应用CRISPR/Cas9技术抑制伪狂犬病病毒的再激活

发布时间：2021-03-25 10:27

　　伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的多种家畜及野生动物的一种以发热、奇痒、脑脊髓炎、呼吸和神经系统障碍为主要特征的急性传染病。PRV是一种嗜神经性病毒,感染猪只后,可在其体内建立潜伏感染。疫苗在该病的防控中发挥了重要的作用,但是现有疫苗不能够阻止潜伏感染的建立与再激活,而且血清学方法不能够检测到处于潜伏感染状态的PRV。在一定条件下,潜伏状态的PRV可以被重新激活,从而导致排毒并引发疫情,这非常不利于PR的防控及根除。因此,研制一种能够清除潜伏感染状态PRV的方法极为必要。本研究首先利用同源重组的方法构建了一株重组报告病毒rPRVTJ-US9-EGFP,经荧光观察、PCR和一步生长曲线鉴定,获得了一株能稳定表达绿色荧光、且生长特性与亲本病毒一致的报告病毒。我们通过分离新生鼠背根神经节（Dorsal root ganglion,DRG）获取感觉神经细胞,并以抗βⅢ-tubulin抗体利用间接免疫荧光试验对神经细胞进行了鉴定。为了获得纯净的感觉神经细胞,我们利用抑制有丝分裂的药物阿糖胞苷（Cytosine arab... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PRV的复制周期（引自Pomeranzetal.,2005）

16图 2.2 重组病毒 rPRVTJ-US9-EGFP 的鉴定Fig. 2.2 Identification of rPRVTJ-US9-EGFPA 为重组病毒的荧光表达情况；B 为对 gB 和 EGFP 基因的 PCR 鉴定；C 为重组病毒的一步生长曲 获得所需的小鼠感觉神经元新生鼠分离的 DRG 经消化后，接种到 96 孔细胞培养板，培养 3 d 后可见明显的轴突断延长。应用抗 βⅢ-tubulin 抗体进行间接免疫荧光试验，可见典型的神经胞体和轴突形

硕士学位论文 第二章 伪狂犬病病毒潜伏感 EGFP 基因的存在（图 2.2B），该重组病毒与 PRVTJ 株亲本毒相比，C），蚀斑大小和形态无明显差异。

【参考文献】：
期刊论文
[1]CRISPR/Cas9技术在生物医学领域的非病毒及病毒载体[J]. 何治尧,秦舟,门可,杨阳,徐珽,魏于全.  中国科学:生命科学. 2017(11)
[2]CRISPR/Cas系统最新研究进展[J]. 刘妮,陆沁,刘娟,陈航.  生物技术通报. 2017(02)
[3]猪伪狂犬病流行病学特征、净化技术及其应用示范[J]. 何启盖,童光志,杨汉春,张桂红,姜平,张永光,张改平,伍少钦,章洪皲.  中国畜牧杂志. 2015(24)
[4]免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定[J]. 童武,张青占,郑浩,刘飞,姜一峰,单同领,周艳君,童光志.  中国动物传染病学报. 2013(03)
[5]猪伪狂犬病病毒新流行株的分离鉴定及抗原差异性分析[J]. 彭金美,安同庆,赵鸿远,刘益民,陈家锃,冷超粮,孙艳,常丹,田志军,童光志.  中国预防兽医学报. 2013(01)

博士论文
[1]猪伪狂犬病病毒（HNX株）的生物学特性与比较基因组学研究[D]. 余腾.华中农业大学 2016
[2]伪狂犬病病毒变异株基因工程疫苗研究[D]. 胡睿铭.华中农业大学 2016

硕士论文
[1]应用CRISPR/Cas9技术快速敲除伪狂犬病毒毒力基因的研究[D]. 刘继婷.吉林农业大学 2017
[2]潜伏感染期伪狂犬病病毒EPO基因甲基化状态分析[D]. 余秋颖.河南农业大学 2014
[3]含GFP报告基因的伪狂犬病病毒Ea株gG基因缺失重组病毒的构建[D]. 王鑫.河南农业大学 2008



本文编号：3099532