SFN蛋白对PCV2感染PK-15细胞的功能研究

发布时间：2021-03-25 03:40

　　猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type2, PCV2）是迄今发现的一种最小的动物病毒,具有致病性,可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）。其主要的临床表现为：呼吸道症状、贫血、黄疸、生长迟缓和进行性消瘦等。PCV2能引起机体的免疫抑制,易与多种细菌、病毒混合感染。1991年首次在加拿大南部发现PMWS,我国于2000年证实在猪群中存在PCV2的感染。目前该病已遍及世界多个国家和地区,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。14-3-3蛋白是一类能与磷酸化蛋白结合或分离,调节细胞生理功能活性的蛋白质。其具有伴侣蛋白的性质,广泛参与细胞周期的调控,细胞的增殖与分化,信号转导,DNA损伤修复,肿瘤的形成等生理活动。14-3-3蛋白属于一类高度保守的蛋白质家族,在真核动物中具有高度保守性,按其蛋白结构的亚基不同,分为7个亚型（a,γ,β,η,θ,σ和ζ）。其中14-3-3σ蛋白又称为stratifin（SFN）,分子大小约为28kDa。研究表明,14-3-3σ可与细胞周期蛋白复合物结合,调控病毒在细胞内的复制；还能与一些抑癌基因相互作用,调节细胞周期的检查点,对细胞的增殖... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略语表（Abbreviation）
1. 前言
    1.1 猪圆环病毒2型概述
    1.2 PCV2的基因结构及蛋白质
    1.3 PCV2在宿主细胞中的复制增殖
    1.4 病毒感染对细胞周期的影响
    1.5 14-3-3蛋白简介
        1.5.1 14-3-3蛋白家族
        1.5.2 14-3-3蛋白的结构
        1.5.3 14-3-3蛋白的功能
2. 研究目的与意义
3. 材料与方法
    3.1 试验材料
        3.1.1 病毒、质粒、细胞和菌株
        3.1.2 试剂和试剂盒
        3.1.3 培养基和试剂的配制
        3.1.4 实验仪器
    3.2 试验方法
        3.2.1 PK-15细胞中SFN基因的克隆
        3.2.2 真核表达质粒pcDNA3.1-SFN的构建
        3.2.3 真核蛋白的表达和检测
        3.2.4 真核蛋白表达后对PCV2增殖的影响
        3.2.5 细胞周期的检测
        3.2.6 数据分析
4. 结果与分析
    4.1 PK-15细胞中SFN基因的扩增
    4.2 重组质粒pcDNA3.1（+）-SFN的构建与鉴定
    4.3 间接免疫荧光检测重组真核蛋白在PK-15细胞中的表达
    4.4 Western Blot检测SFN蛋白的表达变化
    4.5 Real-Time PCR检测SFN对PCV2增殖的影响
    4.6 流式细胞检测SFN对细胞周期的影响
    4.7 流式细胞检测真核表达SFN后接种PCV2对细胞周期的影响
5. 讨论
    5.1 选择PK-15细胞作为PCV2的增殖细胞
    5.2 SFN在PK-15细胞中的真核表达
    5.3 SFN在PK-15细胞内对PCV2增殖的影响
    5.4 SFN对PK-15细胞周期S期的影响
    5.5 PCV2对PK-15细胞周期的影响
6. 结论
参考文献
致谢



本文编号：3098950