猪脾转移因子的制备及其检测方法的建立

发布时间：2021-03-25 07:37

　　本试验以健康猪脾脏为原料，分别采用常规的透析法与超滤法各生产3批转移因子。通过对猪脾TF主要成分多肽与核糖含量的检测及其实际生产情况的评估，比较这两种工艺的优劣，选择出最适合实际情况的生产工艺。本试验制订了超滤法生产猪脾TF的检验规程，用于保证猪脾转移因子的质量，规范生产过程。首先，建立了相关的原料药标准，猪脾TF外观呈淡黄色，澄清透明，有特殊的腥味。pH值为6.5。重金属、砷盐、氯化物的检测结果显示各组TF供试品的颜色均比标准品浅，证明含量在控制范围内。蛋白质检测呈阴性。超滤法生产的猪脾TF多肽的含量为8.53mg/ml以上,核糖的含量为218.34μg/ml以上。经紫外光谱分析,猪脾TF在波长250-260nm处有峰值，大分子物质所占比例小于0.5%，游离氨基酸含量大于4mg/ml。对猪脾TF进行无菌检测、过敏反应检测、安全性检测、热源检验，结果均无异常。在E-玫瑰花环试验中，猪脾TF能使花环的数量与形成率都显著提高。细胞吞噬功能试验中，猪脾TF能显著提高巨噬细胞的吞噬指数与吞噬率。通过猪脾转移因子原液及各层析组分阻断小鼠免疫抑制模型的试验，结果表明TF原液与各组分对免疫抑制小鼠的... 

【文章来源】：江西农业大学江西省

【文章页数】：36 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一章 文献综述
    1 佐剂的发展历程
        1.1 佐剂的研究进程
        1.2 佐剂的类型
        1.3 佐剂的作用方式
        1.4 佐剂作用机理：
        1.5 佐剂研究的新趋向
    2 转移因子的发现及研究现状
        2.1 TF 的分类
        2.2 TF 的理化特性
        2.3 TF 的制备方法
        2.4 TF 质量控制标准
    3 TF 的功能
    4 TF 的作用机制
    5 TF的生物学特性研究
        5.1 TF 是非抗原物质
        5.2 TF 的特异性与非特异性
    6 TF 在临床上的应用
        6.1 TF 在人医临的应用
            6.1.1 呼吸道疾病
            6.1.2 皮肤病
            6.1.3 恶性肿瘤
            6.1.4 其他疾病
        6.2 TF 在兽医临床上的应用
            6.2.1 TF 在家畜疾病防治上的应用
            6.2.2 TF 在家禽疾病防治上的应用
            6.2.3 TF 在宠物疾病防治上的应用
    7 研究的目的和意义
第二章 猪脾转移因子的制备及检测方法的建立
    1.材料与方法
        1.1 原材料
        1.2 试验动物
        1.3 主要药物与试剂
        1.4 主要试验仪器
    2.猪脾转移因子的制备
        2.1 方法的筛选
            2.1.1 冻融透析法
            2.1.2 常规超滤法
            2.1.3 改良超滤法
    3.猪脾转移因子质量检测标准的建立
        3.1 制定猪脾转移因子的原料药标准
            3.1.1 性状
            3.1.2 一般杂质检查
            3.1.3 氯化物的检测
            3.1.4 蛋白质的检测
        3.2 猪脾转移因子生物学特性检测
            3.2.1 无菌检测
            3.2.2 过敏反应检测
            3.2.3 安全性检测
            3.2.4 热源检验
        3.3 对 TF 的主要成分含量的测定
            3.3.1 多肽含量的测定
            3.3.2 核糖含量的测定
        3.4 转移因子分子量和氨基酸含量的检测
            3.4.1 转移因子分子量的检测
            3.4.2 转移因子氨基酸的检测
            3.4.3 转移因子层析分离
        3.5 转移因子活性的测定
            3.5.1 E-玫瑰花环试验
            3.5.2 小鼠巨噬细胞吞噬功能试验
            3.5.3 猪脾转移因子阻断小鼠免疫模型的试验
    4.结果与分析
        4.1 拟定为原料药标准的检测结果
            4.1.1 性状
            4.1.2 一般杂质
            4.1.3 蛋白质检测
        4.2 TF 主要成分的测定结果
            4.2.1 改良超滤法的产品含量测定结果
            4.2.2 超滤法生产的 TF 分子量和氨基酸的检测结果
        4.3 生物学检测结果
        4.4 体内外活性检测结果
            4.4.1 小鼠巨噬细胞吞噬功能试验
            4.4.2 E-玫瑰花环试验
            4.4.3 猪脾转移因子阻断小鼠免疫模型的试验
    5.讨论
    6.小结
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]转移因子治疗小儿反复呼吸道感染疗效分析[J]. 郑君英.  中华医院感染学杂志. 2013(04)
[2]猪脾转移因子的制备及临床应用[J]. 乔宏兴,白静.  中国畜牧兽医. 2011(07)
[3]鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症油乳剂灭活疫苗的免疫效力及保护试验[J]. 兰信海,冯永胜.  山东畜牧兽医. 2010(07)
[4]利用转移因子提高猪瘟免疫效果的研究[J]. 刘雁,李坚,袁明龙,朱伟明.  上海畜牧兽医通讯. 2009(06)
[5]猪脾转移因子（TF）的生物活性及临床疗效研究[J]. 刘进辉,周建华,刘湘新,杨丹丹,谭妍.  中兽医医药杂志. 2007(06)
[6]鸡和猪脾转移因子活性组分的提取及免疫活性研究[J]. 凌红丽,陆承平,王宏华,郭占军,郭艳萍,孙海新,王雷.  畜牧与兽医. 2007(04)
[7]疫苗免疫佐剂及其研究进展[J]. 臧力铭,胡松华.  黑龙江畜牧兽医. 2004(03)
[8]转移因子在动物医学上的研究进展[J]. 何理平.  湖北畜牧兽医. 2003(06)
[9]转移因子对鸡传染性喉气管炎灭活疫苗作用的研究[J]. 黄建文,何维明,姜艳芬,马秋明,刘璐,朱旭东.  西北农业学报. 2003(01)
[10]动物转移因子研究与在畜禽疫病防治中de应用[J]. 乔彦良.  中国禽业导刊. 2002(23)



本文编号：3099316