鸭瘟里默氏杆菌hsp15基因克

发布时间：2021-03-27 03:35

　　鸭疫里默氏杆菌病是鸭、鹅和多种其它禽类的一种接触传染性疾病,该病的发病率和死亡率较高,已成为目前危害世界各国养鸭业最为严重的传染病之一。目前,国内鸭疫里默氏杆菌病流行的血清型以1型鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer, RA）出现频率最高,本研究在测定血清1型RA全基因组序列基础上,通过生物信息学分析获得RA小热休克蛋白基因hspl5,采用pET-32a（+）原核表达载体对该基因进行表达和鉴定,并制备HSP15重组蛋白多克隆抗体,为该病的进一步深入研究奠定基础。首先,通过对血清1型RA全基因组序列进行初步分析,确定RA hsp15基因完整开放阅读框；其次,通过HSP15蛋白序列搜索比对、理化特性、亚细胞定位、跨膜区、疏水性、抗原性进行分析。结果表明：RA hsp15基因大小为435 bp,密码子有效数（effective number of codons, Nc）为43.806,RA hsp15基因含有一个连续的2个稀有密码子串；编码蛋白由144个氨基酸组成,该蛋白分子质量为16.77 kDa,理论等电点p1为7.15,HSP15蛋白无信号肽,无跨膜区：疏水... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
缩略词表
一、引言
    1 鸭疫里默氏杆菌病概述
        1.1 病原学
        1.2 流行病学
        1.3 临床症状和病理变化
        1.4 诊断
    2 鸭疫里默氏杆菌的分子生物学研究
    3 HSP15的研究进展
    4 选题的目的和意义
二、实验研究
    1 材料
        1.1 菌株和载体
        1.2 实验动物
        1.3 主要药品及试剂的配制
            1.3.1 T克隆及亚克隆相关溶液
            1.3.2 蛋白表达及纯化主要试剂
            1.3.3 多克隆抗体制备主要试剂
            1.3.4 Western blotting试剂
        1.4 主要仪器及设备
    2 方法
        2.1 RAHSP15基因生物信息学分析方法
            2.1.1 RAhsp15基因分子特性分析
            2.1.2 RAHSP15蛋白质的分子特性分析
        2.2 RAHSP15基因的原核表达、纯化及其抗体制备
            2.2.1 RA基因组DNA的提取
            2.2.2 RAhsp15基因片段的获取
            2.2.3 目的片段的回收及未端加A
            2.2.4 hsp15基因的T克隆
            2.2.5 RA hsp15基因原核表达载体的构建与鉴定
            2.2.6 hsp15基因的原核表达和表达蛋白的鉴定、纯化
            2.2.7 兔抗重组表达蛋白高免血清的制备与纯化
    3 结果
        3.1 RAHSP15基因生物信息学分析结果
        3.2 RAHSP15蛋白的生物信息学分析结果
            3.2.1 蛋白质组成及理化特性分析
            3.2.2 氨基酸序列比对
            3.2.3 信号肽切割位点预测
            3.2.4 跨膜区预测
            3.2.5 抗原性分析
            3.2.6 功能位点预测
            3.2.7 二级结构预测
            3.2.8 三级结构预测
            3.2.9 蛋白质亚细胞定位分析
        3.3 RAHSP15基因的原核表达、纯化及其抗体制备实验结果
            3.3.1 目的基因的扩增及T克隆鉴定
            3.3.2 重组表达质粒的鉴定
            3.3.3 重组蛋白在大肠杆菌的表达及分布
            3.3.4 重组蛋白表达条件的优化
            3.3.5 表达产物的鉴定及纯化
            3.3.6 多克隆抗体效价测定
    4 讨论
        4.1 RAHSP15基因生物信息学分析
        4.2 RAHSP15基因的原核表达、纯化及其抗体制备
三、结论
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3102804