含EGFP基因的马疱疹病毒1型新疆株gE基因缺失株的构建

发布时间：2021-03-23 11:32

　　为筛选马鼻肺炎（equine rhinopneumonitis,ER）基因缺失减毒活疫苗的候选毒株,本研究参考GenBank中EHV-1（登录号:KF644579.1）目的基因序列设计同源臂引物,以本地区流行株XJ2015株DNA为模板PCR扩增gE基因同源臂gEH1、gEH1,以EGFP表达盒（CMV+EGFP+polyA）为标记基因,酶切后依次连接至载体pUC-19,成功构建重组质粒pUC-gEH1H2-EGFP。将XJ2015基因组与质粒pUC-gEH1H2-EGFP共转染至RK-13细胞进行同源重组,以EGFP为标记进行gE基因缺失毒株的筛选及纯化,并测定重组毒株效价。结果显示:经5轮荧光噬斑纯化、PCR及测序鉴定,成功获取一株携带EGFP基因的重组毒株XJ2015-△gE-EGFP,且重组毒株效价(10^7.1TCID₅₀/0.1 mL)较原毒株(10^8.8TCID₅₀/0.1 mL)下降约10^1.7TCID₅₀/0.1 mL。采用同源重组技术成功... 

【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(08)北大核心

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 质粒、毒株和细胞
        1.1.2 主要试剂
    1.2 引物设计与合成
    1.3 转移载体的构建
    1.4 细胞转染及观察
    1.5 gE基因缺失病毒的构建
        1.5.1 EHV-1全基因组提取
        1.5.2 gE基因缺失毒株的构建
        1.5.3 重组病毒的纯化
    1.6 重组病毒半数组织感染量测定
2 结 果
    2.1 目的基因扩增及重组质粒鉴定结果
        2.1.1 gEH1、gEH2基因PCR扩增结果
        2.1.2 转移质粒pUC-gEH1H2-EGFP酶切鉴定结果
    2.2 转移质粒pUC-gEH1H2-EGFP EGFP表达盒鉴定结果
    2.3 含EGFP的gE基因缺失株的构建、纯化及鉴定
    2.4 重组毒株效价的测定
3 讨 论
4 结 论


【参考文献】：
期刊论文
[1]马疱疹病毒1型XJ2015株全基因组测序及分析[J]. 胡月,刘建华,鲍子磊,王世民,范斌,贾庆瑞,王雪竹,王思云,冉多良.  动物医学进展. 2018(11)
[2]马疱疹病毒1型主要毒力基因分析及TK基因缺失载体的构建[J]. 范斌,陈卓,刘建华,鲍子磊,胡月,贾钦瑞,王雪竹,冉多良.  中国畜牧兽医. 2018(10)
[3]新疆伊犁地区马疱疹病毒1型ORF30基因序列分析[J]. 范斌,王燕,阿玛古丽·朱马汉,冉多良,刘建华,加尔肯.  中国畜牧兽医. 2018(01)



本文编号：3095714