NS1蛋白点突变对猪流感病毒感染细胞的影响

发布时间：2021-03-27 20:06

　　以H1N1亚型猪流感病毒A∕swine∕Shanghai∕3∕2014为模板,选择核定位序列（Nuclear localization sequence,NLS1）与核输出序列（Nuclear export sequence,NES）区域中5个保守关键氨基酸突变为丙氨酸,构建真核表达载体,分析NLS1和NES区域中影响NS1蛋白定位及细胞因子水平的氨基酸位点。结果表明:NS1L36A、NS1L141A、NS1L146A与野生型NS1蛋白相似,转染后在细胞质和细胞核中均可检测到蛋白表达。NS1R38A有少量进入细胞核,而NS1L144A蛋白主要分布在细胞质中,不进核。NS1R38A和NS1L144A表达载体转染细胞,细胞内Ⅰ型干扰素β（IFN-β）和抗病毒蛋白（OAS-1）水平升高,与野生型NS1蛋白比较差异显著。因此,NS1蛋白中第38位和第144位氨基酸的突变可以减轻其对宿主细胞抗病毒免疫应答的抑制,但这两个突变蛋白在细胞中定位和分布不同显示其作用机制可能不同。 

【文章来源】：上海农业学报. 2020,36(06)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

NS1点突变质粒的构建与鉴定

NS1及其突变体在A549细胞中的表达

将各质粒分别转染A549细胞,利用间接免疫荧光分析NS1及其点突变蛋白在细胞中的定位情况。结果表明:在转染12 h、24 h、36 h后,NS1、NS1L36A、NS1L141A、NS1L146A均匀分布在A549的细胞核和细胞质中,NS1L36A、NS1L141A、NS1L146A突变体蛋白与野生型NS1蛋白在细胞中的分布没有差异;在转染24 h时,NS1R38A在细胞核和细胞质中均有分布,在转染36 h时,NS1R38A蛋白主要在细胞质中,细胞核中很少。而NS1L144A主要分布在细胞质中,基本不分布于细胞核,说明NS1蛋白中第144位氨基酸与蛋白定位密切相关(图3)。2.4 荧光定量PCR检测免疫细胞因子的m RNA转录水平

【参考文献】：
期刊论文
[1]甲型流感病毒NS1、NS2和NS3蛋白的研究进展[J]. 谭伟,谢芝勋.  畜牧兽医学报. 2014(12)



本文编号：3104134