表达鸭源鸡杆菌flfA的重组乳酸杆菌构建及口服免疫效果评价

发布时间：2021-03-23 15:45

　　蛋鸡（Gallus gallus domesticus）输卵管炎与输卵管囊肿是危害养禽业的重要疫病,引起该病的病原较多,其中鸭源鸡杆菌（Gallibacterium anatis）是比较常见的病原。目前,乳酸菌作为食品级的表达载体在研制活载体疫苗中被广泛应用。本研究以干酪乳酸杆菌（Lactobacillus casei, CECT5276）作为递呈抗原的活菌载体,构建能够稳定表达鸭源鸡杆菌菌毛FlfA蛋白的重组干酪乳酸杆菌,并初步评价其免疫效果。首先将鸭源鸡杆菌flfA基因克隆至穿梭表达质粒pMG36e,然后电转化干酪乳酸杆菌,对重组菌中FlfA蛋白表达和重组菌生长状况、稳定性、存留性能及耐受力等进行检测分析,初步评价重组菌的免疫效果。SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组干酪乳酸杆菌成功表达分子量约为20.3 kD的融合蛋白,该蛋白能与兔抗鸭源鸡杆菌阳性血清发生反应,具有反应原性;生长状况及稳定性等分析显示,目的基因的插入对干酪乳酸杆菌生长无影响,可在宿主菌中稳定遗传;在模拟肠液、胃液及高盐环境中均有较好的耐受力;免疫后第14、28、42 d免疫血清及肠道黏液的特异... 

【文章来源】：农业生物技术学报. 2020,28(09)北大核心CSCD

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【部分图文】：

重组质粒pMG36e-flfA的PCR鉴定(A)和酶切鉴定(B)

图1 重组质粒pMG36e-flfA的PCR鉴定(A)和酶切鉴定(B)重组菌在含红霉素的MRS培养基中连续传20代，隔代抽提细菌基因组DNA，用特异性引物进行PCR鉴定。结果显示，各代次重组菌中均能扩增出长度约549 bp的目的条带(图5)，提示flfA基因能在干酪乳酸杆菌中稳定遗传。

重组杆菌在不同盐浓度的培养基中静置培养5 h，涂板计数，对渗透压耐受能力进行分析(图8)。与对照组比较，不同浓度NaCl处理的重组菌计数有所变化，其中在7%及9%NaCl培养基中重组菌数量明显下降(P<0.05)，但在5%NaCl环境中耐受力较好。2.9 免疫雏鸡血清中特异性IgG抗体检测

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]共表达猪细小病毒VP2与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位重组乳酸杆菌构建及其免疫学初步评价[D]. 王相清.东北农业大学 2009



本文编号：3096038