动物源性粪肠球菌Ebp菌毛亚单位蛋白多抗的制备及其对生物被膜形成的影响

发布时间：2021-03-23 22:24

　　目的研究制备动物源粪肠球菌Ebp菌毛亚单位蛋白多克隆抗体及其可能的免疫学作用。方法运用生物信息学软件对粪肠球菌菌毛EbpA、EbpB和EbpC蛋白的抗原表位进行预测,发现6个抗原表位,将其构建重组质粒,表达、纯化,免疫新西兰大白兔后获得了6个菌毛亚单位多克隆抗体,再进行抗体特异性和生物膜阻断分析。结果 6个菌毛亚单位重组蛋白与预测的分子量相符,均对新西兰大白兔具有免疫原性,EbpA1、EbpA2、EbpA3、EbpB1、EbpC1和EbpC2亚单位蛋白多克隆抗体效价经双向免疫琼脂扩散实验检测分别达到1∶16、1∶8、1∶32、1∶32、1∶64和1∶64。经WB检测和生物膜阻断试验,6个多克隆抗体均具有抗原特异性和野生菌株生物膜阻断作用,而且以EbpA1、EbpC1和EbpA3的生物膜阻断作用最强。结论粪肠球菌EbpA1、EbpC1和EbpA3亚单位蛋白可能为粪肠球菌免疫预防和治疗奠定基础。 

【文章来源】：中国人兽共患病学报. 2020,36(07)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

基因片段PCR扩增结果

重组表达质粒 pET-28a-EbpA1、pET-28a-EbpA2、pET-28a-EbpA3、pET-28a-EbpC1、pET-28a-EbpC2和pET-28a-EF1092A (EbpB)双酶切结果与预期结果相一致(图2),即在相应的质粒和片段处分别出现了相应的条带,而且经比对后序列正确。2.3 重组蛋白的表达及鉴定

优化条件后,重组质粒pET-28a-EbpA1、pET-28a-EbpA2、pET-28a-EbpA3、pET-28a-EbpC1、pET-28a-EbpC2和pET-28a-EbpB1的表达菌最佳诱导表达条件为:诱导温度37 ℃、IPTG终浓度0.2 mmol/L、诱导时间6 h。重组蛋白EbpA1和EbpA2主要以包涵体形式表达,重组蛋白EbpA3、EbpC1、EbpC2和EbpB1主要以可溶性形式表达。各重组蛋白大小分别为46.7、45.0、39.4、50.0、39.3、36.0 kD,与预期结果一致,其纯化结果见图3。2.4 多抗效价的测定

【参考文献】：
期刊论文
[1]河南省部分地区猪和鸡源粪肠球菌的分离鉴定与耐药性分析[J]. 李金磊,董鹏,狄元冉,方忠意,高延玲,周红霞,吴志明.  动物医学进展. 2018(04)
[2]布鲁氏菌病亚单位疫苗研究进展[J]. 夏嘉跃,殷德辉.  系统医学. 2018(01)
[3]不同动物源肠球菌耐药性及毒力基因测定与分析[J]. 陈丽颖,张留君,秦明明,陈飞,金钺,胡慧,王亚宾.  中国人兽共患病学报. 2017(11)
[4]2005—2014年CHINET肠球菌属细菌耐药性监测[J]. 杨青,俞云松,林洁,倪语星,孙景勇,徐英春,张小江,孙自镛,陈中举,汪复,朱德妹,胡付品,蒋晓飞,王传清,王爱敏,卓超,苏丹虹,胡云建,艾效曼,黄文祥,贾蓓,张朝霞,季萍,张泓,孔菁,魏莲花,吴玲,徐元宏,沈继录,单斌,杜艳,胡志东,李金,谢轶,康梅,韩艳秋,郭素芳,褚云卓,田素飞.  中国感染与化疗杂志. 2016(02)
[5]感染仔猪粪肠球菌不同分离株的鉴定及毒力基因检测[J]. 王亚宾,陈丽颖,张红英,刘磊,程金平,崔保安.  中国兽医学报. 2010(05)
[6]肠球菌研究进展[J]. 周霞,王晓兰,剡根强,马勋.  石河子大学学报(自然科学版). 2008(06)
[7]粪肠球菌生物膜的形成及影响因素[J]. 李静,马勋.  中国预防兽医学报. 2008(07)



本文编号：3096526