进化群分析
2.2.4 动物致病性试验
2.2.5 最小抑菌浓度测定
2.2.6 超广谱β内酰胺酶的表型检测
2.2.7 质粒模板的提取
2.2.8 超广谱β-内酰胺酶基因型和基因亚型的检测
2.2.9 Ⅰ型和Ⅱ型整合子的检测
2.2.10 序列测定
2.2.11 统计分析
3 结果与分析
3.1 毒力因子的检测结果
3.1.1 24种毒力基因的检测结果
3.1.2 毒力基因组合分析
3.2 系统进化群分析结果
3.2.1 系统进化群分群结果
3.2.2 不同系统进化群的毒力基因携带情况
3.3 动物致病性试验结果
3.3.1 试验组
3.3.2 对照组
3.3.3 系统进化群菌株致病结果
3.4 系统进化群与毒力基因的相关性分析
3.5 禽源大肠杆菌耐药测定结果
3.6 超广谱B-内酰胺酶的表型检测结果
3.7 产ESBLS和非产ESBLS菌株的耐药情况比较
3.7.1 耐药率比较
3.7.2 多重耐药比较
3.8 超广谱B-内酰胺酶基因型的检测结果
3.8.1 四种常见基因型的检测结果
3.8.2 基因亚型的检测
3.8.3 ESBLs基因型和基因亚型的组合形式分析
3.9 Ⅰ型和Ⅱ型整合子的检测结果
3.9.1 Ⅰ型和Ⅱ型整合酶的检测结果
3.9.2 Ⅰ型和Ⅱ型整合子基因盒的检测结果
3.9.3 Ⅰ型整合子的酶切反应结果
3.9.4 整合子基因盒的测序结果
3.10 各类整合子及其携带耐药基因盒的流行情况
3.11 耐药表型与毒力之间的相关性
3.11.1 耐药表型与毒力基因的相关性
3.11.2 耐药表型与系统进化群的相关性
3.11.3 多重耐药与毒力的相关性
3.11.4 多重耐药与系统进化群的相关性
3.12 超广谱β-内酰胺酶与毒力的相关性
3.12.1 ESBLs表型与毒力基因的相关性
3.12.2 ESBLs表型与系统进化群的相关性
3.12.3 ESBLs基因亚型与系统进化群的相关性
3.13 整合子与毒力之间的相关性
3.13.1 整合子与毒力基因的相关性
3.13.2 整合子-基因盒与系统进化群的相关性
4 讨论
4.1 24种毒力基因流行分布情况
4.2 系统进化群分析
4.3 毒力基因、系统进化群与致病性的关系
4.4 禽源大肠杆菌耐药性的流行情况
4.5 超广谱B-内酰胺酶表型流行情况
4.6 超广谱B-内酰胺酶基因型的流行分布
4.7 超广谱B-内酰胺酶基因亚型的流行分布
4.7.1 TEM基因亚型
4.7.2 OXA基因亚型
4.7.3 CTX-M基因亚型
4.7.4 关于CTX-M-1组和CTX-M-9组组合的讨论
4.8 Ⅰ型整合子流行分布及与耐药性的关系
4.9 Ⅱ型整合子流行分布及与耐药性的关系
4.10 耐药表型与毒力基因的相关性
4.11 耐药表型与系统进化群的相关性
4.12 超广谱B-内酰胺酶与毒力基因的相关性
4.13 ESBLS基因型与系统进化群的相关性
4.14 整合子-基因盒与系统进化群、毒力基因的相关性
5 结论
致谢
参考文献
英文缩写词表
攻读硕士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]西藏地区藏鸡大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶检测及药物敏感性分析[J]. 刘保光,世洪勋,格桑顿旦,彭措曲珍,尼夏罗布,顿珠. 家畜生态学报. 2013(03)
[2]鸡、猪大肠杆菌ESBLs基因型检测及耐药性分析[J]. 曲志娜,张颖,李玉清,李梁梁,王娟,黄秀梅,刘焕奇. 中国农学通报. 2013(08)
[3]禽致病性大肠杆菌研究进展[J]. 马兴树,范翠蝶,夏玉龙. 中国畜牧兽医. 2013(02)
[4]动物源大肠杆菌整合子携带氨基糖苷类耐药基因盒的研究[J]. 林居纯,曹三杰,张辉建,钟青卿,魏峰,文心田. 中国兽医学报. 2011(11)
[5]鸡源大肠杆菌ESBLs基因型检测及其耐药性分析[J]. 薛原,陈建飞,张秀英,华育平,赵树臣. 中国兽医杂志. 2011(04)
[6]猪源大肠杆菌耐药性与Ⅰ型整合子关系研究[J]. 曲志娜,李伟臣,王娟,赵思俊,黄秀梅,郑增忍. 中国动物检疫. 2010(12)
[7]K-B纸片扩散法药敏试验[J]. 谭瑶,赵清,舒为群,陈浩. 检验医学与临床. 2010(20)
[8]鸡大肠杆菌TEM和CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因分型研究[J]. 苑丽,刘建华,胡功政,潘玉善,莫娟,魏永俊,裴亚玲. 中国农业科学. 2010(20)
[9]禽源大肠杆菌多重耐药性与Ⅰ类整合子的关系[J]. 范建华,卜仕金,徐步,刘学贤,赵宝华,王晓泉. 江苏农业科学. 2010(05)
[10]大肠埃希菌毒力因子ColBM质粒和转录反终止子研究进展[J]. 夏梦芸,汤文,岳华. 动物医学进展. 2010(05)
博士论文
[1]禽大肠杆菌病的诊断及大肠杆菌的耐药机制研究[D]. Muhammad Yaqoob.南京农业大学 2011
[2]鸡源分离菌超广谱β-内酰胺酶基因分型和整合子分子特征[D]. 苑丽.河南农业大学 2010
[3]禽病原性大肠杆菌与尿道致病性大肠杆菌毒力基因相关性与体内外表达差异及其ftsk突变株的研究[D]. 赵李祥.扬州大学 2008
[4]产超广谱β-内酰胺酶革兰阴性菌分子耐药机制研究[D]. 倪朝辉.吉林大学 2007
[5]2004-2006年长春市医院内细菌耐药监测及产超广谱β内酰氨酶基因型特征的研究[D]. 黄晶.吉林大学 2007
[6]禽病原性大肠杆菌的生物学特性及其可能毒力相关基因的鉴定[D]. 陈祥.扬州大学 2006
[7]禽致病性大肠杆菌耐药基因和毒力因子的分子流行病学及HPI Irp1细胞表位作用的研究[D]. 金文杰.扬州大学 2006
硕士论文
[1]鸡源致病性大肠埃希菌耐药基因及毒力基因检测研究[D]. 王利勤.西北农林科技大学 2012
[2]畜禽肠道大肠杆菌耐药性及整合子—基因盒检测[D]. 张辉建.四川农业大学 2011
[3]鸡源禽致病性大肠杆菌分离鉴定及其毒力相关基因分布特征分析[D]. 苏志新.南京农业大学 2011
[4]1800株G-杆菌插入序列共同区和整合子的耐药机制研究[D]. 王凤平.南方医科大学 2010
[5]鸡源大肠杆菌ESBLs基因型检测[D]. 裴亚玲.河南农业大学 2009
[6]禽致病性大肠杆菌流行病学调查及三株大肠杆菌对磷霉素耐药机制的初探[D]. 郑志明.扬州大学 2007
[7]健康人肠道大肠埃希菌耐药性与Ⅰ类整合子关系的研究[D]. 方梅.四川大学 2006
本文编号：3093641
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：110 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 大肠杆菌对畜牧业生产和公共卫生健康的影响
1.2 禽源大肠埃希菌毒力基因的研究进展
1.2.1 毒力因子的主要种类
1.2.2 毒力因子的毒力特性
1.2.3 毒力因子的分子流行病学
1.3 超广谱B-内酰胺酶的研究进展
1.3.1 ESBLs的定义和来源
1.3.2 ESBLs的分类
1.3.3 ESBLS的流行病学调查
1.4 整合子的研究进展
1.4.1 整合子的结构
1.4.2 整合子的分类
1.4.3 耐药基因盒
1.4.4 整合子-基因盒系统的流行病学
1.5 选题的目的和意义
1.6 本试验的创新点
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 试验菌株
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要仪器与设备
2.1.4 试验动物
2.2 方法
2.2.1 细菌基因组模板的制备
2.2.2 毒力因子的检测
2.2.3 系统进化群分析
2.2.4 动物致病性试验
2.2.5 最小抑菌浓度测定
2.2.6 超广谱β内酰胺酶的表型检测
2.2.7 质粒模板的提取
2.2.8 超广谱β-内酰胺酶基因型和基因亚型的检测
2.2.9 Ⅰ型和Ⅱ型整合子的检测
2.2.10 序列测定
2.2.11 统计分析
3 结果与分析
3.1 毒力因子的检测结果
3.1.1 24种毒力基因的检测结果
3.1.2 毒力基因组合分析
3.2 系统进化群分析结果
3.2.1 系统进化群分群结果
3.2.2 不同系统进化群的毒力基因携带情况
3.3 动物致病性试验结果
3.3.1 试验组
3.3.2 对照组
3.3.3 系统进化群菌株致病结果
3.4 系统进化群与毒力基因的相关性分析
3.5 禽源大肠杆菌耐药测定结果
3.6 超广谱B-内酰胺酶的表型检测结果
3.7 产ESBLS和非产ESBLS菌株的耐药情况比较
3.7.1 耐药率比较
3.7.2 多重耐药比较
3.8 超广谱B-内酰胺酶基因型的检测结果
3.8.1 四种常见基因型的检测结果
3.8.2 基因亚型的检测
3.8.3 ESBLs基因型和基因亚型的组合形式分析
3.9 Ⅰ型和Ⅱ型整合子的检测结果
3.9.1 Ⅰ型和Ⅱ型整合酶的检测结果
3.9.2 Ⅰ型和Ⅱ型整合子基因盒的检测结果
3.9.3 Ⅰ型整合子的酶切反应结果
3.9.4 整合子基因盒的测序结果
3.10 各类整合子及其携带耐药基因盒的流行情况
3.11 耐药表型与毒力之间的相关性
3.11.1 耐药表型与毒力基因的相关性
3.11.2 耐药表型与系统进化群的相关性
3.11.3 多重耐药与毒力的相关性
3.11.4 多重耐药与系统进化群的相关性
3.12 超广谱β-内酰胺酶与毒力的相关性
3.12.1 ESBLs表型与毒力基因的相关性
3.12.2 ESBLs表型与系统进化群的相关性
3.12.3 ESBLs基因亚型与系统进化群的相关性
3.13 整合子与毒力之间的相关性
3.13.1 整合子与毒力基因的相关性
3.13.2 整合子-基因盒与系统进化群的相关性
4 讨论
4.1 24种毒力基因流行分布情况
4.2 系统进化群分析
4.3 毒力基因、系统进化群与致病性的关系
4.4 禽源大肠杆菌耐药性的流行情况
4.5 超广谱B-内酰胺酶表型流行情况
4.6 超广谱B-内酰胺酶基因型的流行分布
4.7 超广谱B-内酰胺酶基因亚型的流行分布
4.7.1 TEM基因亚型
4.7.2 OXA基因亚型
4.7.3 CTX-M基因亚型
4.7.4 关于CTX-M-1组和CTX-M-9组组合的讨论
4.8 Ⅰ型整合子流行分布及与耐药性的关系
4.9 Ⅱ型整合子流行分布及与耐药性的关系
4.10 耐药表型与毒力基因的相关性
4.11 耐药表型与系统进化群的相关性
4.12 超广谱B-内酰胺酶与毒力基因的相关性
4.13 ESBLS基因型与系统进化群的相关性
4.14 整合子-基因盒与系统进化群、毒力基因的相关性
5 结论
致谢
参考文献
英文缩写词表
攻读硕士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]西藏地区藏鸡大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶检测及药物敏感性分析[J]. 刘保光,世洪勋,格桑顿旦,彭措曲珍,尼夏罗布,顿珠. 家畜生态学报. 2013(03)
[2]鸡、猪大肠杆菌ESBLs基因型检测及耐药性分析[J]. 曲志娜,张颖,李玉清,李梁梁,王娟,黄秀梅,刘焕奇. 中国农学通报. 2013(08)
[3]禽致病性大肠杆菌研究进展[J]. 马兴树,范翠蝶,夏玉龙. 中国畜牧兽医. 2013(02)
[4]动物源大肠杆菌整合子携带氨基糖苷类耐药基因盒的研究[J]. 林居纯,曹三杰,张辉建,钟青卿,魏峰,文心田. 中国兽医学报. 2011(11)
[5]鸡源大肠杆菌ESBLs基因型检测及其耐药性分析[J]. 薛原,陈建飞,张秀英,华育平,赵树臣. 中国兽医杂志. 2011(04)
[6]猪源大肠杆菌耐药性与Ⅰ型整合子关系研究[J]. 曲志娜,李伟臣,王娟,赵思俊,黄秀梅,郑增忍. 中国动物检疫. 2010(12)
[7]K-B纸片扩散法药敏试验[J]. 谭瑶,赵清,舒为群,陈浩. 检验医学与临床. 2010(20)
[8]鸡大肠杆菌TEM和CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因分型研究[J]. 苑丽,刘建华,胡功政,潘玉善,莫娟,魏永俊,裴亚玲. 中国农业科学. 2010(20)
[9]禽源大肠杆菌多重耐药性与Ⅰ类整合子的关系[J]. 范建华,卜仕金,徐步,刘学贤,赵宝华,王晓泉. 江苏农业科学. 2010(05)
[10]大肠埃希菌毒力因子ColBM质粒和转录反终止子研究进展[J]. 夏梦芸,汤文,岳华. 动物医学进展. 2010(05)
博士论文
[1]禽大肠杆菌病的诊断及大肠杆菌的耐药机制研究[D]. Muhammad Yaqoob.南京农业大学 2011
[2]鸡源分离菌超广谱β-内酰胺酶基因分型和整合子分子特征[D]. 苑丽.河南农业大学 2010
[3]禽病原性大肠杆菌与尿道致病性大肠杆菌毒力基因相关性与体内外表达差异及其ftsk突变株的研究[D]. 赵李祥.扬州大学 2008
[4]产超广谱β-内酰胺酶革兰阴性菌分子耐药机制研究[D]. 倪朝辉.吉林大学 2007
[5]2004-2006年长春市医院内细菌耐药监测及产超广谱β内酰氨酶基因型特征的研究[D]. 黄晶.吉林大学 2007
[6]禽病原性大肠杆菌的生物学特性及其可能毒力相关基因的鉴定[D]. 陈祥.扬州大学 2006
[7]禽致病性大肠杆菌耐药基因和毒力因子的分子流行病学及HPI Irp1细胞表位作用的研究[D]. 金文杰.扬州大学 2006
硕士论文
[1]鸡源致病性大肠埃希菌耐药基因及毒力基因检测研究[D]. 王利勤.西北农林科技大学 2012
[2]畜禽肠道大肠杆菌耐药性及整合子—基因盒检测[D]. 张辉建.四川农业大学 2011
[3]鸡源禽致病性大肠杆菌分离鉴定及其毒力相关基因分布特征分析[D]. 苏志新.南京农业大学 2011
[4]1800株G-杆菌插入序列共同区和整合子的耐药机制研究[D]. 王凤平.南方医科大学 2010
[5]鸡源大肠杆菌ESBLs基因型检测[D]. 裴亚玲.河南农业大学 2009
[6]禽致病性大肠杆菌流行病学调查及三株大肠杆菌对磷霉素耐药机制的初探[D]. 郑志明.扬州大学 2007
[7]健康人肠道大肠埃希菌耐药性与Ⅰ类整合子关系的研究[D]. 方梅.四川大学 2006
本文编号：3093641
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